Ex vivo İzole İskelet mikrodamar Hazırlık

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Bir

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Butcher, J. T., Goodwill, A. G., Frisbee, J. C. The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity. J. Vis. Exp. (62), e3674, doi:10.3791/3674 (2012).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

İzole mikrodamar hazırlanması, böylece perfüzyon direnci 1-5 farklı faktöre katkı kontrol eden damar çapı incelenmesi için izin veren bir ex vivo hazırlanması, ve. Bu başlangıçta. 15 birkaç yıl önce Uchida ve ark, büyük ölçüde, olduğu klasik bir deney preparatıdır. Bu ilk açıklama kapsamlı öncelikle Virginia 6-8 Üniversitesi'nde Dr Brian Duling laboratuvarında, değiştirilmiş ve geliştirilmiş oldu teknikleri için temel oluşturmuştur ve biz sayfalarda güncel bir yaklaşımla sunmak. Bu preparasyon özellikle tercih mikrodamar gibi bir sıçan gracilis arteriyol bakınız, ancak bazik hazırlanması kolay türler arasında yaklaşık 9-13 başka doku veya organ izole damarlarının uygulanabilir. Izole mikrodamarlar Mekanik (yani boyutlu) değişiklikleri kolayca değerlendirilebilirfizyolojik (örneğin, hipoksi, damar içi basınç veya kesme) veya farmakolojik zorluklar ve sağlam bir entegre yanıtları oluşan mekanik elemanlar içgörü sağlayabilir, ancak ex vivo, doku geniş bir dizi yanıt olarak. Bu yöntemin önemi de damar içi basınç (miyojenik), otonomik innervasyonu, hemodinamik de dahil olmak üzere, diğer kaynaklardan gelen katkıların çoğunun kontrolü için izin verirken o, mikrodamar çapında entegre regülasyonu üzerine etkilerinin kolay manipülasyon için izin vermesidir ( makaslama stresi), endotel bağımlı veya bağımsız uyaranlar, hormonal ve parankimal etkileri, kısmi bir liste sunmak için. Uygun deneysel koşullar altında ve uygun hedefleri ile, bu in vivo ya da kolayca geniş sistemik değişkenlerin uyduruk kontrolü için izin vermez yerinde doku / organ hazırlıklarda, üzerinde bir avantaj olarak hizmet verebilir.

MaBu hazırlığın jor sınırlama aslında onun güçlü yönlerinden sonucudur. Tanım olarak, bu gemilerin davranışları vasküler rezistans düzenlenmesinde en önemli katkıda bulunan birçok Gibi, nöral humoral, metabolik, vb dahil olmak üzere, kaldırılmış koşullarda çalışılmaktadır, araştırmacı önlemek için aşırı ihtar verilir yorumlanması ve bu hazırlık kullanılarak toplanan verilerin ekstrapolasyonu. Bu hazırlık ile ilgili endişe diğer önemli alan bu tür endotelinde veya damar düz kas gibi hücresel bileşenlere zarar çok kolay olabilir yani, hata bu tür değişken kaynak sokulabilir. Kuvvetle bireysel araştırmacı deney başlangıcında ve periyodik bir protokol boyunca hem hazırlık kalitesini sağlamak için uygun ölçümler kullanmak önerilir.

Protocol

1. Deney öncesinde

  1. Deney günü önce, istasyonu için uygun boyutta cam kılcal boru mikropipetler (ya bir yatay ya da dikey çekme kullanılabilir) içine çekilmektedir. Biz genellikle 50-150 mikron arasında bir çap aralığında kullanılmasına rağmen, uç çapı kolayca, izole olan geminin bağlı olarak ayarlanabilir. Bunlar daha sonra bir bütan ateşte mikrodamar istasyonu aşağıdaki ısıtma için uygun yapılandırma için eğilir. Mikropipet ipuçları fiziksel söz mikrodamar için (ince forseps ile) yaklaşık çapına kırılmış ve can zemin veya özel uygulama için gerekli uygun konformasyonlar, cilalanabilir. Vardır Bu işlemler üzerindeki geniş ve üstün inceleme için, okuyucunun Davis vd yönlendirilir. 16. İki mikropipetler sonra mikrodamar odası için pipet sahipleri içine muhalefet yerleştirilir. Bu yönelik olmalıdır, öyle ki uçlarıdamar odacık içinde aynı dikey ve yatay düzlemde yer almaktadır.
    Bu yazıda (Şekil 1 ve 2) kullanılan mikrodamar odası (Wisconsin Tıp Fakültesi'nde Fizyoloji Anabilim Dalı Sayın David Eick tarafından yaptırılan özel olandır http://www.phys.mcw.edu/ ve www . eicktech.com ). Ancak, mikrodamar odasının diğer bazı konfigürasyonlar Living Systems Araçları (tarafından geliştirilen ile, hali hazırda ticari olarak mevcuttur http://www.livingsys.com/ ) ve IonOptix ( http://www.ionoptix.com/ çok yaygın olmak üzere). Bu diğer sistemleri kullanarak, bu spesifik deneyi ve ekipman gereksinimlerine bağlı olmasına karşın, bir ters mikroskop ziyade geleneksel bir dik bir kullanmak için şart olabilir. Ters mikroskopların kullanımı deneysel protoc tercih olacaktırflüoresan veya konfokal görüntüleme gerektiren ols.
  2. Fizyolojik bir tuz solüsyonu (PSS; aşağıda özetlenen) hazırlayın ve pH belirli deneysel koşullar (7,38-7,42 tipik ve fizyolojik aralıktadır) için uygun seviyede sağlamak ayarlanır. PSS çözümü önceden ve buzdolabında hazırlanmış olabilir ancak kullanmadan önce pH için uygun sıcaklıkta kontrol edilmelidir. Bu evrensel zorunlu olmasa da deneyci veya belirli protokoller, gerektiriyorsa PSS albümin içerebilir.
  3. Damar çapı ölçmek için kullanılan dijital video kaliperleri bir hemositometre veya mikroskop sahne mikrometre kullanılarak kalibre edilmelidir. Doğru kalibrasyon için, bu mikrometre damar haznesindeki girişi / çıkış mikropipetler ile aynı düzlemde yerleştirilebilir hayati önem taşır.
  4. Pipetler için mikrodamar tutturmak için kravat döngüler hazırlanacak ve daha sonraki kullanım için kolay erişilebilir olmalıdır. Bunlar, kolaylıkla 8-0 ya da daha küçük oftalmik s hazırlanabiliruture. Tek kravat döngü önceden hazırlanan ve (bu kaybolmuş onları tutacak) kadar gerekli bir mikroskop lamı çevreleyen ters bant küçük bir şeride kapalı petri saklanabilir. (Şekil 3).

2. Deney günü

  1. Tüm destek malzemesi açık ve düzgün fonksiyon için kontrol edilmelidir. , Tüm basınç dönüştürücüler ve geminin kamara tahliye pompası (Şekil 1A ve 1B) - Bu anti-vibration/floating masa ve dolaşan sıcak su banyosunda (genellikle 37 ° C damar banyosuna uygun sıcaklık sağlamak için ayarlanabilir) içerir. Gemi odasında ve perfüzat ve superfusate rezervuarlarda dengelenme gazlar açın.
  2. Rezervuarlar, tüpler ve PSS çözüm odaları tüm doldurun. Girişi pipet giden perfüzat hattı tamamen va çıkarmak ve zarar verebilir bu hat hava kabarcıklarının varlığı önlemek doldurulmalıdırscular endotel (Şekil 1C). Gerekirse, yavaşça tamamen dolu olduğunu sigortalamak için pipet aracılığıyla ve perfüzat akışını engelleyerek, herhangi bir tıkanma olmadan PSS tüm yol itmek için bir şırınga kullanın. Girişi basınç basınç dönüştürücüler zarar görmemesi için makul sınırlar içinde tutulmalıdır.

3. Mikrodamar Hasat

  1. Mikrodamar alınacak olan ikinci bir hayvanın anestezi ardından, söz konusu kabın üzerinde çalışma yapılacak olan damarsal için en uygun olan prosedürlere göre izole edilmesi gerekir. Diğerlerinde, gemiler (örneğin, kas) anestezi hayvan doğrudan çıkarılabilir ise bazı durumlarda, bu, organ kendisi (örn., serebral veya koroner mikrodamarlar) çıkarılmasını gerektirebilir. Gracilis kas içindeki damar yönelimi bir örnek Şekil 4'de gösterilmektedir. Için ile önceden uzaklaştırılması için in vivo olarak teknenin uzunluğu tahminboletus mantarı veya küçük kaliperler. Hayvan / organ geminin çıkarılması öncesinde, gemi odası hazır ve (yerde tüm kravat döngüler dahil) düzgün olduğundan emin olmak için son bir kontrol yapmak çok yararlı olabilir.
  2. Ince forseps ile bir ucunda geminin dış tarafında tutarak ve serbest kadar geminin uzunluğu boyunca kesme, herhangi asılarak veya gemide çekerek görmemesi için çok dikkat alarak hayvan / organ damar çıkarın. Sonra, derhal serbest PSS ile dolu bir 1.7 mL santrifüj tüpüne yerleştirin ancak geminin gitmesine izin vermeyin. Bu yönlendirme hatırlamak, banyosu içinde öyle ki perfüzat yönde hayvanda kan akışı doğrultusuna özdeş olacaktır.

4. Gemi Cannulating

  1. Dolu banyo gemi yerleştirin ve giriş pipet üzerinde proksimal ucunu kanüle. Bu en iyi mütevazı bir perfüzyon kanülü oranı (~ 50 mmHg basınçlı) ile yapılabilirince forseps bir çift proksimal damar lümeni duvarı (yani, her el forseps bir çift) her iki tarafında tutmak için kullanılır. Laboratuarımızda, biz Güzel Bilim Araçlar (gelen ince forseps kullanmak http://www.finescience.com/Home.aspx herhangi bir uygun şekilde inşa forseps etkin çalışacaktır rağmen). Kanül ipuçları geminin Kayma ve iki kravat döngüler geminin güvenli olabilir noktaya ucunda gemi ilerlemek.
  2. Daha fazla gemi şişirmek ve distal pipet üzerinde kanülasyon kolaylaştırmak için ~ 75 mmHg girişi basınç kaldırın. Damar yolu ile Akış damarın distaline çıkışı (mikroskop altında) superfusate rezervuar bir bozulma olarak görülmelidir. Çıkış pipet üzerinde damarın distaline sonuna kanüle ve iki kravat döngüler (bu son döngüler önce kanülasyona yerde olmalıdır; Şekil 5) ile sabitleyin.
  3. Gereksindiği XYZ koordinatları kadar kanül ayarlayınd kadar orada kap içinde az distorsiyon, ve teknenin uzunluğu in vivo yaklaşır. Normalde bu damar segmenti (laboratuvar gracilis kası 8 büyük direnci arteriyoller için ortalama kan basıncı% 80 kullanır) tarafından yaşanan ortalama kan basıncı yüzdesi yaklasik kadar giriş basıncı kaldırın.
  4. Banyo ve mikroskop objektif sıçramasını önlemek için odanın her yerinde plastik wrap veya bir cam kapak içine uygun bir gaz karışımı sağlayan küçük bir kabarcık taş yerleştirin. Daha küçük boyutta etkili olarak iyi çalışır ancak biz, tüm pet / akvaryum dükkanlarında yaygın olarak mevcuttur ve çapı yaklaşık 1 cm köpüren bir taş kullanın. Köpürme taş varlığı her zaman gemi için uygun gaz kullanımını sigortalanır ve damar canlılığı uzatacaktır. Bu taş bükülmesini önlemek için tüm ölçüm periyodu (ya da geçici olarak kesintiye taş üzerinden hava akışı) sırasında kaldırılırgörüntü. Çıkış pipet üzerinde kelepçe bırakın ve 30 dakika boyunca damar akışı sağlar. Belirli aralıklarla, akış geminin istirahat tonu gelişmekte olup olmadığını belirlemek için çıkış hortumu az kenetlenmelidir. Tüm gemiler bu noktada basınç kaçakları kontrol edilmelidir. Kaçaklar kabına bilinen bir basınç (biz bunlara 100-120 mmHg kullanın) tanıtılması ve girişi, satırları takip, çıkış sıkma tarafından görülecektir. Intraluminal basınç stabil ise, herhangi bir fark edilebilir bir sızıntı vardır. Basıncı düşmeye başlar Ancak, önemli bir kaçak varsa ve kapalı olmalıdır. Giriş veya çıkış pipetler ya da Kaçaklar normal pipet üzerinde geminin etrafında bağlı ek bir döngü ekleyerek düzeltilmesi olabilir. Bir gemi sızıntı sağlayan küçük bir yan dal varsa Alternatif olarak, bu etkili baskı içeren ve hata için ek bir kaynak tanıtabilirsiniz geminin yeteneğini tehlikeye atmış olursunuz. Bu sızıntı tespit edilirse, normal w kapalı bağlı olabilir10-0 oftalmik dikiş ITH tek bir döngü. Alternatif olarak, kravat döngü yapmak için 6-0 sütür ile alay tek bir iplikçik de oldukça etkilidir. Sızıntı tespit edilemeyen veya etkili (örneğin, yan dal ve sadece damar duvarındaki bir delik hiçbir gövde yoktur) off bağlı olamaz, bu deney bir erken sonlandırılmasına yol haline alternatif bir gemi kullanabilirsiniz Gerekli (bu, genellikle diğer bacakta özdeş kap olup - hayvanın - ya karşı taraf gerekirse).

    Teknenin 30 dakika en az için bir akım şartlarında dengelenmeye izin verilmelidir. Bütün deneyler akış koşullar altında gerçekleştirilmektedir. Damar tatminkar tonu geliştirilen ve söz konusu deney için eklenmesi kriterlere duyarlı sonra, damar sonraki çalışma için hazırdır.

    Bu dahil edilme kriterleri spesifik deneysel protokol ve araştırmacı bağlı olarak değişebilir. Laboratuarımızda, rutin utAşağıdaki ilize:
    1. >% 30 (ΔD Ca2 + içermeyen PSS ve D max maruz yanıt olarak dengelenmesi basınç altında değerlerden arterioler iç duvarına çapı artıştır ΔD / D max x 100, hesaplanan maksimum aktif tonu çapı Ca2 + içermeyen PSS içinde dengeleme basınç) ile ölçülür.
    2. Bir açıdan, vasküler düz kas tabakasının bir indeks olarak miyojenik aktivasyonu (bakımı, veya tercihen artan intraluminal basınç ile arteriolar çapı, bir azalma).
    3. Olarak asetilkolin için tempolu bir dilatör yanıt (banyosunda 10 -6 M) ile kanıtlandığı bir canlı endotelinde.
    4. Ek inklüzyon kriterleri gibi fenilefrin olarak adrenerjik agonistler (10 -7 M), örneğin adenosin gibi ek uyarıcılar (10 -5 dilatör yanıtlarına kısıcıdan yanıtları dahil olmak gerekirse spesifik deneysel protokol, uygun şekilde eklenebilir 2) destek.
  5. Aşağıdaki, bir bölümü "taklit deneyi" bir örnektir. Gerekli tüm çözümler damar odasında PSS seyreltme faktörü hesaba ödenen dikkat uygun olarak hazırlanır. Bir örnek olarak, bazı ekipman için, kap bölmesinin hacmi 20 ml 'dir. Damar haznesi banyosu içinde 10 -5 M etkili bir konsantrasyonda bir 10 -2 M stok solüsyonu sonuç gibi, 20 ul gibi. Yukarıda açıklandığı gibi gemi kaldırma, kanülasyon, denge ve doğrulama ardından, deney başlamak için hazırdır. Bu tür tedavi randomizasyon ve etkinliği gibi özelliklerini deneme özgüdür ve bu çaba için aşırı alanı tüketilir. Bu şekilde, bu detaylı olarak dahil edilmemiştir.

    Başlangıç ​​kontrolü yanıtları belirlenir. Böyle miyojenik aktivasyon (basınç bağlı daralma), intralumenal pr gibi bir örnek fizyolojik uyaran için(Bu durumda, bir 5-7 dakikalık bir süre izin verecek) essure rastgele istenen aralığında değişir, ve teknenin yanıt için uygun bir zaman dönemi izin verilir. Böyle asetilkolin ile mücadele olarak bir örnek farmakolojik uyaran için, ilaç, bir rastgele stok çözeltileri ile geri eklenir. Bu durumda, bu normal olarak dengelenmesi çapının restorasyonu olarak tanımlanması gibi yıkanmaya ile, 10 -9 gelen banyosu içinde 10 -5 M arasında değişen bir aralıkta kullanacaktır. Asetilkolin hızlı hareket eden ajan olarak, maksimal dilatör yanıtları kolaylıkla sadece bir kaç saniyede elde edilebilir. Diğer maddeler (örneğin, peptidler gibi) maksimum tepki ve bu kadar hesabı yanı sıra etkili arınma için alınan süre dikkate alınmalıdır. Ortaya çıkarmak için çok daha uzun sürebilir Kontrolü yanıtları toplanmıştır sonra, belirli müdahaleler reseptör agonistleri / antagonistleri, spesifik iyon kanalları oyunculuk ajanlar, teşvik edilmesi ile gemi kuluçka dahil sistemi empoze edilebilirdeğişmiş intraluminal basınç, en yaygın girişimlerin birkaç isim dengelenme gazlar veya özel enzim sistemleri hedefleyen farmakolojik ajanlar farklılıkları.

    Müdahale için uygun bir zaman sonra (uygun şekilde test edilmelidir olan) geçerli olmak üzere, veri toplama, bir sonraki turda başlatılabilir. Spesifik deneysel protokole bağlı olarak, sonraki müdahaleler gemi empoze edilebilir ya da ilk (ya arınma tarafından - mümkünse - fizyolojik meydan okuma ya da basit çıkarılması) kaldırılabilir. Damar olan dengeleme durumuna (teyit edilmesi gereken) geri sonra ek veriler ile birlikte toplanır gerektiği gibi, takip eden müdahaleler uygulanabilir. Geminin hazırlığının kalitesi altında önceden belirlenmiş eşik kriterler düşene kadar bu genel işlem deney bitimine kadar devam etmiş veya olacaktır (örneğin, bir agonist veya yeterli aktif ton geliştirme yeteneği yanıt). Bu noktada, deney ya varıldı, veya araştırmacı izole damar (örneğin miyojenik aktivasyon aynı prosedür kullanılarak yapılabilir damar duvarının mekaniği, tıpkı reaktivitesini bağımsız veri toplamak isteyebilirsiniz tüm aktif tonu 14) yoksun bir gemi ile.
  6. Tüm ekipmanın düzenli temizliği, tuz birikimini ortadan kaldırılması ve istenmeyen biyolojik varlıkların büyümenin önlenmesi için gereklidir. Her deneyde günün sonunda, en azından, tüm hatları ve odaları tamamen distile veya de-iyonize su Bol PSS kızardı ve tamamen kurumaya bırakılır. Kullanılması, her 2-3 gün sonra, etil alkol ile bir yıkama gibi gerçekleştirilir ve ekipman tamamen kurumaya bırakılır. Tutarlıdır kullanım her hafta sonu, bütün hatlar ve odaların yukarıdaki gibi su ile tamamen yıkandı ve sonra 30 dakika boyunca 'inkübe' izin, 0.1 M hidroklorik asit ile doldurulmuş ve edilir. Son olarak, atArdışık kullanım 2-3 hafta sonunda, tüp tüm kesimlerinin yeni değiştirilir ve oda ve rezervuarların 1.0 M HCl ile temizlenir de-iyonize / saf su ile durulama geniş bir takip. Eğer borular veya odası / rezervuar, bu da değiştirilmesi veya tamamen uygun bir şekilde temizlenir herhangi bir unsuru bir büyüme tüp veya görsel kurulması herhangi bir renk. Düzenli temizlik ve genel bakım, donanım çok uzun bir zaman sürebilir. Yazma zamanda, bizim gemi odaları bunların 8 inci veya rutin kullanım 9. yıl içine tüm ve biz onlarla anlamlı zorluk yaşadım.

5.. Temsilcisi Sonuçlar

Şekil 1A
Şekil 1A. Bu rakam temel mikrodamar istasyonu kurulum sunuyor. Görüntüleme gemi için A = televizyon, B = dijital kumpas; superfusate thr ittiği için C = şırıngaough girişi pipet gerektiği gibi; D perfüzat girişi basınç değişimi için = hidrostatik sütun; E = mikroskop, F = mikrodamar odası; G = superfusate rezervuar, H = basınç monitörü (birden fazla gerektiğinde eklenebilir); I = mikrodamar odası tahliye pompası superfusate; J = dengelenme gaz karışımı tank, K = atık (superfusate için) içeriyordu; L = dolaşan su ısıtıcısı; M = anti-vibration/floating tablo.

Şekil 1B
Şekil 1B. Bu rakam mikrodamar odasının kurulumu daha yakın bir görünüm sunar. Bu şekilde, E = mikroskop, F = mikrodamar odası, H = basınç monitörü (biz basitlik için sadece bir gösterirken, çok gerekli gibi farklı sitelere eklenebilir) I = mikrodamar odası tahliye pompası, N = tüp takılı çok perfüzat girişi pipet (Şekil 1A 'D' bir devamıdır) başında; O = boru perfüzat çıkış pipet bağlı.


Şekil 1C. Bu şekil mikrodamar odasının yakın görünümünü sunmaktadır. Bu şekilde, N = perfüzat satır (yani, perfüzat girişi pipet doğrudan bağlı boru); O perfüzat çıkış pipet doğrudan bağlı = boru; P = girişi pipet için yatay ve dikey konumu kontrol; Q = superfusate rezervuara gelen su banyosu için R = girişi (Şekil 1A 'G' bağlı); su banyosunda (Şekil 1A ve 1B 'ben' bağlı) için süzün.

Şekil 2
Şekil 2,. Bu şekil sisteminde sıvı ve gaz akışı şematik bir temsilini göstermektedir. Bu şekilde, A = PSS superfusate hat girişi, B girişi pipet için = PSS perfüzat hattı; konteyner atık banyo C = PSS superfusate göçü; D = Çıkış pipetle PSS perfüzat çıkışı; E odasına ceket içine = sıcak su girişi; F odasına ceket = sıcak su çıktı.

Şekil 3
. 8-0 bizim hazırlanmasında kullanılan ve birden fazla kravat döngüler depolanması; Şekil 3 Bu rakam oftalmik sütür (Panel A 10x okuler ve 4.5x ayarlanabilir zoom büyütme ile mikroskop aracılığıyla görüntülenebilir) yapılan bireysel kravat döngüler sunuyor ve üstü kapalı bir petri saklanan bir mikroskop lamı etrafında ters kaset 10-0 sütür (onları kaybetmemek için; Panel B).

Şekil 4
Şekil 4. Bu rakam önceki cerrahi izolasyon ve çıkarılması uygun uzamsal yönlendirme için izin vermek için gracilis kas direnci arteriyol bir görüntü (standart bir mikroskop aracılığıyla görüntülenebilir) sağlar.

ve_content "> Şekil 5,
Şekil 5. Bu rakam kanüllü mikrodamar temsili bir görüntü sağlar. Panel A iki girişi (A) ve çıkış (B) pipet gibi bağ döngüler (C) ile gösterilen teknenin tüm uzunluğu, gösterir. Panel B açıkça dijital kompas (bu durumda çapı 112 mm olan) ile arterioler iç çapı belirlenmesi gösteren, bir yüksek büyütmede bir görüntüyü göstermektedir.

Şekil 6
Şekil 6. Bu rakam kanüllü mikrodamar aşağıdaki dengelenme temsilcisi görüntüler sunar. Üst görüntü, kontrol altında bir geminin ise dengeleme basınç koşullarında unstimulated, ortadaki görüntü asetilkolin (banyosunda 10 -6 M) ile meydan dilatasyonu takiben aynı geminin ve alt görüntüyü takip eden gemi olan constrictiofenilefrin (banyosunda 10 -7 M) ile meydan n'ye.

Şekil 7
. Şekil 7 Bu rakam ile meydan yanıt olarak izole bir mikrovasküler ve yanıtları özetlemektedir: hipoksi (Panel A, ~ 40 mmHg ~ 135 mmHg sistemimizde perfüzat ve superfusate PO 2 azalma), asetilkolin artan konsantrasyonlarda (Panel B), kontrol koşullar ve bir kalsiyum içermeyen PSS (Panel C) ile kabın aşağıdaki inkübasyon altında damar içi basıncın değişir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Bu genel teknik kolaylıkla en dokular için uygulanabilir olmasına rağmen sunulan protokolü, bir iskelet kası mikrodamar izolasyonu, çıkarma ve çift kanül açıklanmaktadır. Mevcut yazı için dönem "arteriyol" da önemli bir bir organ perfüzyon direnç düzenlemesine katkı sağlayan veya dinlenen aktif ton altında çapı 70-120 mikron arasında değişen bir direnç damarı tanımlamak için yazarlar tarafından kullanılmıştır doku.

Bazı değişikliklerle, bu sistem spesifik araştırıcı için birden fazla uygulama için monte edilebilir ve kolaylıkla (örn., zar potansiyeli 17 belirlenmesi için transmembran elektrotların kullanımının) derinliği deney daha sağlamak için ilave teknikleri birleştirmek için olanak sağlar. Temel hazırlanması kritik bir adım her zaman, geminin kanüle için kullanılan giriş ve çıkış pipetler iyi eşleştirilir sigortalanması temiz kalmasını ve izin edilirakış ve basınç, basit bir şekilde muhafaza edilmesi. Pipetler enkaz dakikalık parçaları ile tıkanabilir, bu akışı geri ipuçları çok küçük parçalar koparmaya gerekli olabilir. Araştırmacı dikkatli olursa onlar da unclogged edilemez bir nokta veya geminin kanülasyonu çok zor oluyor yeterince büyük çaplarda ulaşana kadar, pipetler birden çok kez yeniden kullanılabilir. Ancak, bu cerrahi ve deneysel hazırlanması, ayrıntılara dikkatli ve belirli koşullara ve yönetmeliklere uygun değişiklikler ustalığı ile, araştırmacılar kolaylıkla fizyolojik ve farmakolojik zorluklar sayısız yanıt olarak vasküler reaktivite belirleyen yollar değerlendirebilir. Bu hazırlık da araştırmacı aktif tonu 14 koşullarda damar duvarında mekaniğine değişiklikler temel analizleri yapmak için izin verecektir. Bu gerçekten çok güçlü ve uyarlanabilir bir tekniktir ve bu biridirkolaylıkla uygulamalarda daha fazla bazik tepkilerin yüksek verim gösterim için ayrıntılı mekanistik çalışma aralığını kapsayan için de kullanılabilir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Çıkar çatışması ilan etti.

Acknowledgments

Bu çalışma, Amerikan Kalp Derneği (ÇED 0740129N) ve NIH T32 HL90610 tarafından desteklenmiştir.

References

  1. Goodwill, A. G., Frisbee, S. J., Stapleton, P. A., James, M. E., Frisbee, J. C. Impact of Chronic Anticholesterol Therapy on Development of Microvascular Rarefaction in the Metabolic Syndrome. Microcirculation. 1-18 (2009).
  2. Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. Increased vascular thromboxane generation impairs dilation of skeletal muscle arterioles of obese Zucker rats with reduced oxygen tension. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 295, H1522-H1528 (2008).
  3. Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. Growth-dependent changes in endothelial factors regulating arteriolar tone. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 292, H207-H214 (2007).
  4. Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. Hydrogen peroxide emerges as a regulator of tone in skeletal muscle arterioles during juvenile growth. Microcirculation. 15, 151-161 (2008).
  5. Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. Increased myogenic responsiveness of skeletal muscle arterioles with juvenile growth. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, 2344-2351 (2008).
  6. Dacey, R. G., Duling, B. R. A study of rat intracerebral arterioles: methods, morphology, and reactivity. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 243, H598-H606 (1982).
  7. Fredricks, K. T., Liu, Y., Lombard, J. H. Response of extraparenchymal resistance arteries of rat skeletal muscle to reduce PO2. Am. J. Physiol. 267, H706-H715 (1994).
  8. Durand, M. J., Raffai, G., Weinberg, B. D., Lombard, J. H. Angiotensin-(1-7) and low-dose angiotensin II infusion reverse salt-induced endothelial dysfunction via different mechanisms in rat middle cerebral arteries. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 299, H1024-H1033 (2010).
  9. LeBlanc, A. J., Cumpston, J. L., Chen, B. T., Frazer, D., Castranova, V., Nurkiewicz, T. R. Nanoparticle inhalation impairs endothelium-dependent vasodilation in subepicardial arterioles. J. Toxicol. Environ. Health A. 72, 1576-1584 (2009).
  10. Jernigan, N. L., LaMarca, B., Speed, J., Galmiche, L., Granger, J. P., Drummond, H. A. Dietary salt enhances benzamil-sensitive component of myogenic constriction in mesenteric arteries. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, H409-H420 (2008).
  11. Stapleton, P. A., Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. Altered mechanisms of endothelium-dependent dilation in skeletal muscle arterioles with genetic hypercholesterolemia. Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 293, R1110-R1119 (2007).
  12. Goodwill, A. G., Stapleton, P. A., James, M. E., d'Audiffret, A. C., Frisbee, J. C. Increased arachidonic acid-induced thromboxane generation impairs skeletal muscle arteriolar dilation with genetic dyslipidemia. Microcirculation. 15, 621-631 (2008).
  13. Baumbach, G. L., Hadju, M. A. Mechanics and composition of cerebral arterioles in renal and spontaneously hypertensive rats. Hypertension. 21, 816-826 (1993).
  14. Uchida, E., Bohr, D. F., Hoobler, S. W. A method for studying isolated resistance vessel from rabbit mesentery and brain and their responses to drugs. Circ. Res. 4, 525-536 (1967).
  15. Davis, M. J., Kuo, L., Chilian, W. M., Muller, J. M. I. solated Chapter 23. Isolated, perfused microvessels. In: Clinically Applied Microcirculation Research. Barker, J. H., Anderson, G. L., Menger, M. D. 32, CRC Press, Inc. 435-456 (1995).
  16. Lombard, J. H., Liu, Y., Fredricks, K. T., Bizub, D. M., Roman, R. J., Rusch, N. J. Electrical and mechanical responses of rat middle cerebral arterieal to reduced PO2 and prostacyclin. Am. J. Physiol. 276, H509-H516 (1994).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics