İnsan Pankreas Adacıklar için boyama Protokoller

Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

Welcome!

Enter your email below to get your free 10 minute trial to JoVE!





We use/store this info to ensure you have proper access and that your account is secure. We may use this info to send you notifications about your account, your institutional access, and/or other related products. To learn more about our GDPR policies click here.

If you want more info regarding data storage, please contact gdpr@jove.com.

 

Summary

Bu video hematoksilen ve eosin (H & E) ve immunohistokimyasal (İHK) kullanarak insan pankreas adacık karakterizasyonu için prosedürleri göstermektedir. Baş, gövde ve kuyruk bölgelerinden Pankreas bölümleri adacık endokrin kompozisyon (insülin, glukagon ve pankreatik polipeptit), hücre çoğaltma (Ki67) ve inflamatuar infiltrasyon (H & E, CD3) belirlemek için H & E ve İHK her ikisi tarafından boyanmış. Unsinat bölge pankreatik polipeptid için İHK kullanarak yerelleştirilmiştir.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Campbell-Thompson, M. L., Heiple, T., Montgomery, E., Zhang, L., Schneider, L. Staining Protocols for Human Pancreatic Islets. J. Vis. Exp. (63), e4068, doi:10.3791/4068 (2012).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Adacık alanı ve numaraları ve yetişkin insan pankreas endokrin hücre kompozisyon tahminleri birkaç yüz bin 500 ile 1500 mg 1-3 birkaç milyon ve beta kitle aralıkları değişir. Bu bilinen heterojenite ile, bir standart işleme ve boyama işlemi pankreas bölgelerinde açıkça tanımlanmış ve adacıklar titiz histopatoloji ve immunolocalization muayene kullanılarak karakterize edilmiştir böylece geliştirilmiştir.

Organ bağışında kurtarıldı insan pankreas işlenmesi için standart bir prosedür bu serinin ikinci bölümünde 1 de açıklanmıştır. Pankreas enine kesitler izledi 3 ana bölgede (baş, gövde, kuyruk) içine işlenir. Pankreas başından transversal kesitler daha ayrılır gibi büyüklüğüne göre belirtilen ve alt belirtmek için alfabetik sayılı. Bu standardizasyon oluşan adacıklar içerir unsinat bölgesi içeren kafa bölgesinde tam bir kesit analizi için olanakesas olarak kuyruğa bölgeye pankreatik polipeptid hücre.

Mevcut rapor, bu serinin parçası 2 oluşur ve adacık endokrin hücreleri, çoğaltma ve T-hücre infiltrasyonlar bir vurgu ile pankreas parafin kesitlerin seri kesit ve histopatolojik karakterizasyonu için kullanılan prosedürler açıklanmaktadır. Pankreatik bölümlerinin her iki patolojinin ekzokrin, ductular, ve endokrin bileşenleri karakterize etmek için tasarlanmıştır. Ekzokrin bölmesi özellikle pankreas intraduktal neoplasia 4 varlığı ile ilişkili olarak, pankreatit varlığında (aktif veya kronik), atrofi, fibroz, ve yağ gibi kanalı sistemi için değerlendirilir. Adacıklar morfolojisi, boyutu ve yoğunluğu, endokrin hücreleri, inflamasyon, fibrozis, amiloid, ve H & E ve İHK lekeleri kullanarak çoğaltan veya apoptotik hücrelerin varlığı açısından değerlendirilmiştir.

2. bölümünde tarif edilen nihai komponent lekeli sürgünün temin edilmesidirsayısallaştırılmış Tüm slayt görüntüleri olarak s. Sayısallaştırılmış slaytlar sanal bir biobank oluştururken bir online patoloji veritabanında durumunda pankreas ve bölgeye göre düzenlenir. Bu online toplama Erişim henüz tip 1 diyabet araştırmaya katılan 200'den fazla klinisyen ve bilim adamlarına verilmektedir. Online veritabanı parafin veya dondurulmuş seri bölümleri için blok seçmek için hızlı ve eksiksiz veri paylaşımı ve araştırmacılar için bir yol sağlar.

Protocol

1. Boyanmamış Bölümler için Microtomy

  1. Standart parafin microtomy için su banyosu ve mikrotom ayarlayın. Vaka sayısı, pankreas bölgesi (örnek) ve slayt numarası ile pozitif yüklü slaytlar ve ön etiketi kullanın. Sol tarafta kaset etiketi ile mikrotom ayna yerleştirin parafin blok.
  2. Doku eşit rastlayana kadar blok içine Normal microtomy prosedürleri, bölüm izleyin. Seri bölümler (4 mikron kalınlığında, ilk gerekli lekeler sayısına bağlı olarak 3-6 (Olgu Teslim Formu, Ek 1'e bakınız)) bir şerit üretmek. Şerit ayrı bölümler, kalemle sayılı emri ile slaytlar üzerinde sırayla her pick up ve yer. Bir bölüm tam sırası bölümleri numaralandırma kullanılmayan olup olmadığını gösterelim. Sola yönelik slayt etiketi ile kaset bulunan gibi slaytta aynı yönde koruyun. Gece boyunca oda sıcaklığında kurumaya sonra araştırmacılara boyama veya dağıtımı ile devam edin.
  3. Resoda sıcaklığında veya -20 ° C'de doku ve arşiv korumak için parafin ince bir tabaka ile parafin blok eal yüzey
  4. Sonraki microtomy için, yukarıdaki gibi her seviyede seri bölümler için numaralandırma korumak. 1 ek slayt edinin ve her blok içinde her ~ 100 uM düzeyi için H & E slayt tarafından leke.

2. H & E Boyama

  1. Autostainer ilk tepside sonra slayt rafa her bloğunun ilk seri kesitler slayt yerleştirin.
  2. Standart H & E boyama programı seçin ve her zamanki gibi devam edin.
  3. Boyama bittiğinde coverslipping için kaputu Autostainer ve yerden slaytları çıkarın.
  4. Standart tekniğini kullanarak Coverslip. Basılı bir etiket (bölüm 12) ile iyice ve etiket kurulayın.

3. IHC Set-up

  1. Çift lekeleri ve slaytların giriş numaraları için Dako programı seçin. TBST ve sitrat tampon, antikorlar, ve diğer Reag hazırlamakbelirtilen hacimleri (Tablo 1) 'e göre Ent. Reaktif tepsisi ve slaytlar yükleyin. Temiz ve atık hatları Dönme üretici tavsiyelerine göre programlanır.
  2. Elle bu testlerin yapılması halinde, tahmini hacimleri hazırlamak. Herhangi bir adım dışarı kurutma slaytlar önlemek için nemlendirilmiş bir odasında slaytlar inkübe edin. Autostainer için kullanıldığında her reaktifler için aynı işlemi uygulayın.

4. IHC Deparaffinization ve Antigen Alma

  1. 5 dakika ksilen slaytlar koyun. Kez tekrarlayın. Bu aşırı arka plan ve zayıf boyanma neden olacak gibi gösterene kadar slaytlar sonraki herhangi bir noktada kurumasına izin vermeyin.
  2. 2 dakika süreyle% 100 etanol slaytlar aktarın. Kez tekrarlayın.
  3. 10 dakika boyunca metanol içinde taze hazırlanmış% 3 H 2 O 2 slaytların koydu.
  4. % 90 Etanol ve sonra Dip slaytlar 3 dakika boyunca% 90 Etanol yerleştirmek.
  5. Transfer slaytlar1 dakika boyunca% 70 Etanol.
  6. De-iyonize su kaydırağı durulayın.
  7. Onceden vapur ve 5 dakika buharlı sitrat tamponu.
  8. 30 dakika buharlı ve buhar tampon sitrat için slayt ekleyin.
  9. Derhal su kaydırağı aktarmak ve oda sıcaklığında (~ 20 dakika) için serin çıkana kadar basılı tutun.
  10. Dizisi (Şekil 1) leke göre Dako Autostainer raflara slaytlar aktarın ve ikili boyama programı çalıştırın. Autostainer programın temel aşamalar elle çalıştırılır çoğaltmak böylece listelenmiştir.

5.. İlk Primer Antikorlar (Ki-67, CD3, Pankreatik Polipeptid)

  1. 15 dakika boyunca Sniper çözeltisi ile slaytlar bloke eder. TBST ile iki kez yıkayın.
  2. 30 dakika için primer antikor slaytlar inkübe. TBST ile iki kez yıkayın.
  3. 30 m için Mach2 keçi anti-fare (Ki-67) ya da anti-tavşan (CD3, pankreatik polipeptid) turbu peroksidaz (HRP) polimer ile inkübeinutes. TBST ile iki kez yıkayın.
  4. 4 dakika slaytların 3,3-diaminobenzidin tetrahydrochloride (DAB) uygulayın. Su ile iki kez yıkayın.
  5. Pankreatik polipeptid ile inkübe Slaytlar eşzamanlı olarak tahlil edilen Dako üzerinde tutulur ve geriye kalan slaytlar Primer antikor ikinci küme ile inkübe edilir ise tüm sonraki adım için kullanılan TBST. Alternatif olarak, manuel deneyleri için, bölüm 6 geçin.

6. İkinci Primer Antikorlar (İnsülin, Glukagon)

  1. 20 dakika Deeb slaytlar inkübe edin. TBST ile iki kez yıkayın.
  2. 20 dakika TBST (insülin) veya TBST içinde Sniper (glukagon)% 20 avidin engelleyici% 10 normal keçi serumu ile Blok. TBST ile iki kez yıkayın.
  3. 15 dakika için insülin veya glukagon Primer antikor ile inkübe edilir. TBST ile iki kez yıkayın.
  4. İnsülin: 30 dakika 1:300 titrede biotinlenmiş goat anti-kobay olarak inkübe slaytlar. TBST ile iki kez yıkayın. Standart ve ile inkübe30 dakika boyunca ctor ABC-AP reaktifi. TBST ile iki kez yıkayın.
  5. Glukagon: 30 dakika boyunca keçi anti-fare alkalin fosfataz (AP) polimer takiben 30 dakika süreyle inkübe sırasında tampon içinde kayar. TBST ile iki kez yıkayın.
  6. Slaytlar konjugatları inkübe edilir ise, oda sıcaklığına kadar ısınmaya LPR tamponu. Dako reaktif rafa kullanımı ve yer öncesi acil 3 mL tampon başına sıvı kalıcı kırmızı 1 damla (LPR) ekleyin. 4 dakika LPC slaytlar inkübe edin. Su ile iki kez yıkayın.
  7. 1 dakika hematoksilen slaytlar inkübe edin. Su ile iki kere durulanır.
  8. 1 dakika TBS pH 7.6 slaytlar inkübe edin. Su ile iki kere durulanır.
  9. DAKO Autostainer slaytları Unload.
  10. Hemen pankreatik polipeptid için boyandı slaytları kurutmak. Tüm çift boyalı kesitler için, en az 1 saat süreyle kuru sonra kurutmak.

7. Kurutma

  1. Yeri 1 dakika boyunca% 80 etanol içinde kayar.
  2. % 95 etanol içinde slaytlar eğimlidir. 30 saniye boyunca% 95 etanol slaytlar tutun.
  3. % 100 etanol slaytlar aktarın ve 1 dakika tutun. Tekrarlayın.
  4. Ksilen Dip slaytlar.
  5. 1 dakika ksilen slaytlar tutun. Tekrarlayın.
  6. Hemen cytoseal kullanarak slaytlara lamelleri monte edin.

8. Slayt Etiketleme

  1. Organ ve blok numarası, leke ve tarih ve yazdırma dahil durumda tanımlama bilgilerini girin. Seri numarası bölümüne her bloğun ilk slayt lekeler için isteğe bağlıdır. Sonraki seviyeleri numaralandırma ile gösterilir.
  2. Slaytlarda etiketler yerleştirin.

9. Slayt Tarama

  1. Tarayıcı tepsiye lekeli slaytlar yerleştirin ve enstrümantasyon göre tarayın.
  2. Donör ve doku tipi (pankreas baş, gövde, kuyruk, dalak) tarafından slaytlar düzenleyin.
  3. -20 ° C'de, oda sıcaklığında ve kalan boyanmamış slaytlar azından Arşiv boyalı kesitler kullanılmıştır kadar.

10. Hukntative Sonuçlar

Bu boyama işlemleri parafin ve taze donmuş blok temel karakterizasyonu sağlamak için Diyabet (nPOD) ile Pankreas Organ bağış için JDRF Ağı için geliştirilmiştir. Her verici bir temel karakterizasyon sahip 2 adet pankreas bölgeden blokları (baş, gövde ve kuyruk) ve dalak (Şekil 1, ayrıca vaka başvuru formu, Ek 1), leke oluşur yapıldı. H & E boyama boyunca kullanılan klinik dereceli çözümleri ile klinik bir tesis için de programlanmış bir Autostainer kullanılarak yapılır. Ek bağış bloklar kesitli olduğundan, her doku morfolojisini göstermek için H & E için alınan bir slayt vardır. Bloklar tekrar kesitli olduğunda, araştırmacılar dağıtım gibi, derin düzeyleri de hem de her düzeyde seri kesitler numaralandırma olarak tüm bloğun doku morfolojisi belgelemek temsilcisi H & E slaytlar için alınan slaytlar olacaktır. Vitray slaytlar etiketlidurumda, tanımlama, pankreas bölge, blok numarası, leke ve tarih (Şekil 2) ve çevrimiçi patoloji bilgi yönetim sistemi taranır. Bir kontrol donörden temsili görüntü Bu prosedür izlenerek beklenen sonuçlar göstermek için düşük ve yüksek büyütmelerde hem de Şekil 3 'de gösterilmiştir. Tahlil elle yapıldı ve hematoksilen counterstain azaltılmış lekelenme yoğunluğunu göstermektedir ile pankreatik polipeptid (D, H) ile slayt lekeli farklı bir günde ölçüldü. Primer antikor yoğunluğu boyama farklılıklar veya testler arasında counterstain özellikle bireysel renk düzeltme aynı hücre alanları veya sayıları elde etmek için gerekli olan görüntü analizi kullanılarak aksi slaytlar halinde kaçınılmalıdır.

Her laboratuvar sürü-için-pek çok varyasyon ve diğer reaktifler ve koşulları boyanma yoğunluğu ve özgüllük etkileyebilir olarak antikor konsantrasyonları optimize bekleyebilirsiniz. Yeni rea edinimi ilebeyler, boyama işlemleri eski reaktifleri gibi leke yoğunluğu aynı derecede ulaşmak için bilinen pozitif ve negatif kontrol örnekleri ile doğrulanır. NPOD patolojisi optimize çekirdekte Ek antikorlar bir referans kaynağı olarak Tablo 2'de verilmektedir ve konfokal mikroskopi için imünoflüoresan deneylerinde multilabeling için kullanılmıştır.

Şekil 1
Şekil 1.. Dako boyama ızgara. Bu şematik bir Dako Autostainer üzerinde yapılan bir nPOD Donör pankreasın bir rutin analizler gösteriyor. NPOD donörler 4 haneli bir kimlik numarası ile kodlanır. İki slayt tepsiler leke tarafından düzenlenen slaytlar gösterilir. Alternatif slayt yapılandırmaları donör slaytların numaraları bağlı olarak beklenmektedir. Pozitif kontroller iki çift lekeleri ve Ki-67 ve CD3 için donör dalak için bilinen bir pozitif verici dahil edilmesi yer alıyor. Negatif kontroller iki yönlüdür ve iki SLI dahildes insülin ve glukagon için donör dalak primer antikorlar ve iki slaytların ana türlerden immünglobulin (Ig) ile inkübe bir donör pankreas blok.

Şekil 2
Şekil 2. Dijital tarama yapılmadan önce Temsilcisi çift lekeli slayt. Tipik bitmiş slayt slayt etiketleme parametreleri ve doku yerleştirme ile gösterilir.

Şekil 3
Şekil 3. Temsilcisi H & E ve pankreas bölümlerde IHC lekeler. Yetişkin bir dişi organ donör (6096-04 PanHead) ve pankreas Kesitler ve gibi, protokolü açıklanan yapılan dijital taramaları idi. Görüntüler tüm bölümü (AD) ve bir adacık (EH) den ImageScope görüntüleme programı kullanılarak elde edilmiştir. Insülin, glukagon, ve pankreatik polipeptid için tahmin adacık leke yoğunlukları olanBu pankreas kafa bloğu bütün adacıkları esas pankreatik polipeptit-pozitif hücreler içeren olarak unsinat bölge veya ventral pankreas lob küçük bir kısmını içerdiğini D bölümü çizer gibi bölümler BD gözlenmiştir. Hematoksilen B ve C şiddetlerde optimal counterstain iken paneli D hematoksilen counterstain çok açık olduğunu unutmayın. EH paneller β-hücreleri ve α-hücrelerinin beklenen dağılımına sahip dorsal lob bir adacık göstermektedir. Birkaç pankreatik polipeptid hücreleri adacık (H) sol alt kısmı bulunmaktadır. A, E-H izleme ve değerlendirme; B, F-Ki67 + İnsülin, C, G-CD3 + Glukagon D, H-Pankreatik polipeptid. AD, 0.2x, EH-12.8x.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Zamanla slaytlar sayıda genelinde bilgisayar tabanlı algoritmaları kullanarak özellikle IHC prosedürlerin standartlaştırılması, görüntü analizi için önemlidir. Bu raporda açıklanan İHK boyama işlemi 8 saatlik bir iş günü içinde bir Autostainer kullanarak belirli bir donörün numunelerin toplu analizi sağlayacak ve bir önceki raporda 5 değiştirilir. Her lekeli slayt Sayısallaştırılmış Tüm slayt görüntüleri web tabanlı online patoloji sistemi üzerinden nPOD-bağlı müfettişler gelir elde edilmektedir. Müfettişler slaytlar ile birlikte donör demografik, laboratuvar verileri ve ilgili diğer klinik öykü inceleme ve (bkz. çalışmalarıyla blokları en uygun olanı tercih edebiliyoruz http://www.jdrfnpod.org/online-pathology.php Daha fazla bilgi için) . Böyle bir online patoloji sistemi bir "sanal biobank" olarak hizmet vermektedir. Bu sistemde bir daha da geliştirilmesi uygulanacaktır whereby slayt etiketler pankreas 3-D yeniden bir nihai amacı ile her blok için seri bölümleri ve düzeyleri izlemek için bir barkod dahil.

Iki çift boyama işlemleri, öncelikle tip 1 diyabet 5,6 erişkin β-hücre yenilenmesini sağlayan mekanizmaların anlaşılmasının önemini verilen hücresel replikasyon (Ki-67) ile uyum içinde adacık β-hücre kompozisyon (insülin) belirlemek için seçilmiştir. Ikinci bir çift IHC assay birinci seri bölüm üzerinde gerçekleştirilir gibi, her bir adacık β-hücresi (insülin) ve α-hücre bileşimi (glukagon) her ikisi için karakterize edilir. Buna ek olarak, T-hücresinin (CD3) varlığında iki ana nedenlerden ötürü α-hücre boyama ile bağlantılı olarak belirlenir. Tip 1 diabetes ilerlemesinde T-hücre aracılı otoimmün olarak açık bir şekilde resul ile infiltrasyonu henüz başlatıcı maddeleri doğası (viral, bakteriyel, inflamatuar hücre) ya da kronik bir bileşimi takdir edilmiştirtant β-hücre disfonksiyonu ve ölümü (7,8 gözden) henüz tanımlanır vardır. Β-hücre kaybı 9 şiddetli olduğunda bile CD3 ve glukagon lekeleri bu kombinasyon adacık tespitini sağlar böylece İkinci olarak, tip 1 diyabeti olan bağışçıların β-hücrelerinin iyi karakterize eksikliği var.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Çıkar çatışması ilan etti.

Acknowledgments

Yazarlar, donörlerin aileleri ve uzman yardımı için bu araştırma ve Emily Montgomery, Robert Pietras, Ann Fu, Mitali Agarwal ve Roshan Agarwal yer Organ İhale Organizasyonlar teşekkür ederim. Bu çalışma Diyabet ile Pankreas Organ Bağış için Ağ destek Juvenil Diyabet Araştırma Vakfı (MC-T.) tarafından finanse edildi.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
30% Hydrogen Peroxide (H2O2) Fisher Scientific H325-500 Endogenous peroxidase blocking
ABC-Alkaline Phosphatase (AP) Vector Laboratories AK-5000 AP conjugate
Antibody Diluent Invitrogen 003218 Primary antibody
Avidin blocker Vector Laboratories SP-2001 Block endogenous biotin
Biotinylated Goat anti-guinea pig Vector Laboratories BA-7000 Secondary antibody
Bluing Reagent Fisher Scientific 7301 Leica autostainer
Citrate buffer, pH 6.0 BioGenex HK086-9K Antigen retrieval
Clarifier 1 Fisher Scientific 7401 Leica autostainer
Cytoseal XYL Fisher Scientific 8312-4 Coverslip mountant
DAB Vector Laboratories SK-4100 HRP chromogen
DEEB Dako S2003 Endogenous AP blocking reagent
Eosin Y Alcoholic Fisher Scientific 71204 Leica autostainer
Ethanols- 100%, 95%, 90%, 70% Fisher Scientific Various Deparaffinization and coverslipping
Hematoxylin Dako S3301 Dako autostainer
Hematoxylin 7211 Fisher Scientific 7211 Leica autostainer
IgG (all host species for primary antibodies) Various Various Negative controls for primaries
Liquid Permanent Red (LPR) Dako K0640 AP chromogen
Mach2 AP Biocare Medical MALP521L Goat anti-Mouse AP conjugate
Mach2 HRP Biocare Medical MHRP520L Goat anti-Mouse HRP conjugate
Mach2 HRP Biocare Medical RHRP520L Goat anti-Mouse HRP conjugate
Methanol Fisher Scientific Various H2O2 diluent
Normal goat serum Vector Laboratories S-1000 IHC blocking reagent
Sniper Biocare Medical BS966M IHC blocking reagent
TBST 20X Thermo Fisher Scientific, Inc. TA-999-TT IHC buffer
Triology 20x Cell Marque 920P-06 Antigen Retrieval
Xylene Fisher Scientific Various Deparaffinization and coverslipping
Table 1. Specific reagents.
Name Company Catalog Number Comments
Paraffin
Amylase Santa Cruz Biotechnology, Inc. SC-46657 Mouse
Amylin Serotec MCA11267 Mouse
Carbonic anhydrase 19.9 Abcam ab15146 Mouse
Caspase-3, cleaved Cell Signaling Technology 9961 Rabbit
CD20 Dako M0755 Mouse
CD3 Dako A0452 Rabbit
CD34 Cell Signaling Technology 3569 Mouse
CD4 Dako M7310 Mouse
CD45 Dako M0754 Mouse
CD68 Dako M0876 Mouse
CD8 Dako M7103 Mouse
Chromogranin A Dako A0430 Rabbit
CK17 Dako M7046 Mouse
CK19 Dako M0772 Mouse
CK7 Dako M7018 Mouse
C-peptide Cell Signaling Technology 4593 Rabbit
Foxp3 e Bioscience 14-4776-80 Rat
Ghrelin Santa Cruz Biotechnology, Inc. SC-10386 Goat
Ghrelin Abcam ab85104 Rabbit
Glucagon Dako A0565 Rabbit
Glucagon Abcam ab10988 Mouse
Glucagon Bachem T-5037 Guinea Pig
Glut-1 Abcam ab40084 Mouse
Glut-2 Santa Cruz Biotechnology, Inc. SC-9117 Rabbit
Insulin Dako A0564 Guinea Pig
Ki-67 Dako M7240 Mouse
Mafa Novus Biological NB400-137A Rabbit
Pancreatic polypeptide Invitrogen 18-0043 Rabbit
Pdx-1 Abcam ab47308 Guinea Pig
Proinsulin Novocastra NCL-proin-1G4 Mouse
Proinsulin Developmental Studies Hybridoma Bank GS-9A8 Mouse
Secretagogin Sigma-Aldrich HPA 006641 Rabbit
Smooth muscle actin Abcam ab5694 Rabbit
Somatostatin Dako A0566 Rabbit
Synaptophysin Dako M0776 Mouse
Fresh Frozen
CD11b Abcam ab6332 Rat
CD11c Serotec AHP1226 Rabbit
CD25 Novus Biological NB 600-564 Mouse
CD94 Abcam ab61874 Mouse
GAD65 Santa Cruz Biotechnology, Inc. SC-130569 Mouse
HLA-ABC Dako M0736 Mouse
Table 2. Primary antibodies.
Name Company Catalog Number Comments
Aperio Scanscope CS Aperio Technologies Digital slide scanner
DAKO Autostainer Plus Dako IHC stains
Label Matrix printing software BioCarta LM7UP57 Slide label software
Leica XL Autostainer Leica Microsystems H&E stains
Premium Coverglass Fisher Scientific 12-548-5J Coverslip
Spectrum Information Manager Aperio Technologies Scanner software
Superfrost Plus slides Fisher Scientific 12-550-15 Positively charged slides
Vegetable steamer Black and Decker Various Antigen retrieval
Zebra TLP 3742 CDWG TLP3742 Slide label printer
Table 3. Specific supplies and equipment.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. In't Veld, P., Marichal, M. Microscopic anatomy of the human islet of Langerhans. Adv. Exp. Med. Biol. 654, 1-19 (2010).
  2. Matveyenko, A. V., Butler, P. C. Relationship between beta-cell mass and diabetes onset. Diabetes Obes. Metab. 10, Suppl . 4. 23-31 (2008).
  3. Saisho, Y. Pancreas volumes in humans from birth to age one hundred taking into account sex, obesity, and presence of type-2 diabetes. Clin. Anat. 20, 933-942 (2007).
  4. Hruban, R. H. Pancreatic intraepithelial neoplasia: a new nomenclature and classification system for pancreatic duct lesions. Am. J. Surg. Pathol. 25, 579-586 (2001).
  5. Campbell-Thompson, M. Pancreatic adenocarcinoma patients with localised chronic severe pancreatitis show an increased number of single beta cells, without alterations in fractional insulin area. Diabetologia. 52, 262-270 (2009).
  6. Meier, J. Beta-cell replication is the primary mechanism subserving the postnatal expansion of beta-cell mass in humans. Diabetes. 57, 1584-1594 (2008).
  7. Rowe, P. A., Campbell-Thompson, M. L., Schatz, D. A., Atkinson, M. A. The pancreas in human type 1 diabetes. Semin. Immunopathol. 33, 29-43 (2011).
  8. Veld, I. n't, P, Insulitis in human type 1 diabetes: The quest for an elusive lesion. Islets. 3, 131-138 (2011).
  9. van Belle, T. L., Coppieters, K. T., von Herrath, M. G. Type 1 diabetes: etiology, immunology, and therapeutic strategies. Physiol Rev. 91, 79-118 (2011).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics