Manuell Restraint och gemensamma Compound Rutter Administration hos möss och råttor

Biology
 

Summary

Att arbeta säkert och humant med forskning gnagare kräver spetskompetens inom hantering och återhållsamhet metoder. Denna artikel kommer att presentera de grundläggande principer som krävs för att säkert hantera och effektivt administrera föreningarna till möss och råttor.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. Manual Restraint and Common Compound Administration Routes in Mice and Rats. J. Vis. Exp. (67), e2771, doi:10.3791/2771 (2012).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Att kunna säkert och effektivt hindra möss och råttor är en viktig del av att bedriva forskning. Att arbeta tryggt och humant med möss och råttor krävs en grundläggande kompetens i hantering och återhållsamhet metoder. Denna artikel kommer att presentera de grundläggande principer som krävs för att på ett säkert sätt hantera djur. En hand, två-handed och återhållsamhet med specialdesignade fasthållningsanordningar objekten kommer att illustreras. Ofta är en annan del av forskningen eller testning användning av djur en effektiv förvaltning av föreningar till möss och råttor. Även om det finns ett stort antal möjliga administreringsvägar (begränsas endast av storleken och organ hos djuret), är de flesta inte används regelbundet i forskning. Denna video kommer att illustrera flera av de mer vanliga vägarna, inklusive intravenöst, intramuskulärt, subkutant, och oral sondmatning. Målet med denna artikel är att exponera en betraktare känner till dessa tekniker till grundläggande återhållsamhet och ämnen vägar administration. Denna videoersätter inte nödvändiga praktisk utbildning i din anläggning, men är tänkt att öka och komplettera sin utbildning.

Protocol

1. Säker Restraint och varsam hantering av djur är en viktig del av experimentella procedurer

  1. Denna video är utformad för att vara ett komplement till praktisk utbildning som tillhandahålls av din institution.
  2. Se alltid till att IACUC eller etikkommitté godkännande är på plats innan du påbörjar något experimentellt förfarande.
  3. Varje person som arbetar på ett protokoll bör känna till detaljer om förfaranden som godkänts för detta protokoll och eventuella andra som de arbetar.
  4. Närma dig gnagare med tillförsikt och hantera djuren försiktigt, men bestämt. Både alltför omild behandling och tentativa metoder kan leda biter eller repor på föraren eller skador på djuret.
  5. Vid hantering djur, det finns alltid risken för oavsiktlig utsättning eller djuret tappas. De flesta av dessa manipulationer är bäst utförs över en arbetsyta så att om djuret tappas eller flyr, det är inte skadad och kan lätt återerövras. Följ din institunella riktlinjer om djur som kontaktar golvet.
  6. Hantera aldrig djur från svansspetsen, eftersom detta kan resultera i en degloving skada av svansen. Var särskilt försiktig med stora råttor eller gravida möss. Använd alltid däremot att stödja kroppen när du lyfter i svansen.
  7. Vassa nålar fungerar bäst när du ger injektioner. Även nålar för smågnagare används ibland för flera injektioner, är det inte rekommenderas för ett antal skäl, minst som det är att den lilla mätaren används ofta innebär att nålarna tråkig snabbt.
  8. Bli biten eller repad är alltid en möjlighet när man arbetar med djur. Om du arbetar med ett ämne eller ett smittämne som kan orsaka skador på människor, vidta extra försiktighetsåtgärder sådana manipulera djur eller agenter i dragskåp eller bänkar.
  9. Gentle metoder och acklimatisering till hantering innan ett förfarande kan löna sig i djur som är mindre stressade av hantering.
  10. Öva återhållsamhet innan förening administration och praxis administrera ämnen att kontrollera djuren innan försöksdjur.
  11. Öva dessa tekniker regelbundet ingjuter förtroende och resultat förtroende bättre hantering, mindre stressade djur, och bättre vetenskapliga resultat.
  12. Med all hantering teknik, om djuret är motsträviga, prova en annan teknik. Djuret (och förare) kan också dra nytta av att sätta djuret tillbaka i buren och försöker igen senare.

2. Manuell Restraint

  1. En hand mus återhållsamhet
    1. Lyft en mus från svansroten och placera den på buren locket, tråd bar bur topp eller liknande grov yta.
      1. Enhands mus fasthållningsanordningen utförs vanligen med den icke-dominanta handen, lämnar dominerande hand fri för användning.
      2. En alternativ metod tillåter teknikern att använda sin Laboratorierock eller enhetliga hylsa som täcker underarmen att placeradjur före återhållsamhet.
    2. Stoppa basen av svansen mellan den 3: e och 4: e fingret, medan försiktigt dra tillbaka på svansen. Detta gör att musen att gripa ytan med alla fyra tassarna och dra framåt.
      1. Ta inte tag möss genom svansspetsen, särskilt om tillfälligt hela kroppsvikt genom sin svans. Detta kan orsaka en degloving skada där huden på svansen glider av.
    3. Därefter fast gripa musen i nackskinnet med samma hand som håller svansen. Fatta med pekfingret och tummen nära basen av huvudet och förlänga grepp ned musens rygg genom att införliva mitten och fingrar ring.
      1. Var noga med att applicera lagom tryck, eller fasthet till huden runt halsen för att förhindra att musen från svarvning eller vrida ur återhållsamhet, men inte dra huden så hårt att djuret inte kan andas.
      2. Styrning av huvudet är avgörande. Ommusen kan röra sitt huvud, kan den nå förarens fingrar och kan bita. Detta kan inträffa när nybörjare hanterare tag i musen för långt ner på ryggen, snarare än bakom skallen.
  2. Mus återhållsamhet två-handed
    1. Lyft en mus från svansroten och plats på buren locket, tråd bar lock eller ojämn yta.
      1. En alternativ metod tillåter teknikern att använda sin Laboratorierock eller enhetliga hylsa som täcker underarmen att placera djuret före återhållsamhet.
    2. Dra försiktigt bakåt på svansen och musen kommer att förstå ytan med fyra tassar och dra framåt.
    3. Nästa, med den andra handen snabbt och stadigt gripa musen genom nackskinnet (se enhands återhållsamhet ovan).
    4. Med svansen i ena handen och i nackskinnet i den andra, lyfta musen och stoppa in svansroten mellan handflatan och den 3: e eller 4: e finger på handen som håller i nackskinnet.
      1. Som med en hand metod, fast tag i nackskinnet för att förhindra att musen från att vrida eller vända utan griper så hårt att djuret inte kan andas.
      2. Om musen är resistent mot scruffing kan lätt tryck på musens rygg låta handen att flytta upp till ett bättre grepp.
  3. Råtta återhållsamhet; scruffing
    1. Råtta scruffing utförs i allmänhet två-handed och endast i mindre råttor. Det är inte en ofta använd teknik eftersom råttor är mindre acceptera scruffing än möss, men det är användbart i vissa situationer bloduppsamling.
    2. Tag i råttan i svansen med den icke-dominanta handen och dra försiktigt bakåt på en grov yta (såsom beskrivits ovan för möss).
      1. Var noga med att förstå nära basen av svansen som råttans svans hud kan lossna om förstått nära spetsen.
    3. Håll svansen stadigt i handen och närma i nackskinnet hos råttan bakifrån.
      1. För exemle, om råttans svans är i hanterarna "vänster hand, närma er inte råttan från näsan till nackskinnet den med höger hand. Istället når över vänster hand, och närma sig nackskinnet bakifrån.
    4. Tryck lätt på baksidan av råtta, under skulderbladen, sedan ta tag i nackskinnet nära skallbasen mellan fingrarna och handflatan.
    5. Styrning av huvudet är viktigt för att förhindra bett. Rat biter kan orsaka allvarliga skador.
    6. Råttor kan artikulera när återhållsamma på detta sätt.
  4. Råtta återhållsamhet, över axeln grepp
    1. Tag i råttan i svansen med den dominerande handen och dra försiktigt bakåt på en grov yta (såsom beskrivits ovan för möss).
      1. En alternativ metod tillåter teknikern att använda sin Laboratorierock eller enhetliga hylsa som täcker underarmen att placera djuret före återhållsamhet.
      2. Var noga med att förstå nära basen av svansen som råttans svans hud can lossna om förstått nära spetsen.
    2. Placera den icke-dominanta handen över råttans rygg, närmar bakifrån.
    3. Ta tag i råttan runt bröstkorgen med ringfingret, pinkie och tumme. Råttans huvud ska vara mellan pek-och långfingret.
      1. Komprimera inte bröstkorgen.
    4. Råttan kan hållas på detta sätt med en hand, om kroppen är stabiliserad mot föraren.
  5. Råtta återhållsamhet, under axlarna grepp
    1. Tag i råttan i svansen med den dominerande handen och dra försiktigt bakåt på en grov yta (såsom beskrivits ovan för möss).
      1. En alternativ metod tillåter teknikern att använda sin Laboratorierock eller enhetliga hylsa som täcker underarmen att placera djuret före återhållsamhet.
      2. Var noga med att förstå nära basen av svansen som råttans svans hud kan lossna om förstått nära spetsen.
    2. Placera den icke-dominanta handen över rpå rygg, närmar bakifrån.
    3. Ta tag i råttan runt bröstkorgen, precis under skulderbladen. Råttans underarmar bör försiktigt skjutas upp med tummen och pekfingret.
      1. Underarmarna ska korsa i råttans hakan, hindrar den från att bita.
      2. Komprimera inte bröstkorgen.
    4. Råttan kan hållas på detta sätt med en hand, om kroppen är stabiliserad mot föraren.
  6. Decapicone
    1. En Decapicone är en flexibel, konformat stycke av tunn plast med ett hål i ena änden. Hålet är tillräckligt liten så att mus eller råtta kan få nosen ur hålet, men inte resten av kroppen.
    2. För att hindra djuret, placera mus eller råtta i en Decapicone av rätt storlek.
    3. Skjut djuret framåt tills nosen skjuter ut från hålet i Decapicone.
    4. Antingen håller påsen stängd runt svansen, eller använda en twist slips för att försegla djuret i konen.
    5. AdvantaGE av en Decapicone är att den tunna plasten möjliggör injektioner genom materialet.
    6. Nackdelen är att materialet inte andas och djur kan bli överhettad. Bara hålla ett djur i ett Decapicone så länge som det tar att utföra proceduren.
  7. Akryl / styv plast förband
    1. Plast fasthållningsanordningar är särskilt användbara när djurets svans måste nås.
    2. Dessa kan köpas kommersiellt eller göras i laboratoriet.
    3. Storleken bör vara anpassad för djuret att hållas tillbaka - djuret ska inte kunna vända i fasthållningsanordningen.
    4. Placera djuret i fasthållningsanordningen genom att först försiktigt hålla tillbaka djuret, sedan släppa det, huvud-först vid öppnandet av enheten.
      1. Det kan hjälpa till att rikta enheten uppåt över buren, eftersom gnagare ofta klättra upp i en säker struktur, som ett rör.
    5. Placera locket på änden avenhet, försiktigt så att inte skada djurets svans, fötter eller testiklar.
    6. Minimera tid i restrainers eftersom djur kan överhettas.
  8. Djur får hållas fast på andra sätt, till exempel genom att linda en liten handduk eller genom att helt enkelt koppning en hand över djuret. Tekniker kan justeras för att möta behoven hos djuret och arbetaren. Alltid noga med att undvika bett och repor och säkra djuret från oavsiktliga utsläpp eller fall från höjder.

3. Sammansatta Administration Metoder

  1. Detta är på intet sätt en uttömmande lista och andra vägar är möjliga. Detta protokoll syftar till att illustrera de vanligaste rutter. Andra vägar kan kräva bedövning av djuret och efter administrering smärtlindring.
  2. Oavsett administration metod som används, vara säker på att alla material förberedd innan hålla fast djur.
  3. Vattenhaltiga material är lättare att injicera än tjockare material, såsom olja-basD-föreningar. Injicera alltid tjockare föreningar mycket långsamt för att undvika rubbning av nålen från sprutan.
  4. Allmänna nål och spruta använder överväganden.
    1. Förvara och avyttra sprutor och nålar på rätt sätt.
    2. Om du är ny till hjälp sprutor och nålar, praktik hanterar sprutan och injicera innan du injicera ett djur. Helst ska du kunna tryggt manipulera sprutan och nålen med ena handen och lämnar den andra till återhållsamhet av djuret. En stadig hand minimerar nål rörelse som minimerar vävnadsskada.
    3. Nålar har en punkt, en avfasning, en axel, och ett nav. Sprutor har en spets, en cylinder och en kolv (Figur 1 a och b).
    4. Nålar är dimensionerade efter mätare och längd. Den större mätaren, desto mindre nålen. Små nålar är mycket benägna att Avtrubbning (från en skägg bildas på spetsen) och bör inte användas för att genomborra flerdosbehållare (Figur 1 C). Välj alltid denkortaste nål som kommer att arbeta för att administrera föreningen.
    5. Nålen är fäst vid spetsen av sprutan genom navet. Vissa sprutor har låsning tips. Se alltid till sprutan är ordentligt ansluten till nålen.
    6. Nålar bäst in i djuret med avfasningen uppåt, speciellt för intravenösa injektioner.
    7. Aldrig sammanfatta nålar för hand. Detta är en vanlig orsak till nålsticksskador. Kassera nålar och sprutor ordentligt i märkt vassa behållare. Om nålar måste regummeras, anordningar finns tillgängliga (figur 1 d).
  5. Intranasal (IN)
    1. Fast hästens såsom beskrivits ovan.
    2. Med hjälp av en spruta eller pipett, placera en liten mängd av materialet som skall inhaleras vid näsborrarna hos djuret.
    3. Håll utkik efter materialet att försvinna in i näsborrarna.
    4. Upprepa vid behov tills önskad volym har administrerats.
  6. Intramuskulär (IM)
    1. Hålla the djur såsom beskrivits ovan. Kontrollera en av djurets bakben är fri och stabiliseras för injektion. Återhållsamhet kan ta två personer. Om djuret kan sparka under injektionen kommer muskelskador från nålen uppstå.
    2. Nålen skall införas vinkelrätt mot huden på djuret. Använda en lämplig storlek spruta och nål, in nålen ungefär konisk-djup och injicera materialet i djurets quadriceps (framsida lår) eller laterala låret muskelmassa.
    3. Injicera inte i den bakre muskelmassa eftersom det är möjligt att skada ischiasnerven.
    4. Om djur ska få flera IM injektioner, alternativa ben.
  7. Intraperitoneal (IP)
    1. Fast hästens såsom beskrivits ovan.
    2. Tips djurets nos mot golvet, utsätta buken för injektion.
    3. Leta djurets mittlinjen och mentalt dela buken i kvadranter (figur 2). Den lägrekvadranter, särskilt djurets nedre högra kvadranten, är de lämpliga platser för intraperitoneala injektioner.
      1. Den nedre högra kvadranten väljs på grund av bristen på anatomiskt viktiga strukturer.
    4. Med användning av en lämplig storlek spruta och nål, injicera materialet i djuret.
    5. Om djur ska få upprepade IP injektioner, alternera injektionsstället.
  8. Subkutan (SC, SQ)
    1. Fast hästens såsom beskrivits ovan. Djuret måste hållas tillbaka löst nog så att huden kan mobiliseras.
    2. Om djur ska hanteras rutinmässigt efter subkutan injektion inte använda nackskinnet (nacken). Använd i stället huden på rygg rumpan eller flanken. Om djur ska få flera subkutana injektioner, alternativa platser för injektion.
    3. Ta tag i huden och försiktigt dra den uppåt, gör en "tält".
      1. Om du utför injektionen solo, in nålen och försiktigt tent huden uppåt med nålen för att bekräfta att nålen är i det subkutana utrymmet.
    4. Använda en lämplig storlek spruta och nål, stick in nålen i en 30-45 ° vinkel i tented huden och injicera materialet. Injicera parallellt med och bort från de fingrar som håller huden uppåt.
    5. Om injektionen är framgångsrik, kommer en liten svullnad under huden ses.
    6. Efter injektion, tryck lätt att förhindra återflöde av materialet.
  9. Intradermal (ID)
    1. För intradermala injektioner, djuren ofta rakade så att huden kan ses.
    2. Fasthållning av djuret för flera intradermala injektioner kan vara svårt. I detta fall, kan kemisk sedering vara nödvändig. De områden för ID-injektioner är desamma som för SC.
    3. Sätt i en lämplig storlek in nålen i huden med en 15-30 ° vinkel. Nålen kommer inte sättas mycket långt och injektionen ska träffa rebistånd.
      1. Ett alternativt tillvägagångssätt är att försiktigt nypa i huden intill injektionsstället och stick in nålen i en mycket flack vinkel. Detta är användbart i möss eftersom det hindrar dem från att röra sig under injektionen processen.
    4. Om injektionen är framgångsrik, kommer en liten blåsa ses. Det kommer att bli blekare än den omgivande huden.
    5. Efter injektion, tryck lätt att förhindra återflöde av materialet.
  10. Intravaskulär (IV)
    1. De vänstra och högra laterala svansvenerna är den vanligaste kärlaccessen väg som används i möss och råttor.
    2. Andra vaskulära tillfartsvägar är möjliga i möss och råttor, men kräver i regel sedation och efter injektionen smärtlindring.
    3. För en svansveninjektion, hålla djuret i en Decapicone eller plast gnagare förband.
    4. Placera djurets svans under en lampa, eller på en skyddad uppvärmning enhet. Detta kommer att främja vasodilatation, vilket möjliggör enklare injektion.
      1. Värm inte djuret.
      2. För stora hanråttor, kan rengöring av hudflagor från svansen möjliggöra bättre visualisering av venen. Rengöring bör vara varsam så att huden inte skavs.
    5. Håll djurets svans av spetsen med den icke-dominanta handen. Detta kommer att räta ut svansen.
    6. Rotera svansen ¼ varv för att placera svansvenerna dorsalt för enklare injektion. Djuret har två laterala svansvenerna och en ventrala svansartären (Figur 3).
    7. Närma svansen med nålen i 15-20 ° vinkel. Börja vid den distala delen av svansen.
      1. Venerna är grunda och nålen bör inte införas mycket längre än avfasningen.
      2. Om injektionen påbörjas så distalt som möjligt, det finns mer oskadat ven att försöka injektionen bör det första försök misslyckas.
    8. Injicera materialet. En lyckad injektion kommer att resultera i material som kommer in i venen utanmotstånd och blekning av svansvenen under hela injektionen.
      1. Gör aspirera inte innan du injicerar, eftersom detta kommer att kollapsa venen.
      2. Lätt tryck på venpunktion webbplatsen efter injektion kommer att förhindra blödning.
    9. I ett misslyckat injektion, kommer materialet flyta inte lätt. Istället kommer svansen huden blanchera eller materialet inte kan injiceras alls.
  11. Intragastrisk administrering (oral sondmatning)
    1. Utför endast sondmatning på återhållsamma, vakna djur. Anestesi eller sedering ökar risken för aspiration (material oavsiktligt kommer in i lungorna).
    2. Välj en lämplig storlek utfodring nål för användning. Dessa nålar har bollen tips i slutet för att förhindra deras passage in i luftstrupen.
    3. Längd som behövs kan bestämmas genom att hålla den återhållsamma djuret upp och mäta från mungipan. Bollen spets utfodring nålen ska nå till djurets sista revbenet (<strong> Figur 4). Kanylstorlek bestäms av vikten hos djuret.
    4. Håll fast djuret så att dess huvud och kropp är i en rak, vertikal linje. Detta rätar matstrupen, vilket möjliggör enklare passage av utfodring nålen.
    5. Sätt bollen spets av nålen in i djurets mun, över tungan. När nålen är på plats, sätta nålen och sprutan upp och trycker försiktigt mot gommen, så djurets näsa är mot taket.
      1. Hos råttor nålen kan behöva omdirigeras något när det passerar svalget. Någon spänning på nålen pekar på behovet att anpassa läge
    6. Fortsätt att passera nålen tills det förutbestämda avståndet har uppnåtts. Nålen bör passera lätt, och djuret får inte flämta eller kvävas.
    7. Administrera ämnet. Det bör strömma in i magsäcken. Om det finns motstånd eller flämtar djur, drosslar eller blir blå, omedelbart avbryta och ta bort behovetle. Djur som har aspirerade kan kräva dödshjälp, beroende på föreningen som administreras.

4. Representativa resultat

När djuren hanteras korrekt, finns det ett minimum av stress för både djur och handler. Hanterare inte få biten eller repade, och djuren hanteras humant och kompetent. Föreningar administreras via den korrekta vägen med minimal skada på vävnaden och så lite obehag för djuret som möjligt.

Om utredarna är nya för hantering av djur, som arbetar med en liten uppstoppade djur kan vara till hjälp. Det finns också djur simulatorer tillgängliga för vissa tekniker, såsom Koken råtta. För många forskare, det är liten chans att vinna förtrogenhet med nålar och sprutor innan du arbetar med djur. Representativa delar av en nål och spruta illustreras i figur 1A och 1B. Innan injicera djur för första gången, detkan vara bra att öva injicera innan du arbetar med djur. Mycket fina nålar, såsom 28 och 30 g, är lätta att skada. Om att dra ämnen från flera användningsområden flaskor, använda en större nål för detta ändamål och sedan ersätta den med den mindre nål för injektion. En SKORRANDE nål visas i figur 1C. Grundläggande säkerhetsföreskrifter bör iakttas vid arbete med nålar, som inte regummering använda nålar för hand. Figur 1D visar en nål recapper i bruk. Detta kan vara värdefullt för utredare som behöver avlägsna nålar till, exempelvis uttrycka blod från en spruta utan hemolys observeras när blod trycks genom en nål.

Figurerna 2 och 3 illustrerar landmärken för intraabdominalt injektion och den typiska strukturen av svansen, som visar målen för injektion. Figur 4 tillhandahåller exempel på korrekt dimensionering av sondmatning nålar. Sondmatning nålar bör nå från mynningen av ennimal till höger under sista revbenet.

Figur 1
Figur 1. A) Nål och B) delar spruta, märks. C) Burr på st orsakas av upprepad placering av nålen i en multi-användning flaska. D) Needle recapper i bruk.

Figur 2
Figur 2. Kvadranter i ventrala buken. Injicera i de nedre två kvadranter, företrädesvis den högra nedre kvadranten.

Figur 3
Figur 3. Schematisk av svansen i tvärsnitt, som illustrerar förhållandet mellan artärer och vener till beniga och tendenous strukturer.

Figur 4
Figur 4. Sondmatning nål dimensionering hos råttor. A) sondmatning nålen för long.. B) lämplig storlek sondmatning nål. C) sondmatning nål mätning för kort, D) palperas för sista revbenet för att bestämma lämplig sondmatning st.

Mus Råtta
Rutt Rekommenderad volym Rekommenderad tjocklek och längd nål Rekommenderad volym Rekommenderad tjocklek och längd nål
Intranasal 1 5-25 ul N / A 5-25 ul N / A
Intramuskulär 1,2 0,00005 ml / g <23 g, 0,5 till 0,75 i 0,1 ml / kg <21 g, 0,5 till 0,75 i
Intraperitoneal 1,2 0,02 ml / g <21 g, 0,75 till 1 10 ml / kg <21 g, 0,75 till 1
Subkutan 1,2 0,01 ml / g <22 g, 0,5 till 1 5 ml / kg <22 g, 0,5 till 1
Intradermal 1 0,05-0,1 ml <26 g, 0,5 i 0,05-0,1 ml <26 g, 0,5 i
Intravenös 1,2 0,005 ml / g -0,025 ml / g * <25 g, 0,75 till 1 5 ml/kg-20 ml / kg * <23 g, 0,75 till 1
Oral sondmatning 1,2 0,01 ml / g 20-22 g matningsnål 5-10 ml / kg 16-20 g matningsnål

* Den första siffran är den volym ges som en intravenös bolus under ca 1 minut. Den andra volymen är den volym som kan ges som en långsam infusion under 5-10 minuter.

Discussion

Detta protokoll ska ses som en introduktion till djurhantering och innehåll förvaltning avsedd att komplettera praktisk utbildning tillhandahålls på forskarens anläggning. Det sätt återhållsamhet som kommer att användas och sträckor för ämne administrering bör övervägas i den experimentella designen och när forsknings-protokollet eller nämnd protokoll skrivs.

Utbildning i djurrelaterade förfaranden är avgörande för framgångsrik forskning. För att utföra de flesta experiment Djuren skall hanteras av forskare, och desto bättre djurhantering, desto mindre stressad djuret 3. Vänja djur till mild mänsklig kontakt kan minska stress och göra djuren mer lätthanterlig forskningsämnen 4,5. Hantering stress har visat sig påverka vissa typer av forskning 6 och det är möjligt att det kan påverka andra. Begränsning av gnagare bör ske med noggrann, men fast hantering (en preliminärGreppet är sannolikt att resultera i skador på gnagare och handler) och bör vara under kortast praktiskt. Fasthållningsanordningar metoder är oftast väljs utifrån storleken på djuret eller tillgång söks. Till exempel hantering vuxna råttor i nackskinnet, men möjligt, ofta mötts av starkt motstånd från råtta, speciellt om föraren är oerfaren. Hålla en mus eller råtta hand kan göra tillgång till svansvenerna svårt och en kvarhållande anordning väljs ofta för att hålla djuret så stilla som möjligt.

När forskarna hanterar djuren, de försöker ofta att administrera en förening eller biologiskt för vidare studier. Administreringsväg av ämnen kan påverka absorption, biotillgänglighet och lämplighet för ett visst experiment. Kännedom olika vägar bör ge forskarna möjlighet att administrera sitt ämne på bästa sätt för sin forskning. Till exempel, en rutt som främjar en snabb absorption av ett ämneSåsom intravenös eller intraperitoneal, ska inte användas om forskaren vill administrera substansen i en långsammare verkande sätt. Senaste recensioner av några av dessa tekniker och överväganden för volym, utrustning och lösta ämnen kan finnas i två artiklar av Turner et al. 1,7

Då ämnen ska ges till gnagare, bör hänsyn tas till rätt storlek av utrustning och volym av ämnet (som anges i tabell 1). Fel storlek utrustning eller stora volymer kan resultera i obehag, skada eller död för djuret. Generellt ämnen administreras parenteralt är sterila, utom när forskningsmål skulle göra detta omöjligt (dvs bakteriella studier). Föreningar och biologiska bör vara i en löst eller fordon som kommer att få minst påverkan på djuret. En fysiologiskt pH (7,3 -7,4) är i allmänhet väl accepterat, särskilt för subkutan, intramuskulär, och intraperitoneal rutter. Icke-fysiologiska pH-nivåer i ämnen som förvaltas av dessa vägar kan leda till smärta eller nekros och vävnadsskada. Bredare sortiment av pH tolereras med intragastriska och intravenöst 7. I små gnagare, är en annan viktig faktor möjligheten kylning om stora volymer av rumstemperatur vätskor ges. Om vätskor administreras intravenöst eller intraperitonealt, i synnerhet till stöd för en sjuk djur, bör de värmas upp till kroppstemperatur (37 ° C).

De administreringsvägar som diskuteras i detta protokoll är de som vanligen används i många forskningsprogram, är enkla att bemästra, och i allmänhet inte kräver narkos. En nästan oändlig variation av administreringsvägar är möjliga, men inklusive intrakraniell, intratekal, epidural, intratrakeal, intraosseous och intraartikulär att nämna några. Utbildning i dessa specialiserade administreringsvägar bör sökas från människor whO har lång erfarenhet av rutten och goda resultat.

Hos gnagare är intranasala vägen vanligtvis används för att studera ämnen som införts till lungorna via en mer "naturlig", metod än intratrakeal instillation. Möss och råttor är obligata näsa som andas, så förmå dem att andas mycket små mängder vätska är inte svårt, även i medvetande djur. Eftersom nässlemhinnan är väl försedd med blodkärl, intranasal administrering av vissa ämnen kan likna intravenös administrering. Denna väg rekommenderas inte hos djur med rinit, dock som kan äventyra absorptionen. Försök att administrera stora volymer av den intranasala vägen kan resultera i dyspné eller drunkning av djuret.

Intramuskulära injektioner ger snabb absorption av ämnen. Intramuskulära injektioner kan vara utmanande i råttor och möss på grund av sin ringa storlek och motsvarande små muskler. De utförs i bakbenets.. På grund av risken för skada av ischiasnerven, är quadriceps femoris muskeln val.

Även om både subkutan och intradermala vägar involverar huden, finns det skillnader mellan biotillgängligheten för ämnen som släpps ut i huden vs underhuden. Subkutan administrering anses ofta vara en "deposition" rutt med långsammare absorption än andra vägar, såsom intravenös eller intraperitoneal. Intradermal administrering används för mycket små volymer av ämnen, typiskt immunstimulerande substanser såsom adjuvans-antigen blandningar. I båda fallen bör de administrerade substanserna vara fysiologiskt pH och icke-irriterande. Intradermal eller subkutan injektion bör inte utföras i nackskinnet, eftersom detta är en vanligt ställe för kvarhållande av gnagare.

Intravenös och intraperitoneal administrering ofta anses likvärdig i gnagare. Intravenösa vägar för dosering ge mer rAPID upptag av föreningar, men samtidigt intraperitoneal administrering bör övervägas motsvarar ungefär oral administrering 8. Försiktighet bör iakttas med föreningar administreras intraperitonealt eftersom de kan orsaka smärta om felaktigt buffrad. Den gemensamma vägen för intravenös bolusadministrering hos gnagare är via svansvenerna. Om kronisk intravenös administrering av ett ämne önskas bör implantation av venös eller arteriell kanyler övervägas. Ämnen som tillförs intravenöst ska levereras aseptiskt och bör visas vara säkert att administrera intravenöst. Till exempel, ämnen som kan inducera hemolys, trombos, eller vaskulit är inte lämpliga för intravenös administrering.

Den intragastriska eller oral sondmatning väg används ofta för att efterlikna en gemensam dosering rutt hos människor. Det möjliggör också exakt dosering av ämnen jämfört med peroral tillförsel via livsmedel eller vatten. Biotillgänglighet av föreningaradministreras via sondmatning varierar beroende på den matade / fastande av djuret, liksom det lösta ämnet eller vehikel av föreningen eller biologiska. Sondmatning eller utfodring nålar bör vara av lämplig storlek för djuret som används och bör rengöras mellan djur, om disponibla sondmatning nålar är inte praktiskt. Skador orsakade av sondmatning är inte ovanliga och inkluderar avsättning av ämnet i lungan eller bristning i magen eller matstrupen. Utbildningen bör övervakas av en erfaren part och utförs på euthanized djur först, sedan sövda djur (som kommer att avlivas) innan sondmatning på vakna djur görs. Första sondmatning försök på vakna djur bör omfatta normalstora djur och små volymer av ett ämne, såsom saltlösning, som inte kommer att orsaka skada om proceduren går snett. Djuren bör noga utvärderas för tecken på ångest, som flämtande, blir blå, blödning eller kraftig salivavsöndring, efter sondmatning och avlivas vid behov. Om euthanasia krävs djuret bör obduceras för att fastställa varför det sondmatning förfarande misslyckades.

Disclosures

Författarna är anställda i Charles River.

Acknowledgments

Den forskning som presenteras här stöddes av Charles River.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Needles Various Various Needles are sold by both gauge and length. Check both before ordering.
Syringes Various Various Always choose an appropriate size for the volume to be administered.
DecapiCones Braintree Scientific DC-200, DCL-120, MDC-200 Available in mouse and rat sizes.
Rodent restrainer Harvard Apparatus, Braintree Scientific, Plas-Labs, others Available in clear Plexiglas, adjustable plastic, and sized for mice and rats.
50 ml conical tube Various
Feeding needles VWR, Popper and Sons Various Fit the needle gauge and length to the animals as described above. Both disposable and reusable feeding needles are available.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider. JAALAS. 50, 600-613 (2011).
  2. Diehl, K. H. A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. J. Appl. Toxicol. 21, 15-23 (2001).
  3. Hurst, J. L., West, R. S. Taming anxiety in laboratory mice. Nat. Methods. 7, 825-826 (2010).
  4. Maurer, B. M., Döring, D., Scheipl, F., Küchenhoff, H., Erhard, M. H. Effects of a gentling programme on the behaviour of laboratory rats towards humans. Appl. Anim. Behav. Sci. 111, 329-341 (2008).
  5. Cloutier, S., Newberry, R. C. Use of a conditioning technique to reduce stress associated with repeated intra-peritoneal injections in laboratory rats. Appl. Anim. Behav. Sci. 112, 158-173 (2008).
  6. Romanovsky, A. A., Kulchitsky, V. A., Simons, C. T., Sugimoto, N. Methodology of fever research: why are polyphasic fevers often thought to be biphasic. Am. J. Physiol. 275, 332-338 (1998).
  7. Turner, P. V., Pekow, C., Vasbinder, M. A., Brabb, T. Administration of substances to laboratory animals: equipment considerations, vehicle selection, and solute preparation. JAALAS. 50, 614-627 (2011).
  8. Lukas, G., Brindle, S. D., Greengard, P. The route of absorption of intraperitoneally administered compounds. J. Pharmacol. Exp. Ther. 178, 562-564 (1971).
  9. AALAS. Laboratory Mouse Handbook. AALAS. (2009).
  10. AALAS. LAT Training Manual. AALAS. (2009).
  11. AALAS. LATg Training Manual. AALAS. (2009).
  12. Barnett, S. W. Manual of Animal Technology. Wiley-Blackwell. 440 (2007).
  13. Baumans, V., Pekow, C. A. Handbook of Laboratory Animal Science. Hau, J., Schapiro, S. J. 1, CRC Press. 401-446 (2010).
  14. Bogdanske, J. J., Hubbard-Van Stelle, S., Riley, M. R., Schiffman, B. M. Laboratory Mouse Procedural Techniques. CRC Press. (2011).
  15. Danneman, P., Suckow, M. A., Brayton, C. The Laboratory Mouse. CRC Press. (2000).
  16. Sharp, P. E., La Regina, M. C. The Laboratory Rat. CRC Press. (1998).

Comments

7 Comments

  1. Hi,
    What is the possibility that I could request a DVD of the mouse handling training video. I will use it for training purposes at uconn.
    Thank you
    Janet

    Reply
    Posted by: Janet T.
    October 25, 2012 - 8:17 AM
  2. Hello Janet,

    Thank for viewing the video article and we're delighted to hear you found it to be helpful.

    Our goal is to provide the video via joVE so it can be accessed from any site as needed. You can certainly link directly to the article for your internal trianing needs, but at this time we are not offering the video in other formats including DVD/CD. If that changes, I have your contact inforamation and will follow up with you.

    Regards

    Elton

    Reply
    Posted by: Elton M.
    October 26, 2012 - 12:35 PM
  3. This video is a great tool for the training of technicians and graduate students. It is accessible and easy to follow for people that are more comfortable with visual training.

    Reply
    Posted by: Rana S.
    January 30, 2014 - 1:25 PM
  4. I can not download this video what is the problem ?

    Reply
    Posted by: maryam s.
    June 10, 2014 - 1:28 AM
  5. please send me this video to my email .i can not download it

    Reply
    Posted by: maryam s.
    June 10, 2014 - 1:29 AM
  6. How do i download the video?It is great for teaching purposes.

    Reply
    Posted by: Dotte Chegu A.
    September 12, 2014 - 3:39 AM
  7. Hi,
    I have seen your video administration in rodents by different routes and handling. Really, I found it very useful in my work and thanks a lot. In the video you have shown administration for all the routes except Intra-articular route. Intra-articular drug injection is very important for my studies could you please update that video also. It would be very helpful for me.

    Thanks and regards
    Mukesh Dhanka

    Reply
    Posted by: Mukesh D.
    September 9, 2016 - 10:21 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics