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Medicine

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Summary

죽상 경화증은 만성 염증 과정입니다. 이 원고는 신선한 경동맥 또는 관상 동맥 플라크를 조사하기 위해 생체 모델을 사용하기 쉽게 보여줍니다. 생체 모델은 다양한 방법으로 분석 할 수있는 인간의 동맥 경화 병변 결과에 염증 환경에 잠재적 인 물질을 조사 할 수 있습니다.

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Erbel, C., Okuyucu, D., Akhavanpoor, M., Zhao, L., Wangler, S., Hakimi, M., Doesch, A., Dengler, T. J., Katus, H. A., Gleissner, C. A. A Human Ex Vivo Atherosclerotic Plaque Model to Study Lesion Biology. J. Vis. Exp. (87), e50542, doi:10.3791/50542 (2014).

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Abstract

죽상 경화증은 혈관의 만성 염증성 질환이다. 죽상 동맥 경화 병변의 염증 화합물을 연구하는 다양한 방법이 있습니다. 마우스 모델은 죽종의 염증 과정을 연구하는 중요한 도구입니다 만,이 모델은 쥐와 인간의 면역 시스템 사이의 표현형과 기능의 차이에서 고통. 시험관 내 세포 실험을 구체적으로의 물질에 의한 세포 유형에 의존하는 변화를 평가하는 데 사용됩니다 또한, 그러나 문화 의존적 변형 및 동맥 경화 병변의 염증성 화합물의 컨텍스트에서 특정 분자의 영향을 분석하는 무능력 결과의 영향을 제한한다. 또한, 인간의 혈액에 대한 관심이 분자의 수준을 측정하는 추가 임상 관련성을 조사하는 데 도움이 있지만, 이것은 조직과 로컬이 아닌 염증을 나타냅니다. 따라서, 우리는 여기에 인간의 동맥 경화 병변 생물학을 연구하는 플라크 문화 모델을 설명생체. 즉, 신선한 플라크는 내막 절제술 또는 관상 동맥 우회술을받은 환자에서 얻을 수 있습니다 및 사용까지 얼음에 RPMI 매체에 저장됩니다. 표본은 같은 사이토 카인 케모카인 단독으로 또는 시간의 정의 기간 동안 조합으로 그 물질에 추가하여 RPMI 매체를 포함, 48 - 웰 플레이트에 무작위로 배포 한 다음 작은 조각으로 절단됩니다. 배양 후, 플라크 조각 충격, mRNA의 분리를 위해 얼 수있다 면역 조직 화학 염색을 위해 파라핀 또는 OCT에서 내장 또는 분쇄 및 서부 모래 바닥에 용해. 또한, 세포는 유동 세포 계측법 분석 플라크로부터 분리 될 수있다. 또, 상청액은 ELISA에 의해 단백질 측정을 위해 수집 될 수있다. 결론적으로, 제시된 생체 모델은 더 새로운 질병의 메커니즘과 치료 표적의 식별 될 수 있습니다 염증성 병변 생물학을 연구 할 수있는 가능성을 엽니 다.

Introduction

만성 염증성 질환과 같은 동맥 경화증은 선진국 1-2에서 사망의 주요 원인 중 하나입니다. 죽상 동맥 경화증, 특히 급성 관상 동맥 증후군의 합병증으로는 죽상 혈전증과 혈관 폐색 3의 원인이 취약한 병변의 파열에 연결되어있다. 선천성 및 적응성 면역은 죽종 2,4-5의 모든 단계에서 참여하는 것 같습니다. 상당한 진전이 심근 경색의 치료, 동맥 경화의 예방 효과 및 심혈관 사건에서했다하더라도 여전히 해결되지 않은 있습니다. 따라서, 병변 생물학을 공부하는 것은 죽상 경화증의 병태 생리에 대한 우리의 지식을 증가시키기위한 필수적이며, 새로운 치료 표적 및 새로운 치료법의 개발을 식별 할 수 있도록.

많은 경우에, 뮤린 모델은 특정 질병의 병태 생리를 조사하는 데 사용된다. 그러나, 마우스 모델을 사용하여 죽종을 공부하는 것은 ACCO입니다몇 가지 제한 사항에 의해 mpanied : (1) 일반적으로 동맥 경화 마우스는 높은 콜레스테롤 다이어트를받을 수 있습니다. 이러한 모델에서 콜레스테롤 수치가 상승 된 콜레스테롤의 혈중 농도 6 환자의 결과와 비교 될 수 없다. (2) 쥐와 인간의 면역 시스템 사이에 상당한 차이가 있습니다; 인간 T 세포에서 인간 Foxp3를 발현 반드시 규제 7 표현형을 부여하지 않는 반면 Foxp3를 따라서는 뮤린 규제 T 세포의 특정 마커이다. 또한, 인간에 정의 된 Th1/Th2 패러다임은 뮤린 T 세포에 완전히 양도 아니다. (3) 비교 예 F4/80 클래식 (M1)의 마커로 뮤린 단핵구 및 대 식세포를 식별하는 데 사용되는 마커의 수는 대안 (M2)의 활성화 패턴을 인간 골수 세포 8에 존재하지 않는다. (4) 쥐와 인간의 말초 혈 단핵 세포의 유전자 발현은 9 상당히 다른 것으로 밝혀졌다.

따라서, 우리의 이해를 높이기 위해인간의 죽상 동맥 경화증의 만성 염증성 과정, 우리는 인간의 조직, 혈액, 세포와 협력 모델을 사용하도록해야합니다. 여기서 우리는 인간의 염증성 병변 생물학의 개념에 잠재적 인 새로운 물질의 조사를 허용 인간의 플라크 조직 문화의 모델을 설명합니다.

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Protocol

다음과 같이 1. 미디어를 준비

  1. 배지 : RPMI 매체.
  2. 10 % 소 태아 혈청 (FCS)을 추가한다.
  3. 100 U / ㎖ 페니실린 G를 추가, 100 ㎍ / ㎖ 스트렙토 마이신.

사용할 때까지 신선한 패 실린더 2. 저장

  1. 중요한 경동맥 협착 (뇌졸중, 일시적 허혈성 발작) 또는 허혈성 증상이없는 환자의 경동맥 내막 절제술 동작은 심장 외과 의사에 의해 관상 동맥 우회술 동안 혈관 외과 및 관상 동맥 내막 절제술에 의해 수행됩니다. 경동맥 / 관상 플라크는 이전 5 바와 같이 치구 구조를 보존하기 위해 일괄하여 제거 할 필요가있다.
  2. 플라크 근절 장소 후 중간 못 튜브 시료 및 사용까지 (플라크가 완전히 매체를 포함해야합니다) 얼음에 저장합니다.

3. 패 처리

  1. 적절한 세포 배양 접시 (예 : 60mm)를 사용하여5 ML RPMI 매체를 추가 할 수 있습니다.
  2. 배양 접시 (플라크가 완전히 매체를 포함한다)에 플라크 조직을 놓습니다.
  3. 멸균 집게를 사용하여 조직의 가장자리에서주의 깊게 패 조직을 누릅니다.
  4. 멸균 메스를 사용하여 샘​​플 플라크의 모서리를 잘라.
  5. 반으로 플라크 조직을 나눈다.
  6. (석회화, 지질이 풍부한, 파열, 혈전, 섬유증) 거시적으로 병변의 형태를 평가합니다.
  7. 면역 조직 화학 염색에 의한 생체 실험 후 정확한 플라크 형태를 분석합니다. AHA 분류 (10)를 사용합니다.
  8. 심한 석회화 나 섬유화 패를 버린다.
  9. 동종 작은 조각 (3 × 3 × 3 ㎜)로 플라크 조직을 잘라.
  10. 두 플라크 조각을 동결 충격과 병변의 기본 값을 액체 질소에 보관 사용할 때까지.
  11. 48 - 웰 플레이트를 준비합니다.
  12. 물론 실험에 사용 된 각각의 500 μL RPMI 매체를 추가합니다.
  13. 사용하십시오각 그룹에 대해 t 개 이상의 플라크 조각.
  14. 이자 (예를 들어, 특정 사이토 카인과 케모카인)의 내용을 추가합니다.
  15. 컨트롤로 비자극 플라크 조각을 사용합니다.
  16. 무작위로 우물에 플라크 조각의 배정 수를 심고 있습니다.
  17. 지정된 시점에 대한 문화 플라크 조각.
  18. 리포 폴리 사카 라이드 (LPS)와 플라크 조직 자극 실험
    1. 3 시간, 8 시간 및 24 시간 : 다음 시간 포인트를 사용합니다.
    2. 각각 각 시점의 비자극 그룹에 대한 2 패 LPS에 대한 조각과 두를 사용합니다.
    3. 리포 폴리 사카 라이드의 1 ㎍ / ㎖의 추가.
  19. 배양하는 동안, 5 % CO 2를 포함하는 가습 공기에 37 ° C에서 48 - 웰 플레이트를 유지한다.

4. 후 지정된 시간 수확 플라크 조직 조각

  1. 자세한 프로토 정보를 참조하십시오 (mRNA의 분리 및 cDNA 합성을위한 플라크 조각을 동결 충격코르 5 장).
  2. 상층 액을 수집하고 ELISA 분석을 위해 -20 ° C에서 그것을 저장.
  3. 웨스턴 블로 팅의 경우, 버리고, 플라크 조직을 용해. 0.65 μm의 0.1 μm의 원심 필터 장치를 통해 해물을 필터링합니다.
  4. 면역 조직 화학 염색에 대한 조직 절반 또는 파라핀에 플라크 조직을 포함합니다.

배양 플라크 조각에서 5. RNA 추출

  1. 균질화 TissueLyser를 사용합니다.
  2. 제조업체의 지시에 따라 키트 (재질 테이블 참조)를 사용하여 RNA를 분리.
  3. 분광 광도계 샘플의 RNA의 양과 질을 결정합니다.
  4. 제조업체의 지침에 따라 역전사의 베링거 인 겔의 cDNA 키트를 사용합니다.
  5. 정량 PCR의 경우, 예를 들어 SYBR 녹색과 로슈 실시간 PCR 키트를 사용합니다.

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Representative Results

여기서 우리는 생체 플라크 배양 결과를 보여 수치의 숫자를 제시한다. 생체 모델 실험에 대한 관심의 에이전트에 대한 응답으로 염증 환경의 변화를 평가하기 위해, 우리는 죽종에 주로 관여 것으로 알려진 다른 분자를 측정합니다. 대표적인 프로 동맥 경화 사이토 카인으로 우리는 TNFa에, IL6 및 IFNG 2,11를 선택합니다. 또한, 우리는 프로 혈전 변화를 평가하기 위해 폰 빌레 브란트 인자와 조직 인자를 사용합니다. 또한, 그 대리인에 의해 유도 된 플라크 불안정, 매트릭스 metallopeptidase 9 (MMP9) 수준 분석됩니다의 발전을 해결하기 위해. Chemoattractance 따라서, 우리는 또한 단핵구 / 대 식세포 단핵구 화학 주성 단백질 -1 (MCP-1), 화학 유인 원리로 지칭 CCL2의 수준을 조사, 또한 치구의 진행 및 회귀 (11)에서 중요한 단계이다. 셀 매력 셀 롤링 접착은 다음과 같은 단계가되면.그 때문에 우리는 ICAM-1을 선택합니다. 또한 그 물질의 영향을 신호 전달 경로를 분석함으로써 우리는 세포 외 신호 조절 키나아제 (ERK1 / 2), 넓게 표현과 같은 사이토 카인, 세포 사멸, 분화, 바이러스 감염 및 heterotrimeric G 단백질에 대한 리간드와 같은 다양한 자극에 의​​해 활성화 사용 수용체 (12)를 결합.

첫째, 우리는 양적 실시간 중합 효소 연쇄 반응 (QRT-PCR) (그림 1)에 의해 분석 비자극 배양 동맥 경화 병변의 염증 화합물의 시간에 따라 변화를 보여줍니다. 플라크 배양 중에 염증성 병변 환경의 활성의 증가가 관찰 될 수있다. 차이가없는 문화 (데이터가 표시되지 않음) 대 3 시간 후 발견되지 않았다. 플라크 문화의 8 시간 후, 우리는 24 시간 후, 상향 조절이 있었다 반면, 그러나 TNF A와 IFN (G)의 같은 IL6 등 일부 분자 만 약간의 상향 조절을 발견같은 TNF의, IL6IFN 들어 다양한 분자. 특히, 이상 플라크 배양 시간은 높은 분자 발현의 변화가있다.

둘째, 동맥 경화 병변의 염증 환경 영향의 가능성을 설명하기 위해, 우리는 QRT-PCR로 측정 3 시간 동안 1 ㎍ / ㎖의 LPS (그림 2)와 함께 배양 플라크 조각의 결과를 제시한다. 비자극 플라크 조각은 음성 대조군으로 봉사 . 우리는 LPS가 동맥 경화 병변 내부의 염증성 화합물의 활성화의 등급의 현저한 증가를 유도하는 것으로 나타났습니다. 각종 사이토 카인 (IL6, TNF 등,도 2A-B), 케모카인 (CCL2 등, 도시하지 않음), 접착 (ICAM1, 미도시), 플라크 불안정화 (매트릭스 MMP9 (9 metallopeptidase), 미도시) 및 프로 혈전 분자 (폰 빌레 브란트 인자, 그림 2C,

셋째, 단백질 풍부을 평가하기 위해, 배양 된 병변의 상층 액은 ELISA 분석과 서쪽 (그림 3D)를 내듯 플라크 조직을 분쇄했다. 그림 3A-C에서, 우리는 IFN-g의 ELISA 분석, LPS 또는 8 시간 동안 제어와 함께 배양 배양 표본의 상층 액에서 MCP-1과 TNF-을 보여줍니다. 또한, (인산화) ERK 1 / 분쇄 및 파쇄 플라크 조직의 2, 하나 LPS 또는 제어로 자극에 대한 웨스턴 블롯 분석은 그림 3D로 보여줍니다.

그림 1
그림 1. 시간에 염증성 병변 화합물에 플라크 배양의 효과. 동맥 경화성 플라크 조각은 즉시 충격 된 8 동결 또는 배양또는 사이토 카인 IL6 나타낸 (A), IFN g의 (B)와 TNF (C)의 24 시간 및 발현 QRT-PCR에 의해 분석 하였다. 도시 된 결과는 오 독립적 인 실험의 평균을 나타낸다. 각 그룹에 다섯 죽상 경화성 병변 매 표시된 시점에 사용 하였다. 값은 B-액틴에 정규화 및 cDNA를 복사 / 1,000 B-액틴 복사로 표시됩니다. 결과 상자의 평균을 표시하는 플롯과 25 및 상자 10 번째와 수염으로 90 번째 백분위 수로 75 번째 백분위 수로 표시됩니다. * : p <0.01.

그림 2
각종 염증 분자의 증가를 유도 배양 플라크 조각의 그림 2. LPS의 자극. 플라크 조각은 1 ㎍ / ㎖의 LPS와 함께 배양 하였다3 시간 동안 비자극 및 QRT-PCR에 의해 분석 하였다. 도시 된 결과는 오 독립적 인 실험의 평균을 나타낸다. 각 그룹에 대해 두 가지를 사용 하였다. 값은 B-액틴에 정규화 및 cDNA를 복사 / 1,000 B-액틴 복사로 표시됩니다. 결과 상자의 평균을 표시하는 플롯과 25 및 상자 10 번째와 수염으로 90 번째 백분위 수로 75 번째 백분위 수로 표시됩니다. * : p <0.01.

그림 3
배양 치구 상등액에서도 3. 단백질 발현. 사이토킨의 주제 ELISA 측정 IFN-g (A), TNF-(B) 및 (8)에 대한 LPS 또는 비자극 대우 상패 매의 상등액에서 MCP-1 (C) 시간이 표시됩니다. 도시 된 결과는 오 독립적 실험적의 평균을 나타낸다TS. 결과 상자의 평균을 표시하는 플롯과 25 및 상자 10 번째와 수염으로 90 번째 백분위 수로 75 번째 백분위 수로 표시됩니다. 또한, LPS의 (인산화) ERK 1 / 2에 대한 대표 웨스턴 블로 팅은 자극 또는 3 시간이 그림 3D로 시연 한 후 배양 동맥 경화 병변을 제어 할 수 있습니다. 휘스커로서 평균 + SEM 표시 컬럼 막대 그래프는 오 독립적 인 실험의 평균을 나타낸다. * : p <0.01.

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Discussion

여기에 우리가 동맥 경화 병변의 생물학에 잠재적으로 관련 물질의 영향을 조사하기 위해 생체 플라크 문화 모델을 제시한다. 이러한 생체 외 방법의 주요 이점은 염증 세포 및 그 세포의 상호 작용뿐만 아니라 염증성 경로와 인간의 죽상 경화 병변 내의 캐스케이드에 명시된 물질의 영향을 평가하는 기능이다. 여러 가지 가능한 방법 (예를 들어, RT-PCR, 웨스턴 블롯, 면역 조직 화학 염색은, 유동 세포 계측법, ELISA) 동맥 경화 병변의 염증에 관심 물질의 영향에 대한 포괄적 인 분석을 제공하는 데 도움이됩니다.

쥐의 동맥 경화증의 염증 과정은 잘 과발현 관심 (11)의 특정 유전자 또는 부족 마우스 모델에 대한 감사도, 이해된다. 그러나, 결과는 항상 밀접하게 인간 6-9,13에 해당하지 않습니다. 동맥 경화 마우스는 일반적으로 병적 높은 CHOL을받을다이어트 6 esterol. 또, 인간과 생쥐 사이의 면역 시스템은 상당한 차이 7-9을 발휘하는 것이 알려져있다. 여기, 우리는 Niessner 등. (14)와 같이 인간의 동맥 경화 병변의 염증 화합물에 관심 물질의 영향을 연구 할 수 있습니다 생체 플라크 문화 모델을 제시한다. 또, 다양한 부가 방법 뮤린 연구에 필적 플라크 배양 실험의 결과를 분석하는 데 사용될 수있다. 따라서, 생체 외 모델은 일부 경우에 생체 내 연구에서 쥐를 대체 할 수있는 가능성을 열어 인간 생물학 뮤린 시스템 및 역 분자를 촉진 추정 죽상 간의 우수한 가교 방법을 나타낼 수있다.

죽상 동맥 경화증에 대한 인간의 생체 모델은 체외 세포 실험과 비교할 수 없습니다. 세포주는 쉽게 저장되고 배양되어 있지만 수 표현형 및 푸일차 전지에 nctionally 동일하지. 신선한 세포는 혈액 정규 그리는함으로써 얻어 질 수 있지만, 때때로 그것들 배양 매우 어렵고 많은 요인 배양을 실시한다. 또, 시험 관내 세포 배양 실험에 이용함으로써, 동맥 경화 병변의 염증성 화합물의 특정 분자의 영향을 조사하는 것은 불가능하다. 따라서, 생체 외 실험은 인간의 생물학 연구의 초기 (번역) 단계에 대한 중요하지만, 더 인간의 죽상 동맥 경화증, 동맥 경화 병변 내 염증 폭포와 통로에 특히 세포의 상호 작용과 영향의 개념에 대한 관심의 분자의 역할을 분석하는 데 실패 .

모나코 등 알. 인간의 동맥 경화 조직 (15)에서 분리 된 세포의 중요한 단기 문화 시스템을 구축. 그들은 콜라게나 제, 엘라와 DNA 분해 효소의 효소 혼합물을 사용했다. 이 방법은 수 lesi 조사경로 분석 및 아데노 바이러스 벡터를 유전자 전달 연구를 시그널링 ONAL 세포 - 세포 실험. 하지만, 효소 혼합물이 세포에 미치는 영향의 활성화 다님 알려지지 않았다 또 등 표면 마커의 발현은 이들 실험의 결과는 죽상 경화증 병변을 내부 실제 프로세스를 반영하는지 여부를 질문 할 수있다. 또한, 세포의 원래 위치는 효소 혼합물에 의해 파괴되고 단기간 배양 시스템은 생체 외 세포 실험과 같은 한계를 갖는다.

죽상 경화성 병변의 내부 특정 세포 또는 세포 집단 연구를 위해, 레이저 캡처 마이크로 박리 방법을 사용하는 것이 가능하다. 그 셀 또는 셀 화합물은 적외선 또는 자외선 레이저와 RNA, DNA 또는 단백질 분석을 수행 할 수를 사용하여 조직의 잘라됩니다. 레이저 캡처 마이크로 해부, 세포 표면 수용체 간편 체크인에게 세포를 손상하지 않는 것(투약) 소지 등의 방법의 장점은 죽상 경화성 병변의 내부 셀 또는 그 위치의 분석이다. 그러나 상기와 같은 시험 관내 연구와 같은 세포를 평가하는 것은 불가능하다.

생체 외 모델 결과를 측정하고 분석 할 수 방법의 광범위한 연루. 실시간 중합 효소 연쇄 반응은 Niessner 외. (14)에 의해 도시 된 바와 같이 유전자 발현 수준을 조사하기 위하여 RNA의 분리 및 cDNA를 합성 한 후에 수행 될 수있다. 면역 조직 화학은 죽상 경화성 병변의 내부 단백질 발현 및 세포 기원을 증명하기 위해 단백질 수준을 평가하기 위해 설립 된 공구이다. 웨스턴 블롯은 신호 전달 경로를 분석하는데 사용될 수있다. 또, 효소 용액에 의한 소화 세포 격리 더욱 인스턴스 세포 유형, 세포 아형 및 활성화의 등급에 대해 분석하는 유동 세포 계측법 분석을 수행 할 수있는 기회를 연다. 또한, 이후 세포 격리spectratyping는 또한 T 세포 수용체 변동을 분석하기 좋은 방법을 나타낸다. 또한, 소화 자기 세포 분리 후 더 체외 연구 또는 마이크로 어레이 분석을 위해 특정 세포 아형의 세포 분리의 입증 된 고품질의 방법입니다. 마지막에, 상층 액은 ELISA에 의해 단백질 측정을 위해 수집 할 수 있습니다. 결론적으로, 생체 모델은 인간의 동맥 경화 병변의 염증 환경에 정확한 변화를 조사하는 유용한 도구입니다.

생체 모델은 내막 절제술 샘플을 기반으로합니다. 다른 사람에서 얻은 동맥 경화성 플라크를 사용하여 차등 세포 성분의 더 큰 정도와 그 유전자 / 단백질의 수준에 따라서 더 높은 변화가 발생할 수 있습니다. 염증 반응이 fibrosclerotic lesio에 현저하게 낮기 때문에 따라서, 오히려 fibrosclerotic 병변 (10)보다 지질 부유하거나 복잡한 패 샘플을 사용하는 것이 중요합니다NS. 따라서, 플라크 배양 실험의 결과를 분석하기 전에 플라크 형태학을 평가하는 중대한 관심사이다.

또한, 각각의 표본 샘플은 지방산 줄무늬 및 파열 패에 괴사 코어의 개발을 향한 초기 내피 기능 장애 및 지질 축적 단계의 동맥 경화 병변의 개발 / 진행,,의 여러 단계가 포함되어 있습니다. 따라서, 플라크 조직의 이질성을 최소화하기 위해, 일반적 죽종 형성의 초기 단계를 나타내는 에지를 절단 할 필요가있다.

그것은 절삭 조직 손상 반응을 유도하는 것을 배제 할 수 없다. 그러나 우리의 플라크 조직 배양 실험은 비 배양 플라크 조직에 배양 된 플라크 조직의 비교 유전자 발현 수준을 보여 주었다. 따라서,이 방법은 현재는 죽상 경화 병변에서 염증 환경을 조사하기 좋은 도구임을 강조한다.

의 문화플라크 조각은 최대 1 일의 기간에 한정된다. 플라크 조직은 일 이상 배양 할 경우, 대폭 증가 결과의 편차. 또한, 3 일 후에 플라크의 구성과 형태가 축소합니다.

이 모델을 적용 할 때 염두에 보관해야하는 제한이 있습니다. 생체 모델은 동맥 경화 병변의 염증 환경을 연구 할 수있는 좋은 방법입니다. 그럼에도 불구하고, 주요 구성 요소는이 상황에서 누락되었습니다. 더 혈역학 적 기능은 적용되지 않으며 조직의 영향은 완전히 사라진다. 또한,이 방법으로는 단기간의 변화를 조사하기 만 가능하지만, 때문에 플라크 형태의 붕괴의 장기적인 분석이 부족하다.

결론적으로, 우리는 여기에 인간의 동맥 경화 병변의 염증에 대한 잠재적 인 새로운 분자의 수사에 관심이있는 연구자들에게 도움이 될 것입니다 방법을 제시한다. 생체 플라크 Culture 모델은 뮤린 및 인간의 면역 체계의 차이로 고통 않지만 우리에게 죽상 경화성 병변의 맥락에서 세포의 상호 작용을 분석하여 로컬 병변 염증성 캐스케이드 및 경로를 조사 할 기회를 제공 할 수있는 능력을 준다. 여기에 설명 된 생체 플라크 배양 방법은 사용하기 쉽고 재현성 및 새로운 질병의 메커니즘과 치료 표적을 식별하고 확인하는 데 도움이 될 수 있습니다.

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Disclosures

저자는 공개 할 충돌이 없습니다.

Acknowledgements

우리는 우수한 기술 지원을 나딘 Wambsganss 감사합니다. 이 작품은 독일 연구 재단 (DFG) ER의 682/2-1와 C. Erbel에 심장의 독일 사회에서 연구 장학금뿐만 아니라 L. 조 독일어 학회 하이델베르크에서 연구 장학금에 의해 지원되었다.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
RPMI medium Gibco 21875-091
FCS Gibco 10270-106
Penicillin-streptomycin Sigma P-4458
15 ml Tube Sarstedt 62,554,502
Culture dish (60 mm) Orange Scientific 5550200
LPS Sigma L4516
Cell culture plates 48-well Greiner 677102
Scalpel - single use Feather FEA200130011
TissueLyser Precellys 24 Dual Cat. No. EQ03119.200.RD010.0
RNeasy (Mini) Kit  Qiagen Cat. No. 74104
Boehringer cDNA kit  Roche Diagnostics Cat. No. 11483188001
Nanodrop spectrophotometer  Thermo Fisher Scientific

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References

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