IonFlux: תיקון אוטומטי של קלאמפ מערכת עם פשטות Reader פלייט - פרסומת

Application Notes
 

Sign in to register to receive emails with product information.

Summary

קלאמפ אוטומטי IonFlux מערכת תיקון מספק תפוקה גבוהה, העלות האפקטיבית ערוץ יון ההקרנה עבור מגוון רחב של יישומים electrophysiology. חילופי מתחם מהיר, עלות נמוכה לכל נקודת נתונים, ונוח פורמטים צלחת גם להפוך את המערכת אידיאלית עבור שני ליגנד, מתח, מגודרת מטרות ערוץ יון. HT IonFlux מספק המובילים 10,000 נקודות נתונים ליום, בעוד IonFlux 16 מספק מהדק נכון אוטומטיים תיקון ביצועים בעלות על מעטה של ​​תיקון ידני מהדק.

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

תעלות יונים לשחק תפקיד קריטי בוויסות של מערכת העצבים המרכזית ואת הפיזיולוגיה של העצבים והשרירים. כתוצאה מכך הם היו מעורבים בתנאים מחלות רבות כגון: סוכרת, אפילפסיה, והם מובילים מטרות לתרופות חדשות. שיטת התיקון הוא מהדק את תקן הזהב להערכת ערוץ יון פעילות במבחנה. כאשר מיושם באופן ידני, assay מהדק תיקון מוגבל סביב 10 נקודות נתונים ליום, וזה הרבה מתחת לסף הדרוש לגילוי סמים משמעותית את מאמצי הפיתוח. הפלטפורמה IonFlux משתמש בטכנולוגיה קניינית פלייט ובכן Microfluidic כדי להפוך את מהדק תיקון שיטת בפורמט נוח גבוהה צלחת גם התפוקה שמגיע בשתי תצורות מדרגי כדי להכיל מגוון רחב של יישומים, כולל גם מתח ו-ליגנד מגודרת תעלות יונים. HT IonFlux מתאים להקרנה תפוקה גבוהה גילוי סמים ופיתוח. גרסה זו הוא מסוגל לייצר עד 10,000 נקודות נתונים ליום. עבור תפוקה נוספים, עד ארבע מערכות IonFlux HT יכול להיות ערוכים סביב רובוט נוזלי טיפול יחיד עד 40,000 נקודות נתונים ליום. עלות נמוכה לכל נקודת נתונים והשימוש מתחם מינימלי להפוך את האידיאל IonFlux HT להקרנה התרופה, פיתוח תרופות, טוקסיקולוגיה בטיחות, מחקר יון ערוץ. IonFlux 16 הוא פתרון חסכוני עבור יישומים התפוקה מתונה כגון פיתוח קו התא, הקרנת מוטציה, ופיתוח assay. בפעם הראשונה אי פעם, למשתמשים יש גישה נכונה טכנולוגיה תיקון אוטומטי מהדק במחיר דומה לבוש תיקון ידני מהדק.

Protocol

1. IonFlux סקירת מערכת

  1. מערכת IonFlux מורכב מכשיר benchtop, מכשיר microfluidic בפורמט קנייני SBS סטנדרטיים צלחת היטב, רכישה מלאה חבילת תוכנה לניתוח.
  2. שלא כמו במכשירים אחרים מהדק תיקון אוטומטי, הקורא IonFlux שומרת על טביעת רגל קטנה מאוד מקרוב, אשר דומה קורא צלחת. זה נכנס בקלות על benchtop, ויש אינטגרציה זמין עם רובוטים אוטומציה נפוץ בשימוש במעבדה, המאפשר IonFlux כדי להתאים בצורה חלקה לתוך הקיים workflows תפוקה גבוהה ההקרנה וכן מעבדות מחקר.
  3. IonFlux מנצל הקלטה אנסמבל, כלומר אוכלוסייה של 20 תאים תוקנו בכל אזור הקלטה, וזרמים שלהם בממוצע לייצר נקודת נתונים יחיד. גישה זו מייצרת שיעור הצלחה גבוה מקטינה את ההשפעה של השתנות התא.
  4. כל צלחת 384 גם יכול לעבד 256 תרכובות ייחודיות לייצר 512 נקודות נתונים. צלחת 96-היטב בשימוש עם 16 תהליכים IonFlux 64 תרכובות ומייצרת 128 נקודות נתונים.
  5. בעל יכולת לרוץ גבוה electrophysiology מסכי התפוקה פותחת את הדלת למגוון רחב של ניסויים יון ערוץ. יישומים נפוצים כוללים ניסויים עם ערוצי מגודרת ליגנד כגון קולטני GABA ו ניקוטינית, ערוצי מגודרת מתח כגון נתרן ושל תעלות אשלגן, טוקסיקולוגיה בטיחות התמקדות ערוץ אשלגן hERG. מסכי קו Mutant ותא ניתן גם לבצע. יתר על כן, IonFlux מאפשר ניתוח של הביטוי הפונקציונלי של תעלות יונים.

2. ניתוח נתונים רכישה

  1. מערכת IonFlux מגיע עם חבילת תוכנה מתקדמים לרכישת נתונים וניתוח. לאחר התוכנה נטען, המשתמש יראה שלושה מסכים עיקריים: הגדרת, ריצה, וניתוח נתונים.
  2. מצב התקנה מכיל את כל הפקדים הדרושים כדי להגדיר ניסוי. במצב זה, ניסויים מאותחלים צלחת שלם או חצי המיועד. הטבלה של תרכובות מנוצל מיובא גם במצב הגדרת.
  3. בכרטיסייה רצף ניסויית, פרמטרים מוגדרים עבור ארבעת השלבים של הניסוי: ראש הממשלה, מלכודת, הפסקה, ועל רכישת נתונים. הנה, פרוטוקולים מתח מוגדרים.
  4. מצב Runtime מציג את הנתונים כפי שהם נאספים. חלון בזמן אמת טאטא מציגה זרמים שנוצר במהלך הדופק בכל מתח עבור כל ערוץ. התקדמות הניסוי הוא דיווח גם.
  5. מצב ניתוח נתונים מאפשר לסקור ניתוח מהיר של ניסויים הושלמה. כלים ניתנים לצפייה לטאטא עקבות נתונים, כמו גם עבור כניסה אירועים ספציפיים כגון מבוא המתחם. מודול מפת Hit עוזר לזהות את תרכובות המבטיחות ביותר במסך. כל הנתונים יכול בקלות להיות מיוצא בפורמט csv. ליישומים מסד הנתונים Excel ו אחרים.

3. IonFlux יישומים - מאפננים GABAA

  1. מגוון רחב של ניסויים מסכי היעד יכול להתבצע על מערכת IonFlux. הנה, לדוגמה הוא הוכיח assay עבור מאפננים של קולטן אנושי GABA-A, המתבטא HEK293 תאים Millipore. ערוץ זה ליגנד-מגודרת כלוריד מעורב דיכוי מערכת העצבים המרכזית, ובכך הוא מהווה יעד תרופה חשובה, אפילפסיה נדודי שינה, חרדה,.
  2. כדי לבצע מבחני המיון, הרכבים תא נחשפו EC20 ריכוזים של ליגנד GABA הילידים, בנוכחות ריכוזים עולים של חומרים אפנן אשר נקלטות באתר allosteric על קולטן.
  3. מגרשים מראים מנה תגובה עקומות שני מאפננים allosteric חיובית בכיתה בנזודיאזפינים, triazolam דהיינו diazepam, אשר EC50 ערכים של 3 ננומטר 0.5 מיקרומטר התקבלו.
  4. השינוי אפנן תלויי ב GABA לכאורה זיקה נקבע אז על ידי במצטבר יישום ריכוזים שונים GABA בנוכחות ריכוז קבוע של אפנן, במקרה זה, diazepam 3 מיקרומטר.
  5. סוג זה של הניסוי מופעל על ידי עיצוב זרימה דרך fluidic זמינות המכשירים IonFlux. EC50 עבור GABA הועבר על ידי כ 1 מיקרומטר לריכוזים נמוכים יותר בשל זיקה מחייבת מוגברת בנוכחות אפנן.

4. IonFlux יישומים - חוסמי ערוץ hNav1.8 העצבית נתרן

  1. המכשיר גם מאפשר IonFlux ניסויים פרמקולוגיים אחרים, כולל בדוגמה המוצגת כאן טיפוסית חוסמי ערוץ hNav1.8 העצבית נתרן, ערוץ מתח מגודרת מעורב בתפיסת הכאב. ב assay זה, + Na הערוץ, שבאה לידי ביטוי HEK293 תאים הופעל על ידי צעדים מהדק מתח מ -120 ל mV mV 0, מיושם בכל שנייה.
  2. פרוטוקול זה ולכן מספק מידע על לחסום טוניק של הערוץ, מאז הערוץ החוזרת המדינה נחה בין depolarizatיונים. המצטבר מנה תגובה עקומות חוסם מומחשים עבור הרדמה מקומית לידוקאין ו tetracaine, מתן IC50 ערכים של 320 מיקרומטר ו 34 מיקרומטר, בהתאמה.
  3. בגרף השני, הזיקה לידוקאין עבור hNaV1.8 מושווית כי hNaV1.7, ערוץ אחר מתח מגודרת Na + מעורב תחושת כאב. IC50 עבור hNaV 1.7 נמצאה להיות 3 מ"מ, חושף זיקה פי עשרה נמוך כאשר ערוץ זה נקשר לידוקאין, לעומת hNaV1.8.

5. IonFlux יישומים - הקרנת hERG

  1. המכשיר IonFlux יכול לשמש גם עבור יישומים פרמקולוגיה בטיחות כגון הקרנת hERG. ערוץ אשלגן hERG היה מעורב אירועי לב חמורים הקשורים לתרופות שונות בשוק, מובילים לנסיגה שלהם; והוא נדרש כעת כל תרכובות תרופה חדשה נגד יוקרן בערוץ זה.
  2. מנה תגובה עקומות חוסם בוצעו עבור מתח תלות ערוצי מאפיין hERG לידי ביטוי בתאי CHO שלוש תרכובות התייחסות נפוץ, כלומר terfenadine, cisapride ו quinidine.
  3. הגרפים מראים את הפרופיל הנוכחי טיפוסי המתקבל כאשר ערוצי hERG מופעלים על ידי שני דופק פרוטוקול, אשר הכרחי בגלל קצב איון המהירה שלה, לשמש כדי לחשוף זרמים hERG הזנב. הגרפים מראים את הפעלת מתח תלות ומאפיינים תיקון הנוכחית hERG מוקלט במכשיר IonFlux.
  4. הקלטות אלו מקרוב לשכפל התנהגות מקובלת ערוץ מיוצג בספרות. מנה תגובה עקומות חוסם לחשוף IC50 ערכים עבור שלושת המתחמים התייחסות של 60 ננומטר, 160 ננומטר, ו 1 מ"מ.

Disclosures

אין ניגודי אינטרסים הכריז.

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics