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PTMScan - 翻译后修饰的蛋白质组学

Jeffrey C. Silva1, Charles L. Farnsworth1, Xiaoying Jia1, Matthew P. Stokes1, Albrecht Moritz1, Ailan Guo1, Roberto D. Polakiewicz1, Michael J. Comb1
1Site Discovery Group and PhosphoScan Services Group, Cell Signaling Technology, Inc.

Abstract

PTMScan ®从细胞信号转导技术委员会(科技)技术结合专有的抗体为基础的肽浓缩的方法用液相色谱 - 串联质谱(LC-MS/MS)定量简介翻译后修饰,如磷酸化(PTMS)(PhosphoScan ®) (UbiScan ®),泛素化和乙酰化(AcetylScan ®)。

PTMScan ®技术采用科技委™Motif的抗体分开预定义组的翻译后修饰肽在消化细胞提取物未修改的肽。这种免疫净化技术结合的LC-MS/MS确定和量化改性肽的丰度的变化。 Motif的抗体特异性结合(酪氨酸,丝氨酸,苏氨酸)的磷酸化肽,乙酰肽,或泛素标记肽,使细胞的磷酸化,乙酰化,泛素化状态的定量分析。

MAPK,mTOR和PI3K/Akt信号通路关键的信号通路的激活下游致癌受体酪氨酸激酶(RTK的)。所有这些通路的激活AGC激酶家族成员,包括AKT,RSK的,和P70中六激酶,其蛋白磷酸化底物的RxRxxS / T图案。

假定这些AGC家族激酶基板超过300 phosphoproteomic由科学家们在科技委(Sci.信号(2010)24 3(136):ra64)创作在最近的研究,确定了三个细胞系,无论是表皮生长因子受体驱动, c - Met的,或PDGFR。聘用PhosphoScan ®技术使用RxRxxS / T Motif的抗体亲和试剂的选择性免疫沉淀,使Akt,RSK的P70中六激酶的磷酸化底物的实验方法。这些RTK的信令网下游的映射允许特定的PI3K,mTOR的,和MEK抑制剂的使用有针对性的治疗癌症的药物。基板包括参与许多细胞功能的蛋白质,包括棚架,蛋白质的稳定性,代谢,贩运和活力。

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