Snuit Extension Response (PER) assay in Drosophila

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Snuit uitbreiding reactie of PER is een smaak gedrag test die is gebruikt in vliegt als in honingbijen. Toen de snuit contact maakt met een mooie stof, de vlieg breidt zijn slurf om te consumeren van de stof. Oplossingen van verschillende suikers zijn zeer aantrekkelijk voor de vliegen.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Shiraiwa, T., Carlson, J. R. Proboscis Extension Response (PER) Assay in Drosophila. J. Vis. Exp. (3), e193, doi:10.3791/193 (2007).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Snuit extensie respons (PER) is een smaak gedrag test die is gebruikt in vliegt als in honingbijen.

Op het oppervlak van de mond van de vlieg (labellum), zijn er haar-achtige structuren, genaamd sensilla die smaak neuronen huizen. Wanneer een aantrekkelijke stof maakt contact met de labellum, de vlieg breidt zijn slurf te consumeren het materiaal. Snuit Extension Response (PER) test meet deze smaak gedrag reactie, en het is een bruikbare methode om te leren over voedsel voorkeur in een enkele vlieg. Oplossingen van verschillende suikers, zoals sucrose, glucose en fructose, zijn zeer aantrekkelijk voor de vliegen. Het effect van aversieve stoffen kunnen ook worden getest als vermindering van PER bij menging in een zoete oplossing.

Ondanks de eenvoud van de basis-procedure, er zijn veel dingen die het kan verhinderen te werken. Een van de factoren die aandacht verdient, is de vlieg responsieve toestand. De benodigde tijd om de honger vliegen te brengen naar de juiste responsieve toestand varieert drastisch van 36 tot 72 uur. We een reeks controles om de vlieg staat en die het mogelijk maakt uit de exploitatie van niet-responsieve of hyper-responsieve individuele dieren te evalueren. Een andere belangrijke factor is de invloed niveau en de positie van het contact met de labellum, die moeilijk te beschrijven met woorden. Deze video presentatie toont al deze samen met een aantal andere verbeteringen die de reproduceerbaarheid van deze methode zou toenemen.

Protocol

Uithongering

  1. De eerste, verhongeren de vlieg.
  2. Leg een klein stukje van Kim-wipe doorweekt met water in een lege flacon.
  3. Transfer 20-30 weldoorvoede vliegt naar de lege flacon.
  4. Controleer om de 12 -24 uur om er zeker van het papier vochtig is.
  5. Verhongeren het vliegen voor 36 tot 72 uur.

Bevestig de fly

  1. Neem een ​​vlieg in een afzuiger.
  2. Plaats een 200 ul geel tip over de opening. Tegelijkertijd flippen en blazen, kunt u knijp de vliegen in de gele tip.
  3. Voorzichtig toe te passen wat lucht op de vlieg duwen tot een punt waar het niet kan bewegen.
  4. Door het gebruik van een scheermes, een merkteken ongeveer ter oog van de vlieg, dan zuigen de vlieg terug en sneed de tip.
  5. Voorzichtig terug blazen vliegen naar positie, maar vlak voor het bereiken van het einde, maak een schuin afsnijden op de plaats waar de proboscis zal worden gevestigd. U kunt dit doen zonder deze schuin afsnijden, maar het zou zeker de volgende proces gemakkelijker te maken.

Bereid sucrose wieken

  1. Twist een 6 mm brede strook Kimwipes ® papier in een draad, en trek uit elkaar in kleine stukjes van de kegel-achtige vorm van Wick (<1 cm).
  2. Deze kleine wieken werden ondergedompeld in sucrose oplossingen of water en aan de proboscis door het maken van contact.

Bereid controles en proefdieren

  1. Voor het testen een tastants, geven een 4% sucrose oplossing voor het vliegen. Dit werkt als een positieve controle. Gooi alle vliegen die niet reageren.
  2. Vervolgens testen dH 2 0 on the fly. Deze fungeren als een negatieve controle. Gooi het vliegen als het deed reageren.
  3. Test deze controles na het testen van uw tastants.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

In deze presentatie hebben we doorlopen alle stappen voor de Proboscis extensie respons test. De methode klinkt vrij eenvoudig, maar net als in veel ander gedrag testen, veel kleine dingen kunnen de test te voorkomen werken. We hebben meegemaakt veel van dergelijke stappen die zorgvuldige aandacht nodig hebben. Hier, ik reemphasize een aantal van de belangrijkste factoren.

Een zo'n factor is de vorm van de lont. Ik heb laten zien een paar van de goede voorbeelden, maar natuurlijk in werkelijkheid alles zou een continu spectrum tussen zeer goed en zeer slecht zijn. In het begin, gebruikt u mogelijk dingen dicht bij de zeer goede kant, maar dag na dag uw standaard kan gaan beetje bij beetje verschuiven naar de niet-zo-goed bereik. Menselijke waarneming van de zogenaamde "goed" kan zeer gemakkelijk onbewust verschuiven. Een manier om dit te voorkomen is om een ​​beeld te krijgen van de lont die u gebruikt in uw experimenten te nemen, en alle foto's naast elkaar vergelijken door. Of, in ieder geval neem een ​​foto van de lonten die werkte heel goed, en staar naar het voor een tijdje voordat het testen PERS.

Een ander belangrijk ding is de impact niveau van het contact. Dit is gemakkelijker om te gaan met omdat het doel is om het contact zo zacht mogelijk te maken. Als je de vlieg hoofd bewegen niet zien helemaal niet, dat is het beste.

De honger voorwaarde is de moeilijkste factor om te controleren. In veel smaak of geur gedrag testen, is een hongersnood van 24 uur zeer vaak gebruikt. 24 uur zou erg handig zijn voor mensen om het experiment te doen, maar als je je vliegt achter in een zeer goede staat, is dit een vrij korte periode. Maar zelfs als je een rijke vlieg voedsel gebruikt, en precies de controle van de dichtheid, kan het venster voor het testen van PER variëren van 36 uur tot 72 uur. Dus, als een experiment, ik moet zeggen dat het erg lastig voor mensen. Er is nog een factor die het moeilijker maken voor onderzoekers. Als een zaak van de feiten, zou er een groot aantal partijen, waarbij het venster voor het experiment zou kunnen worden zeer kort zijn, of misschien niet eens bestaan.

Dus er zijn een aantal belangrijke hindernissen je moet doorlopen, maar het belangrijkste is de positieve en negatieve controle die ik noemde. Door aan die standaard zeer strikt, zult u in staat om betrouwbare gegevens te verzamelen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

Wij danken Paul Graham voor het serveren als een camera man in de video-presentatie.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
HDR-HC1 Camera Sony Corporation
SMZ800 Microscope Nikon Instruments
P-IBSS Camera Adapter Nikon Instruments
1x DC10LN Camera Adapter Optem, Qioptiq Inc.
257010 Camera Adapter Optem, Qioptiq Inc.
TREKKER Mk2 Tripod BENBO
Gorillapod SLR Tripod Joby
iMac G5 Computer Apple
Power Mac G5 Computer Apple
iMovie Software Apple
MPEG Streamclip Software SQUARED 5

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Dethier, V. G. The Hungry Fly. Harvard University Press. Cambridge. (1976).

Comments

2 Comments

  1.  Comments about the starvation protocol. I am currently performing research on fly appetitive learning and test fly sugar response as a control with an assay similar to the one described in Kim et al. (J Neurosci. ²007 Jul 18;²7(²9):7640-7.) In my experiments flies are starved for ²1h before conditioning at ²5°C. In my experience, the temperature during starvation is of huge importance: In preliminary experiments, I got similar sugar responses for flies starved for 7h at ²5° and ²4h at 18°. So information about the temperature during starvation is highly welcomed. The density of flies during starvation also appeared critical. Using bigger tubes, I did another quick experiment transferring 40 or 80 flies in my tubes for starvation. One day after, the majority of the flies were dead while kept in groups of 80, while no death was seen in the tubes of 40 flies. So maybe a difference from ²0 to 30 flies in the vials might have big influence.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 10, 2008 - 8:05 AM
  2. I am very interested in the drosophila probosics extension response assay, and want to know more about this assay methods. Thank you.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    November 20, 2011 - 12:46 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics