Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.
Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:
Summary
Cite this Article
Copy Citation | Download Citations | Reprints and PermissionsZhang, S., Cahalan, M. D. Purifying Plasmid DNA from Bacterial Colonies Using the Qiagen Miniprep Kit. J. Vis. Exp. (6), e247, doi:10.3791/247 (2007).
Translate text to:
Please note that all translations are automatically generated.
Click here for the english version. For other languages click here.
Abstract
تنقية البلازميد الحمض النووي من كولاي هو تقنية أساسية لالاستنساخ الجزيئي. تنقية صغيرة الحجم (miniprep) من أقل من 5 مل من ثقافة الجرثومي هو وسيلة سريعة للتحقق منها استنساخ الحمض النووي أو العزلة ، تليها ردود الفعل الأنزيمية أخرى (بوليميريز سلسلة من ردود الفعل وتقييد انزيم الهضم). هنا ، ونحن الفيديو المسجلة الإجراءات العامة من خلال miniprep QIAGEN في QIAprep كيت Miniprep 8 ، التي تهدف إلى إدخال هذه التقنية عالية الكفاءة للمبتدئين العامة لتقنيات البيولوجيا الجزيئية. ويستند هذا الإجراء كله على تحلل الخلايا القلوية كولاي تليها الامتزاز من الحمض النووي على السيليكا في وجود الملح العالية. وتتكون من ثلاث خطوات : 1) إعداد وتبادل المعلومات من lysate البكتيرية ، 2) الامتزاز من الحمض النووي على الغشاء QIAprep ، 3) الغسيل وشطف من الحمض النووي البلازميد. يتم تنفيذ كافة الخطوات دون استخدام الكلوروفورم ، والفينول ، CSCL ، إيثيديوم بروميد ، ودون هطول الأمطار الكحول. وعادة ما يستغرق أقل من 2 ساعة لإنهاء الإجراء بأكمله.
Comments
6 Comments
Post a Question / Comment / Request
You must be signed in to post a comment. Please sign in or create an account.
A very helpful and clear demonstration. Thanks!
With this kit is it best to do an alcohol precipitation after or unnecessary? Thank you
Hello from QIAGEN, There is no need to do an alcohol precipitation after this procedure - the DNA is ready to use as eluted from the QIAprep column. You can see the handbook for this kit online here if you would like: http://www1.qiagen.com/literature/handbooks/literature.aspx?id=1000²48 -QIAGEN Technical Service http://www1.qiagen.com/Contact/QIAGENWorldWide.aspx
By using this kit, what can I do if I'd like to increase the yield of plasmid with a low copy number? What is the maximum volume of culture that can be harvested?
Thank you very much.
Your demonstration is very good but you didn't mentioned the volumes of buffer added and the speed and time of centrifuge
Thanks for doing that video. There's not a lot of theory in there, but it is surely helpful for beginners. I'm holding onto it for future coworkers.