लघु पेप्टाइड्स के आत्म विधानसभा के हिसाब से Biomolecular संरचनाओं के गठन

1Institute of Chemistry and The Center for Nanoscience and Nanotechnology, The Hebrew University of Jerusalem
Published 11/21/2013
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Chemistry

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Summary

इस पत्र में स्वयं विधानसभा की सहज प्रक्रिया से अत्यधिक आदेश दिया पेप्टाइड आधारित संरचनाओं के गठन का वर्णन करता है. विधि व्यावसायिक रूप से उपलब्ध पेप्टाइड्स और आम प्रयोगशाला उपकरण का इस्तेमाल करता. इस तकनीक पेप्टाइड्स की एक विशाल विविधता के लिए लागू किया जा सकता है और नई पेप्टाइड आधारित विधानसभाओं की खोज करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं.

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Yuran, S., Reches, M. Formation of Ordered Biomolecular Structures by the Self-assembly of Short Peptides. J. Vis. Exp. (81), e50946, doi:10.3791/50946 (2013).

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Abstract

प्रकृति में, जटिल कार्यात्मक संरचनाओं हल्के शर्तों के तहत biomolecules के आत्म विधानसभा द्वारा गठित कर रहे हैं. विधानसभा स्वयं को नियंत्रित करने वाली ताकतों को समझना और इन विट्रो में इस प्रक्रिया की नकल उतार सामग्री विज्ञान और नैनो के क्षेत्रों में प्रमुख अग्रिमों के बारे में लाना होगा. वे पर्याप्त विविधता उपहार के रूप में उपलब्ध जैविक इमारत ब्लॉकों के अलावा, पेप्टाइड्स बड़े पैमाने में उनके संश्लेषण सीधा है, कई फायदे हैं, और वे आसानी से जैविक और रासायनिक संस्थाओं 1,2 के साथ संशोधित किया जा सकता है. ऐसे चक्रीय पेप्टाइड्स, amphiphile पेप्टाइड्स और पेप्टाइड conjugates समाधान में आदेश दिया संरचनाओं में स्वयं को इकट्ठा के रूप में डिजाइन पेप्टाइड्स के कई वर्गों. Homoaromatic dipeptides, ऐसे नैनोट्यूब, क्षेत्रों और तंतुओं 3-8 के रूप में आदेश दिया संरचनाओं फार्म के लिए आवश्यक सभी आणविक जानकारी होती है कि कम आत्म इकट्ठे पेप्टाइड्स के एक वर्ग के हैं. इन पेप्टाइड्स के एक बड़े विभिन्न प्रकार के व्यावसायिक रूप से उपलब्ध है.

9 यहाँ प्रस्तुत प्रोटोकॉल संभवतः कर सकते हैं पेप्टाइड्स या जैविक इमारत ब्लॉकों के अन्य वर्गों के लिए अनुकूलित किया जा सकता है नई पेप्टाइड आधारित संरचनाओं की खोज करने के लिए और उनके विधानसभा के बेहतर नियंत्रण के लिए नेतृत्व.

Introduction

प्रकृति रूपों biomolecular आत्म विधानसभा की प्रक्रिया से संरचनाओं का आदेश दिया और कार्यात्मक. इस सहज प्रक्रिया है कि सरकार बलों को समझने के लिए इन विट्रो में विधानसभा स्वयं नकल और फलस्वरूप सामग्री विज्ञान 10,11 के क्षेत्र में प्रमुख अग्रिमों के लिए करने की क्षमता को जन्म दे सकती है. पेप्टाइड्स, विशेष रूप से, वे बड़े संरचनात्मक विविधता, रासायनिक संश्लेषण की आसानी उपस्थित के बाद से, एक biomolecular बिल्डिंग ब्लॉक के रूप में महान वादा पकड़, और आसानी से जैविक और रासायनिक संस्थाओं के साथ क्रियाशील किया जा सकता है. पेप्टाइड स्वयं विधानसभा के क्षेत्र Ghadiri और डी और एल अमीनो एसिड 12 के साथ बारी चक्रीय पेप्टाइड्स द्वारा पेप्टाइड नैनोट्यूब के विधानसभा स्वयं का प्रदर्शन किया जो उनके सहयोगियों ने बीड़ा उठाया है. पेप्टाइड विधानसभाओं के डिजाइन करने के लिए अन्य सफल दृष्टिकोण रैखिक bolaamphiphile पेप्टाइड्स 5, amphiphiles (एपी) 6, nonconjugated स्वयं पूरक आयनिक पेप्टाइड्स 13, surfactant तरह पेप्टाइड्स शामिल 15 copolypeptides.

एक और अधिक हाल दृष्टिकोण कम खुशबूदार पेप्टाइड्स के आत्म विधानसभा शामिल है, homoaromatic dipeptides करार दिया. इन पेप्टाइड्स खुशबूदार प्रकृति (जैसे Phe-पीएचई, tert-butyl dicarbonate (बीओसी)-Phe-Phe) 7,8,16-21 साथ ही दो एमिनो एसिड शामिल हैं. इन homoaromatic पेप्टाइड्स द्वारा गठित संरचनाओं ट्यूबलर संरचना, क्षेत्रों, चादर की तरह विधानसभाओं और फाइबर 6,8,15,21-32 शामिल हैं. कुछ मामलों में फाइबर एक हाइड्रोजेल 33-37 पैदावार कि एक महीन रेशा जाल उत्पन्न करते हैं. इन विधानसभाओं biosensing, दवा वितरण, आण्विक इलेक्ट्रॉनिक्स, आदि के लिए आवेदन पत्र शोषण किया गया है. 38-45

इस पत्र homoaromatic पेप्टाइड्स का सहज आत्म विधानसभा शुरू करने के क्रम में आवश्यक प्रयोगात्मक चरणों का वर्णन. इसके अलावा, यह coassembly पेप्टाइड की प्रक्रिया को प्रस्तुत करता है. इस प्रक्रिया पेप्टाइड की एक से अधिक प्रकार की आत्म विधानसभा शामिलमोनोमर.

Diphenylalanine पेप्टाइड (एनएच 2-Phe-Phe-COOH) और उसके Boc एनालॉग संरक्षित (बीओसी-Phe-Phe-OH): हमारा प्रदर्शन दो व्यावसायिक रूप से उपलब्ध पेप्टाइड्स के coassembly शामिल हैं. एक supermolecular संरचना में पेप्टाइड्स स्वयं assembles से प्रत्येक: किसी भी क्षेत्रों या तंतुओं में diphenylalanine पेप्टाइड रूपों ट्यूबलर विधानसभाओं और बीओसी-Phe-Phe-OH पेप्टाइड स्वयं assembles विलायक 7,17,46 पर निर्भर करता है. हम निश्चित अनुपात में दो पेप्टाइड्स मिश्रित और इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी, बल माइक्रोस्कोपी और फुट आईआर स्पेक्ट्रोस्कोपी द्वारा हुई विधानसभाओं की विशेषता. विधियों कुछ सौ नैनोमीटर व्यास के साथ लम्बी असेंबलियों से जुड़े हुए हैं कि कई माइक्रोन की एक व्यास (1-4 सुक्ष्ममापी) के साथ गोलाकार तत्वों (~ 300-800 एनएम) के शामिल है जो एक पेप्टाइड आधारित संरचना के गठन का प्रदर्शन . गोलाकार संरचना पर पिरोया होने लगते हैं के रूप में विधानसभाओं, उनकी आकृति विज्ञान में मनके तार सदृशलम्बी असेंबलियों. इसलिए हम इन विधानसभाओं "biomolecular हार 'करार दिया. "Biomolecular हार" एक दवा वितरण एजेंट के रूप में या इलेक्ट्रॉनिक अनुप्रयोगों के लिए एक पाड़ के रूप में, एक नई biomaterial के रूप में काम आ सकते हैं. इसके अलावा, पेप्टाइड्स के आत्म विधानसभा की ओर जाता है कि प्रक्रिया पेप्टाइड्स और biomolecules के अन्य वर्गों के साथ उपयोग किया जा सकता है. यह आत्म विधानसभा और नया आदेश दिया संरचनाओं के गठन में शामिल बलों की एक बेहतर समझ के लिए नेतृत्व कर सकते हैं.

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Protocol

1. Homoaromatic Dipeptides की आत्म विधानसभा

  1. इसके lyophilized प्रपत्र (जैसे एनएच 2-Phe-Phe ओह, BOC-Phe-Phe-COOH) में वांछित पेप्टाइड वजन और 1,1,1,3,3,3-hexafluoro में पेप्टाइड भंग करके एक शेयर समाधान तैयार -2-propanol 7,17,46 (एनएच 2-Phe-Phe-OH और बीओसी-Phe-Phe-COOH के लिए उदाहरण के लिए 100 मिलीग्राम / एमएल) उचित एकाग्रता के लिए (एचपीएफ).
  2. पेप्टाइड पूरी तरह भंग और समाधान (कुछ मिनट) स्पष्ट लगता है जब तक बेंच पर भंवर और जगह का उपयोग कर समाधान मिलाएं.
  3. उपयुक्त एकाग्रता (नैनोट्यूब के गठन के लिए ट्रिपल आसुत जल में राष्ट्रीय राजमार्ग 2-Phe-Phe-OH (TDW) का उदाहरण 2 मिलीग्राम / एमएल, एक उपयुक्त विलायक साथ, पेप्टाइड शेयर समाधान पतला, पेप्टाइड के 2 μl जोड़कर 98 μl TDW, गोलाकार संरचना के गठन के लिए इथेनॉल में Boc-Phe-Phe-COOH की 5 मिलीग्राम / एमएल) के शेयर समाधान.
  4. 24 के लिए आरटी पर समाधान रखेंघंटा.
  5. किसी भी preaggregation से बचने के लिए, एक प्रयोग के लिए ताजा शेयर समाधान तैयार करते हैं.

2. दो Homoaromatic Dipeptides की Coassembly

  1. TDW और निरपेक्ष इथेनॉल के बराबर मात्रा में मिलाकर 50% इथेनॉल का एक समाधान तैयार करें. दो समाधान मिश्रण करने के भंवर प्रयोग करें.
  2. राष्ट्रीय राजमार्ग 2-Phe-Phe-OH पेप्टाइड और बीओसी-Phe-Phe-OH पेप्टाइड के 1 मिलीग्राम के 2 मिलीग्राम वजन. 100 मिलीग्राम / एमएल के एक एकाग्रता के लिए एचपीएफ में प्रत्येक पेप्टाइड भंग.
  3. भंवर का उपयोग कर पेप्टाइड्स स्टॉक समाधान मिक्स और पेप्टाइड्स पूरी तरह भंग है और समाधान स्पष्ट लग रहे हैं जब तक बेंच पर उन्हें जगह है.
  4. पेप्टाइड्स वांछित अनुपात में स्टॉक समाधान ब्लेंड. इस विशिष्ट प्रयोग में (क्रमशः 5:03 के अंतिम अनुपात में) Boc-Phe-Phe-OH पेप्टाइड के 6 μl के साथ राष्ट्रीय राजमार्ग 2-Phe-Phe-OH पेप्टाइड के 10 μl मिश्रण. कारण एचपीएफ विलायक के उच्च अस्थिरता के लिए, यह (यह स्टॉक समाधान की एक बड़ी राशि को तैयार करने की सिफारिश की है घास का मैदान मेंसेंट 10 μl).
  5. मिश्रित पेप्टाइड्स शेयर समाधान मिश्रण करने के भंवर प्रयोग करें.
  6. वांछित अंतिम एकाग्रता के लिए 50% इथेनॉल के साथ मिश्रित पेप्टाइड्स शेयर समाधान पतला. इस विशिष्ट प्रयोग में क्रमश: Boc-Phe-Phe-OH के लिए राष्ट्रीय राजमार्ग 2-Phe-Phe-OH और 3 मिलीग्राम / एमएल के लिए 5 मिलीग्राम / एमएल के एक अंतिम एकाग्रता प्राप्त करने के लिए, मिश्रित पेप्टाइड्स शेयर समाधान के 8 μl जोड़ने 50% इथेनॉल के समाधान के 92 μl के लिए. धीरे समाधान मिश्रण करने के लिए एक विंदुक का प्रयोग करें.
  7. 24 घंटे के लिए आरटी पर समाधान रखें.
  8. यह कारण विलायक के अत्यधिक अस्थिर प्रकृति के प्रयोगों पेप्टाइड्स की एकाग्रता में छोटे परिवर्तन के प्रति संवेदनशील हैं कि ध्यान दिया जाना चाहिए. इसलिए, ताजा स्टॉक समाधान प्रत्येक प्रयोग के लिए तैयार किया जाना चाहिए.

3. स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (SEM) का उपयोग कर स्वयं इकट्ठे संरचनाएं की विशेषता

  1. ऊष्मायन के 24 घंटे के बाद, एक गिलास कोव पर पेप्टाइड्स समाधान की एक 10 μl ड्रॉप लागूआरटी पर आर पर्ची और शुष्क.
  2. कोट 90 सेकंड के लिए एक धूम coater उपयोग कर सोने की एक पतली परत (कुछ नैनोमीटर) के साथ कांच पर नमूना.
  3. छवि SEM 10-20 केवी के संचालन का उपयोग विधानसभाओं.

4. ट्रांसमिशन इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी (मंदिर) का उपयोग कर स्वयं इकट्ठे संरचनाएं की विशेषता

  1. कार्बन के साथ कवर और एक बहुलक फिल्म समर्थन द्वारा स्थिर एक 200 जाल तांबा ग्रिड पर पेप्टाइड्स समाधान की एक 10 μl बूंद रखें.
  2. 1 मिनट के बाद फिल्टर पेपर का उपयोग अधिक तरल पदार्थ को हटा दें.
  3. TDW में 2% uranyl एसीटेट की एक समाधान तैयार करें. 0.22 माइक्रोन फिल्टर यूनिट का उपयोग कर समाधान तक.
  4. नमूना (नकारात्मक धुंधला) दाग, ग्रिड पर 10 μl uranyl एसीटेट समाधान की एक बूंद जगह है.
  5. 30 सेकंड के बाद फिल्टर पेपर का उपयोग अधिक तरल पदार्थ को हटा दें. यह नकारात्मक धुंधला छवियों के विपरीत बेहतर बनाता है, यह सभी मामलों में आवश्यक नहीं है कि ध्यान दिया जाना चाहिए.
  6. छवि वें पर नमूना120 केवी परिचालन पर मंदिर से ई ग्रिड.

5. परमाणु शक्ति माइक्रोस्कोपी (AFM) द्वारा विधानसभाओं के तीन आयामी विशेषता

  1. पैरा 3.1 में वर्णित प्रक्रिया का उपयोग कर AFM विश्लेषण के लिए एक नमूना तैयार करें.
  2. एसी मोड में काम कर रहे एक AFM साधन का उपयोग कर कांच पर नमूना विश्लेषण. 3 एन / मी की लगातार वसंत और 75 kHz के एक गुंजयमान आवृत्ति के साथ सिलिकॉन cantilevers का प्रयोग करें.
  3. वांछित संरचना को खोजने के लिए, ग्रिड के एक बड़े क्षेत्र स्कैनिंग द्वारा शुरू करो. फिर एक विशिष्ट छोटे क्षेत्र पर ध्यान केंद्रित करने और (स्कैन आकार छवि के लिए एक्स 2.5 माइक्रोन 2.5 माइक्रोन था इस पांडुलिपि में शामिल है) इसे स्कैन.

6. फुट आईआर द्वारा माध्यमिक संरचना की विशेषता

  1. एक सीएएफ 2 खिड़की को पेप्टाइड्स समाधान की एक 30 μl ड्रॉप लागू करें.
  2. समाधान आरटी पर सूखे की अनुमति दें.
  3. आईआर स्पेक्ट्रम में पानी की सोखना 1650 सेमी -1 है.इस शिखर पेप्टाइड बांड की एमाइड मैं बैंड के केंद्र में है. यह भी पेप्टाइड और प्रोटीन 47 की α पेचदार संरचनाओं के लिए एक ठेठ शिखर है. इस समस्या पर काबू पाने और पानी के संकेत से बचने के लिए, एक हाइड्रोजन से ड्यूटेरियम विनिमय किया जाना चाहिए. सूखे पेप्टाइड नमूना पर ड्यूटेरियम ऑक्साइड की एक बूंद (डी ओ 2) रखें. बूंद पूरी तरह से खिड़की पर पेप्टाइड जमा कवर करने के लिए इतना बड़ा होना चाहिए.
  4. नमूना शून्य के नीचे सूखे की अनुमति दें.
  5. दोहराएँ अधिक से अधिक हाइड्रोजन से ड्यूटेरियम विनिमय सुनिश्चित करने के लिए 6.3 और 6.4 2x दोहराएँ. अपने विश्लेषण जब तक शून्य के नीचे नमूना बचाओ.
  6. एक deuterated triglycine सल्फेट (DTGS) डिटेक्टर का उपयोग फुट आईआर स्पेक्ट्रा रिकार्ड. फुट आईआर प्रणाली नमूना के परिवेश में नमी को रोकने के क्रम में, एक शुद्ध गैस जनरेटर भी शामिल है. कम पेप्टाइड्स के नमूने लिए, यह 4 सेमी -1 के एक प्रस्ताव पर नमूना 2,000 एक्स स्कैन करने के लिए सबसे अच्छा है. संप्रेषण न्यूनतम मूल्यों इसलिए द्वारा निर्धारित किया जा सकता हैftware साधन के साथ आपूर्ति की.

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Representative Results

इस पत्र पेप्टाइड्स के आत्म विधानसभा द्वारा नैनो और सुक्ष्ममापी पैमाने पर आदेश दिया संरचनाओं के गठन के लिए एक विधि का वर्णन करता है. हम वर्तमान में इस सरल प्रक्रिया का प्रदर्शन और दो ​​साधारण खुशबूदार पेप्टाइड्स के coassembly (चित्रा 1) चिह्नित करने के लिए आदेश में. पेप्टाइड्स के एक आयाम nanometric 7 के साथ खोखले ट्यूबलर संरचना में एक जलीय घोल में स्वयं को इकट्ठा कर सकते हैं, जो राष्ट्रीय राजमार्ग 2-Phe-Phe-OH (diphenylalanine) पेप्टाइड है. अन्य पेप्टाइड अपने Boc संरक्षित एनालॉग, BOC-Phe-Phe-OH है. इस पेप्टाइड इथेनॉल 17,46 में जलीय समाधान और गोलाकार विधानसभाओं में तंतुमय संरचनाओं फार्म कर सकते हैं. हम इन पेप्टाइड्स उल्लेख दो तत्वों को जोड़ती है एक संरचना में coassemble होगा संभाला. SEM विश्लेषण का उपयोग करना, हम मिश्रित पेप्टाइड्स कुछ hundr की एक व्यास के साथ लम्बी संरचनाओं से जुड़े कई माइक्रोन की एक व्यास के साथ गोलाकार विधानसभाओं की एक वास्तुकला का गठन पता चला है किएड नैनोमीटर (चित्रा 2). कारण मनके तार करने के लिए आकृति विज्ञान में उच्च समानता के लिए, हम इन संरचनाओं "आणविक हार 'करार दिया. इन संरचनाओं के AFM विश्लेषण स्पष्ट रूप से अपने तीन आयामी व्यवस्था (चित्रा 3) का प्रदर्शन किया. इसके अलावा, विभिन्न नमूनों के विभिन्न क्षेत्रों के SEM विश्लेषण इस प्रक्रिया उच्च उपज (चित्रा 2 बी) के साथ हुई कि संकेत दिया.

फुट आईआर विश्लेषण पेप्टाइड्स विधानसभाओं के माध्यमिक संरचना के बारे में जानकारी प्रदान की. पेप्टाइड Boc-Phe-Phe-OH (5 मिलीग्राम / एमएल, 50% इथेनॉल) द्वारा गठित गोलाकार विधानसभाओं के एमाइड मैं बैंड के absorbance स्पेक्ट्रम एक α हेलिक्स रचना का संकेत 1,657 सेमी -1 पर एक भी एमाइड मैं चोटी दिखाया. राष्ट्रीय राजमार्ग 2-Phe-Phe-OH पेप्टाइड (2 मिलीग्राम / एमएल, 50% इथेनॉल) द्वारा गठित ट्यूबलर संरचना दो विशिष्ट चोटियों, 1682 सेमी में 1,613 सेमी से कम एक -1 और अन्य -1 दिखाया. इन चोटियों बुद्धि सहसंबद्ध हा β पत्र माध्यमिक संरचना. 1,653 सेमी -1 एक α हेलिक्स संरचना और एक अन्य चोटी के साथ मेल खाती है, जिस पर एक शिखर: यह दो चोटियों शामिल के रूप में दो पेप्टाइड्स के coassembly द्वारा गठित biomolecular हार, की फुट आईआर स्पेक्ट्रम, प्रत्येक व्यक्ति पेप्टाइड के लिए असाइनमेंट से मतभेद 1684 सेमी -1 एक β-मोड़ रचना (चित्रा 4) के 48 से संबंधित है, जिस पर. विभिन्न स्पेक्ट्रा के बीच अंतर biomolecular हार के लिए एक अनोखी संरचना को इंगित करता है.

चित्रा 1
चित्रा 1. पेप्टाइड्स एनएच 2-Phe-Phe-OH और बीओसी-Phe-Phe-OH. Coassembly प्रक्रिया के योजनाबद्ध चित्रण की Coassembly.

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चित्रा 2. आणविक हार के इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी विश्लेषण, एक) और बी) SEM micrographs, ग) एक मंदिर माइक्रोग्राफ.

चित्रा 3
चित्रा 3. आणविक हार के तीन आयामी AFM स्थलाकृति छवि.

चित्रा 4
चित्रा 4. अलग आत्म इकट्ठे संरचनाओं के फुट आईआर विश्लेषण. Boc-Phe-Phe-OH (लाल), ट्यूबलर संरचना एफ द्वारा गठित क्षेत्रों का नमूना से प्राप्त फुट आईआर स्पेक्ट्रमराष्ट्रीय राजमार्ग 2-Phe-Phe-OH (हरा) और (बैंगनी) इन दो पेप्टाइड्स के coassembly द्वारा गठित आणविक हार से ormed.

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Discussion

संक्षेप में, इस कागज पेप्टाइड आधारित विधानसभाओं विट्रो में गठित किया जा सकता है जिसमें आसानी दर्शाता है. प्रक्रिया व्यावसायिक रूप से उपलब्ध पेप्टाइड्स और विलायकों शामिल है, और यह टेस्ट ट्यूब के लिए एक ध्रुवीय विलायक के अलावा पर, परिवेश परिस्थितियों में सहज होता. यह कारण अन्य कार्बनिक विलायकों में पेप्टाइड्स के निम्न घुलनशीलता के लिए, पेप्टाइड्स के एक विलायक के रूप में एचपीएफ उपयोग करने के लिए महत्वपूर्ण है. इसके अलावा, के कारण एचपीएफ की उच्च अस्थिरता के लिए यह एक प्रयोग के लिए ताजा शेयर समाधान तैयार करने के लिए आवश्यक है. इसके अलावा, शेयर समाधान की मात्रा अधिक से अधिक 10 μl और ध्रुवीय विलायक (जल) में भंग पेप्टाइड का हस्तांतरण तुरंत किया जाना चाहिए होना चाहिए.

यह पेप्टाइड की solvation और विधानसभा स्वयं के लिए इस विधि आम तौर पर इन खुशबूदार पेप्टाइड्स के लिए इस्तेमाल एक संभव दृष्टिकोण है कि ध्यान दिया जाना चाहिए. अन्य दृष्टिकोण, हालांकि, संभव हो रहे हैं. इसके अलावा, शेयर solut की एकाग्रता एचपीएफ में पेप्टाइड आयन अंतिम समाधान में एचपीएफ की एकाग्रता कम करने के लिए इन प्रयोगों में अधिक है.

इस पांडुलिपि भी ऐसे AFM, मंदिर, SEM, और फुट आईआर रूप पेप्टाइड आधारित संरचनाओं, के लक्षण वर्णन के लिए प्रमुख तकनीकों में से कुछ प्रस्तुत करता है. माइक्रोस्कोपी तकनीक का उपयोग कर यह विधानसभाओं की आकृति विज्ञान के बारे में जानकारी प्राप्त करना संभव है. इन विधानसभाओं के आयामों नैनोमीटर के सैकड़ों से कई microns के लिए सीमा के बाद से, यह उनके लक्षण वर्णन के लिए मानक इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का उपयोग करने के लिए पर्याप्त है. अति उच्च संकल्प सूक्ष्मदर्शी कम से कम 100 व्यास में एनएम और जब एक प्रवाहकीय कोटिंग (जैसे सोना) के बिना इमेजिंग वांछित है कि संरचनाओं के लिए उपयोगी होगा. कुछ मामलों में, इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोप के इलेक्ट्रॉन बीम द्वारा संरचनाओं का चार्ज संरचना की जैविक प्रकृति के कारण हो सकता है. इस ऑपरेटिंग सिस्टम का वोल्टेज कम करके हल किया जा सकता है.

टी "> अतिरिक्त विश्लेषण, फुट आईआर स्पेक्ट्रोस्कोपी, विधानसभाओं के माध्यमिक संरचना के बारे में जानकारी प्रदान करता है कि एक मध्यम संकल्प विधि है. इस पांडुलिपि में, माप हालांकि यह विधानसभाओं की संरचना का अध्ययन करने के लिए संभव है, सूखी नमूने पर प्रदर्शन किया गया समाधान में एक द्रव सेल का उपयोग चरण.

साथ में ले ली, पेप्टाइड्स के आत्म विधानसभा के लिए यहाँ प्रस्तुत दृष्टिकोण पेप्टाइड्स के अन्य वर्गों के लिए अनुकूलित किया जा सकता है और इस प्रक्रिया के दौरान बलों और बातचीत का एक बेहतर समझ के लिए नेतृत्व कर सकते हैं. इसके अलावा, यह भी नए biomolecular विधानसभाओं के गठन के लिए नेतृत्व कर सकते हैं.

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Disclosures

लेखकों वे कोई प्रतिस्पर्धा वित्तीय हितों की है कि घोषित.

Acknowledgements

इस काम मैरी क्यूरी इंटरनेशनल Reintegration अनुदान से और जर्मन इसराइल फाउंडेशन द्वारा समर्थित किया गया. हम AFM विश्लेषण के लिए श्री Yair Razvag को स्वीकार करते हैं.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
NH2-Phe-Phe-OH Bachem G-2925.0001
Boc-Phe-Phe-OH Bachem A-3205.0005
1,1,1,3,3,3-hexafluoro-2-propanol Sigma-Aldrich 52512-100ML
Ethanol absolute (Dehydrated) AR sterile Bio-Lab Ltd. 52555 Blending with TDW for the preparation of 50% solution
Uranyl acetate Sigma-Aldrich 73943 For negative staining. It is possible to work without it.
glass cover slip Marienfeld Laboratory Glassware 110590
TEM grids Electron Microscopy Sciences FCF200-Cu-50 Formvar/Carbon 200 Mesh, Cu
Quantitive filter paper Whatman 1001055
Deuterium Oxide (D2O) Sigma-Aldrich 151882-100G 99.9 atom % D
CaF2 window PIKE Technologies 160-1212 25 mm x 2 mm window. For FT-IR measurments
AFM tips NanoScience Instruments CFMR Aspire probes, CFMR-25 series
Filter units Millipore SLGV033RS Millex-GV, 0.22 μm, PVDF, 33 mm, gamma sterilized
SEM FEI Quanta 200 ESEM
TEM FEI Tecnai T12 G2 Spirit
AFM JPK Instruments A JPK NanoWizard3
FT-IR Thermo Fisher Scientific Nicolet 6700 advanced gold spectrometer
FT-IR Purge Parker BALSTON FT-IR Purge Gas Generator model 75-52
OMNIC (Nicolet) software Thermo Nicolet Corporation For FT-IR spectra analysis
Vortex mixer Wisd Laboratory Equipment ViseMix VM
Weight Mettler Toledo NewClassic MS
Sputter coater Polaron SC7640 Sputter Coater

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References

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