كهربائيا الوريد الأجوف السفلي النموذجي (EIM) من التخثر الوريدي

Medicine
 

Summary

الحث الكهربائي التنشيط البطانية على السطح الداخلي للنتائج الوريد الأجوف السفلي في تشكيل نوع خثرة وريدية بسبب التنشيط البطانية وجزئية ركود الدم ، واثنين من عناصر ثالوث فيرخوف.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Diaz, J. A., Wrobleski, S. K., Hawley, A. E., Lucchesi, B. R., Wakefield, T. W., Myers, Jr., D. D. Electrolytic Inferior Vena Cava Model (EIM) of Venous Thrombosis. J. Vis. Exp. (53), e2737, doi:10.3791/2737 (2011).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

نماذج حيوانية تلعب دورا حيويا في وريدي عميق البحوث (DVT) التجلط لدراسة تكوين خثرة ، القرار خثرة واختبار المركبات العلاجية المحتملة (1). في الوقت الحاضر مركبات جديدة لاستخدامها في العلاج والوقاية من DVT التي يجري تطويرها. وقد تم تقديم خصم محتمل المركبات العلاجية إلى الوريد an مخثور تتأثر بالمشاكل. وقد تم في سياق تطبيقات علاجية ، وهو النموذج الذي يستخدم جزئيا ركود ويولد باستمرار الجلطة الدموية داخل الوريد الرئيسي الذي أنشئ مؤخرا. وكهربائيا الوريد الأجوف السفلي النموذجي (EIM) هو نموذج الفأر من DVT الذي يسمح بتشكيل خثرة في وجود تدفق الدم المستمر. هذا النموذج يسمح العوامل العلاجية ليكون في اتصال مع خثرة بطريقة ديناميكية ، وأكثر حساسية من غيرها من النماذج DVT (1). بالإضافة إلى ذلك ، هذا النموذج خثار يحاكي عن كثب حالات سريرية لتشكيل خثرة ويعتبر مثاليا لدراسة تفعيل ريدي الخلية البطانية ، والهجرة الكريات البيض ، وريدي تكون الخثرات ، واختبار التطبيقات العلاجية (1). EIM نموذج بسيط من الناحية الفنية ، يمكن استنساخه بسهولة ، ويخلق متسقة الأحجام الجلطة الدموية ويسمح للعينة كبيرة (أي خثرة الوريد والجدار) وهي لازمة للأغراض التحليلية.

Protocol

1. إجراءات الماوس التخدير

  1. تتم إزالة الحيوانات من القفص ، وضعت في غرفة التخدير قبل العملية التعريفي لتحريض الغاز بنسبة 2 ٪ و 100 isoflurane الأكسجين ٪ في معدل تدفق 0.5 ليتر في الدقيقة الواحدة (المرذاذ للرقابة).
  2. ومخدرا في غرفة الفئران تحريض التخدير ، وإزالتها من غرفة وحلق البطن بطني مع كليبرز الكهربائية ، أو صيانتها داخل غرفة إذا تم استخدام مزيل الشعر الشعر (1 دقيقة).
  3. في حين لا يزال تحت التخدير ، ويوزن فيه ، ومشحم العينين مع مرهم عيني عقيم و، ثم توضع في recumbancy الظهرية على جهاز تسخين الماء الدافئ تعميم تحت التخدير العام مع مخروط الأنف باستخدام isoflurane والاوكسجين. على هذه النقطة هو تخفيض معدل الأكسجين إلى 0.2 لترا لكل دقيقة.
  4. يتم رش البطن بمحلول الكلورهيكسيدين (ثنائي الأسيتات الكلورهكسيدين هو bacterialcidal بسرعة والثابتة) ومسحت مع شاش معقم أو حتى ثلاث مرات في موقع جراحية نظيفة.

2. الفأر الصغير الجراحية وإجراءات الاسترداد

  1. يتم إجراء شق خط الوسط بطني (2 سم) مع مقص القزحية من خلال الجلد وجدار البطن تعريض البطن. ويستخدم العقيمة 2X2 غارقة في المياه المالحة الشاش لتعكس الأمعاء إلى الجانب الأيسر للحيوان. يتم وضع التصور restrainer الماوس في مكان يسمح للالوريد الأجوف السفلي (IVC).
  2. عند هذه النقطة ، يتم تقليل isoflurane الى مستوى الصيانة من 2 ٪ ونسبة الأوكسجين لا تزال عند 0.2 لترات في الدقيقة الواحدة للفترة المتبقية من العملية الجراحية.
  3. ومما يسهل تشريح صريحا باستخدام قضيب مسحة معقمة والشوط الاضافي قزحية ملقط الأنسجة الدقيقة المنحنية. يجب توخي الحذر في التعامل مع الأنسجة الماوس لأنها هشة للغاية.
  4. و تربط جميع فروع IVC الجانب ، من عروق الكلى إلى التشعب الحرقفي ، مع خيوط 7-0 prolene غير المتفاعلة. بقيت فروع الظهر البراءة.
  5. في نموذج IVC كهربائيا (EIM) ، و25G من فولاذ لا يصدأ الإبرة ، ويعلق على اسلاك النحاس المطلي فضة (KY - 30 - 1 - GRN ، Electrospec ، دوفر بولاية نيوجيرسي) يتم إدراجها في IVC الذيلية المكشوفة ، والشكل (1) وتوضع على الحائط الأمامي (الأنود).
  6. هو مزروع تحت الجلد آخر سلك استكمال الدائرة (الكاثود).
  7. تم تطبيق تيار من 250 μAmps أكثر من 15 دقيقة باستخدام العشب موجة مربعة S48 مشجعا وحدة ثابتة الحالية (تقنيات العشب ، ومن استرو المتوسطي ، وشركة ، وست وارويك ، ري). النتائج المباشرة الحالية في تشكيل المنتجات السامة الكهربائي التي تضعف سطح بطانة من IVC تعزيز بيئة مخثر وتشكيل خثرة لاحقة.
  8. بعد 15 دقيقة ، وتتم إزالة الإبرة ، وعقد مسحة القطن بلطف على اتصال مع المنطقة لمنع النزيف
  9. في الحيوانات صورية ، يتم وضع إبرة في IVC وإزالتها بعد ذلك ، دون تطبيق الحالي.
  10. إغلاق موقع البطن بطريقة ثنائية الطبقة. مختبرنا يستخدم vicryl 5-0 ، وخياطة الاصطناعية ، في نمط مستمر لإغلاق جدار البطن. ويستخدم الصمغ اللاصق الجلد لإغلاق الجلد. لا توجد خيوط خارجية من أجل إزالة.
  11. ثم يتم استرداد الفئران في قفص الماوس الفردية ، لاحظ عن كثب بعد العملية (45 دقيقة الى 2 ساعة) تحت مصباح التدفئة (دقيقة مسافة 24 بوصة بعيدا عن قفص) ، ثم عاد إلى وحداتهم السكنية الأصلي. يمكن استخدام المسكنات والأدوية المضادة للالتهابات واذا لم يتعارض مع هدف الدراسة. وهناك حاجة إلى مبرر علمي لحجب عقاقير مضادة للألم ، والطب البيطري ، والموافقة ICUCA. وقد وجدت أن لدينا مختبر البوبرينورفين ،0.05 - 0 0.1 ملغ / كلغ SQ هو مسكن الممتازة قبل وبعد العملية مقابل الفئران. بالإضافة ، يمكن غرست في يدوكائين 4mg/kg (0.4 مل / كغ من محلول 1 ٪) في الموقع عندما شق المسكنات النظامية قد اربكت النتائج التجريبية.
  12. ونحن عادة لا تجربة ما بعد الجراحة بسبب الآثار السلبية DVT. ومع ذلك ، يمكن السلبية اللاحقة للعمليات الجراحية وتشمل آثار الموت مخدر عفوية والجراحية فقدان الدم ، وشلل جزئي بسبب الصدمة العصبية. الحيوانات التي يمكن أن تكون بطيئة للتعافي أن تغذى الكيب هلام أو طعام رطبة وضعت على أرضية القفص لتسهيل الانتعاش الحيوان. وينبغي أن الحيوانات مع مضاعفات ما بعد الجراحة قطع الموت الرحيم إنسانية.
  13. في النقطة الزمنية المعينة ، يتم تنفيذ القتل الرحيم في معاملة إنسانية وفقا للتوصيات التي وضعتها أمريكا البيطرية المبادئ التوجيهية بشأن القتل الرحيم الرابطة الطبية للقوارض.

3. ممثل النتائج

وEIM هي نموذج الذي يشكل خثرة في وجود تدفق الدم المستمر. وتبين الأرقام التالية المعلمات التحقيق في هذا النموذج الرواية.

الشكل 1
الشكل 1 في المنطقة التشريحية definesthe حيث 25G من فولاذ لا يصدأيتم إدخال الإبرة ، ويعلق على اسلاك النحاس المطلي فضة (KY - 30 - 1 - GRN ، Electrospec ، دوفر بولاية نيو جيرسي). علما بأن العقدة اللمفاوية موجودة تقريبا ، ويساعد كمعلم للعثور على IVC الذيلية.

الشكل 2
الشكل 2 : وزن خثرة 2 بعد أيام EIM في سلالات مختلفة. كما هو متوقع ، كان أقل في الوزن خثرة PAI - 1 كو الفئران وأكبر في الفئران مفرط الخثورية CT الدلتا (^ CT).

الشكل 3
وقد تم قياس ذوبان ف selectin ، وهو صانع لجلطة في سلالات مختلفة : الشكل 3. تم العثور على أدنى المستويات في PAI - 1 كو الفئران في حين عثر على أعلى المستويات في الفئران مفرط الخثورية CT الدلتا.

الشكل 4
الشكل 4 الارتباط بين وزن خثرة وعثر على ذوبان ف selectin في سلالات مختلفة. لاحظ ، في المجموعة التي ولدت في أقصر حجم الجلطة ، كانت قابلة للذوبان ف selectin الكشف عن أدنى (PAI - 1 كو الفئران). في المجموعة التي ولدت أكبر حجم الجلطة ، كانت قابلة للذوبان ف selectin اكتشفت أعلى (مفرط الخثورية دلتا CT).

الشكل 5
الشكل 5 : ومن أجل إثبات وجود تدفق الدم ، والموجات فوق الصوتية في أداء الفئران التي تمر EIM. الشكل 5 يوضح الموجات فوق الصوتية التي أجريت في ماوس 2 بعد أيام EIM. ثم كانت العينة الحصاد. لاحظ أن شكل اقتراح تشكيل خثرة خثرة في وجود تدفق

Discussion

الفأر هو أداة ممتازة للبحث في التجارب المجراة. وهكذا ، وتطوير نماذج الماوس التي تحاكي بشكل وثيق الأمراض أو الحالات المرضية اللازمة. وقد استخدمت عدة نماذج الماوس تخثر وريدي لدراسة DVT بما في ذلك : ركود الضوئية ، (2) (3-4) ، والصدمات الميكانيكية (5-6). ومع ذلك ، فإن أيا من هذه النماذج استخدام التحفيز الداخلي البطانية لتوليد خثرة في وجود تدفق الدم المستمر. وEIM ، وذلك باستخدام التحفيز كهربائيا داخل IVC ، ويشجع على تكون الخثرات الوريدية التي التنشيط البطانية في وجود تدفق الدم (1). انها بسيطة من الناحية الفنية ، يمكن استنساخه بسهولة ويبلغ معدل البقاء على قيد الحياة مرتفعة (99 ٪). على الرغم من حقيقة أن يتم استخدام تيار كهربائي لإنشاء الكهربائي ، والحرارة لا يتم إنشاء (1). نموذج يحاكي بشكل وثيق EIM DVT السريرية ، ويخدم بالتالي أداة قيمة لدراسة آليات تشكيل خثرة الجوهرية وحلها. نموذج EIM مفيد أيضا للنهوض نهج علاجية جديدة ضد مرض تخثر.

Disclosures

الإعلان عن أي تضارب في المصالح.

Acknowledgments

بدعم من المعاهد الوطنية للصحة 1P01HL089407 - 01A1 (لورنس ، PI) ، نواة الحيوان ، NIH 1 - 01A2 K01 HL080962 (مايرز ، PI).

Materials

Name Company Catalog Number Comments
DMEM Invitrogen ABCD1234

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Diaz, J. A., Hawley, A. E., Alvarado, C. M. Thrombogenesis with continuous blood flow in the inferior vena cava. A novel mouse model. Thromb Haemost. 104, 366-375 (2010).
  2. Eitzman, D. T., Westrick, R. J., Nabel, E. G. Plasminogen activator inhibitor-1 and vitronectin promote vascular thrombosis in mice. Blood. 95, 577-580 (2000).
  3. Myers, D., Farris, D., Hawley, A. Selectins influence thrombosis in a mouse model of experimental deep venous thrombosis. J Surg Res. 108, 212-221 (2002).
  4. Myers, D. D., Hawley, A. E., Farris, D. M. P-selectin and leukocyte microparticles are associated with venous thrombogenesis. J Vasc Surg. 38, 1075-1089 (2003).
  5. Pierangeli, S. S., Barker, J. H., Stikovac, D. Effect of human IgG antiphospholipid antibodies on an in vivo thrombosis model in mice. Thromb Haemost. 71, 670-674 (1994).
  6. Pierangeli, S. S., Liu, X. W., Barker, J. H. Induction of thrombosis in a mouse model by IgG, IgM and IgA immunoglobulins from patients with the antiphospholipid syndrome. Thromb Haemost. 74, 1361-1367 (1995).

Comments

2 Comments

  1. "After 15 minutes, the needle is removed and a cotton swab is held gently in contact with the area to prevent bleeding. "
    How about bleeding in the PAI mice group?

    In sham animals, the needle is placed into the IVC and then removed, without application of the current.
    How many minutes keep the needle in IVC?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 4, 2011 - 3:19 PM
  2. No bleeding was observed in PAI-1 KO mice.
    In order to mimic the experimental group, a needle was placed within the IVC for 15 minutes, without current administration in shams.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 4, 2011 - 3:48 PM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics