एक समृद्ध पर्यावरण में हाउसिंग चूहे के लिए एक प्रोटोकॉल

1Department of Molecular Virology, Immunology, and Medical Genetics, and Comprehensive Cancer Center, The Ohio State University
Published 6/08/2015
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Slater, A. M., Cao, L. A Protocol for Housing Mice in an Enriched Environment. J. Vis. Exp. (100), e52874, doi:10.3791/52874 (2015).

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Abstract

Introduction

पर्यावरण संवर्धन (ईई) जानवरों 1 तनाव नहीं करता है कि एक जटिल और चुनौतीपूर्ण वातावरण के प्रभाव का पता लगाने के लिए इस्तेमाल एक प्रयोगात्मक प्रतिमान है। ईई बदले में संवेदी, संज्ञानात्मक, मोटर, और सामाजिक उत्तेजना 2 बढ़ जाती है, जो वृद्धि हुई अंतरिक्ष, शारीरिक गतिविधि, और सामाजिक संबंधों से बना एक पशु आवास तकनीक है। आवास पर्यावरण में Igloos चल रहा है, पहियों, तश्तरी पहियों, ट्यूब mazes के, और अन्य वस्तुओं की खोज और बातचीत को बढ़ावा देकर इस संवेदी संज्ञानात्मक, सामाजिक और मोटर उत्तेजना को बढ़ावा। बाड़े में परिवर्तन में वस्तुओं के लेआउट नियमित रूप से चूहों अनुकूलित करने के लिए मजबूर कर रहे हैं, जो करने के लिए एक उपन्यास पर्यावरण, पेश करने के लिए। इस रणनीति के लिए एक और अधिक प्रतिकूल, प्रतिकूल वातावरण या maladaptive संकट 3,4 करने के लिए विरोध के रूप में, eustress के रूप में जाना, लाभकारी सौम्य, और स्वस्थ अनुकूली प्रतिक्रिया, प्रेरित करता है हल्के और संक्षिप्त चुनौतियों प्रदान करता है। चूहों eustress को बढ़ावा देने और हानिकारक संकट सीमित करकेअनुकूल phenotypes की एक किस्म दिखा।

पारंपरिक रूप के रूप में तनावपूर्ण 1 के बारे में सोचा तत्वों से रहित किया जा रहा है, जबकि ई आवेदनों की एक विस्तृत श्रृंखला के साथ एक विश्वसनीय प्रयोगात्मक मॉडल है। कृन्तकों पर ईई के प्रभाव आधे से ज्यादा एक सदी के लिए अध्ययन किया गया है। जल्दी 1960 के दशक में पढ़ाई कॉर्टिकल cholinesterase के स्तर में कमी आई है और subcortical cholinesterase स्तर बढ़ा रहने की जगह, चूहों की संख्या में वृद्धि हुई है, और लकड़ी के खिलौने, mazes, और प्लेटफार्मों 5,6 की एक किस्म के साथ वातावरण में रखे थे कि चूहों में वृद्धि हुई है कि पता चला है। इसके अलावा, ईई अलग अलग उम्र और आनुवंशिक पृष्ठभूमि के चूहों में मस्तिष्क, व्यवहार, और चयापचय में कई अनुकूली परिवर्तन के साथ जुड़ा हुआ है। इसलिए, ईई चूहों पर पर्यावरण के प्रभावों का अध्ययन प्रयोगों की एक व्यापक गुंजाइश के लिए एक उपयोगी प्रतिमान है। ईई प्रभाव एक सप्ताह के जोखिम के रूप में के रूप में जल्दी से चूहों में मनाया जा सकता है, और अठारह महीने 7 के रूप में पुराने के रूप में पशुओं में देखा जा सकता है। ई यू के अक्सर हैसमारोह की वसूली, सीखने और स्मृति 2 अध्ययन करने के लिए तंत्रिका विज्ञान और neurobehavioral प्रयोगों में sed। इसके अलावा, ईई विष प्रेरित और हंटिंग्टन रोग, अल्जाइमर रोग, पार्किंसंस रोग, मिर्गी, स्ट्रोक सहित मानव मस्तिष्क संबंधी बीमारियों के ट्रांसजेनिक पशु मॉडल की एक किस्म के phenotype पर काफी प्रभाव पड़ता है, और 2 अधिक।

हालांकि, पिछले कुछ वर्षों में संवर्धन डिजाइन मुश्किल विभिन्न प्रयोगशालाओं से पढ़ाई के बीच तुलना करने के साथ विसंगति हुई है। उदाहरण के लिए, ऊपर उल्लेख मानव मस्तिष्क संबंधी बीमारियों के सापेक्ष ईई प्रभाव पर अध्ययन के प्रत्येक संवर्धन के लिए मानकों बदलती थी। हंटिंग्टन रोग पर अध्ययन हर दो दिन 8,9 बदल रहे थे कि गत्ता बक्से, सुरंगों, और शीट युक्त बड़े पिंजरों (44 x 28 x 12.5 सेमी 3), के रूप में अच्छी तरह से लकड़ी और प्लास्टिक की वस्तुओं में 4-6 चूहों रखे। अल्जाइमर और पर किए गए अध्ययन में से एक# 8217; एस 2 चल पहियों, प्लास्टिक की ट्यूब, गत्ता बक्से और बदल गया है या 10 साप्ताहिक पुन: व्यवस्थित किया गया है कि घोंसले के शिकार सामग्री युक्त एक बड़ा पिंजरे (1 एम 3) में 20 चूहों रखे। ईई के कई setups के इस तरह के पर चलाने के लिए या में छिपा वस्तुओं के रूप में इसी तरह के विषयों है, अभी तक ईई आवास, क्षेत्र में रहने वाले प्रति चूहों की संख्या, और पर्यावरण को बदलने की अवधि बहुत भिन्नता है।

ईई के असंगत डिजाइन ईई प्रभाव के कारण विफल नकल करने के लिए नेतृत्व किया है। कैंसर और चयापचय पर हमारे डेटा एक साथ सुझाव है कि महत्वपूर्ण विरोधी कैंसर और मोटापे के प्रभाव 14,15 के लिए निम्न विस्तृत ईई आवास प्रोटोकॉल नेतृत्व में प्रदान की stimulations का संयोजन। हालांकि, एक में देखा जाता है, के रूप में ईई के परिणामों को प्रभावित कर सकते हैं विभिन्न प्रयोगशालाओं द्वारा अपनाई गई ईई सेटिंग्स के अंतर चूहों 11 में प्रत्यारोपित विशिष्ट कैंसर ट्यूमर के विकास पर ईई प्रभाव को पुन: पेश करने का प्रयास विफल। अलग परिणाम fro लेकर कारणों की एक किस्म की वजह से हो सकता हैआवास उपकरण 11 सफाई के लिए इस्तेमाल डिटर्जेंट के प्रकार के ट्यूमर सेल संस्कृतियों के विभिन्न विकास दर मी। हमारे प्रयोगों में देखा परिणामों को दोहराने के क्रम में, संवर्धन और पशुपालन के एक विशेष रूप से डिजाइन की आवश्यकता है। निम्नलिखित प्रक्रिया अन्य शोधकर्ताओं सफलतापूर्वक हमारे प्रभावोत्पादक संवर्धन मॉडल को दोहराने की अनुमति देगा कि ईई आवास का विवरण है।

Protocol

नीचे वर्णित प्रक्रियाओं ओहियो स्टेट यूनिवर्सिटी के संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) द्वारा अनुमोदित किया गया है।

हाउसिंग चूहों को समृद्ध पर्यावरण 1. तैयारी पहले

  1. साफ सफाई और उपकरणों को बनाए रखने।
    1. एक पिंजरे धोने के माध्यम से बड़े संवर्धन बिन (120 सेमी x 90 सेमी x 76 सेमी) चलाएँ। एक ठेठ जानवरों की सुविधा पिंजरे धोने प्रोटोकॉल 82 डिग्री सेल्सियस तक पहुंच गया जो पिछले चक्र के साथ 5 से 6 धोने चक्र, शामिल हैं। पूरे कपड़े धोने की लगभग 40 मिनट के लिए ले जाना चाहिए। बिन हवा शुष्क।
      1. बड़े संवर्धन बिन, और किसी भी अन्य आवास उपकरणों, पिंजरे धोने के माध्यम से भेजा जा सकता है, तो स्प्रे और निर्माता के निर्देशों का पालन sporicidal disinfectants के साथ बिन के अंदर नीचे पोंछे। पिछले कीटाणुनाशक से किसी भी गंध से छुटकारा पाने के लिए एक कागज तौलिया के साथ एक नल के पानी से लथपथ कागज तौलिया या 30% इथेनॉल और शुष्क के साथ बिन से साफ कर लें।
    2. का प्रयोग करें Plasटिक ट्यूबिंग, तश्तरी प्रकार पहियों के साथ इग्लू, और ई में अन्य विभिन्न प्लास्टिक हच-तरह के खिलौने। एक पिंजरे धोने के माध्यम से इन खिलौनों को धो लें। आप एक पिंजरे धोने का पालन करें कदम 1.1.1.1 के लिए उपयोग नहीं करते हैं।
    3. ई में धातु चल पहियों का प्रयोग करें। एक पिंजरे धोने के माध्यम से पहियों को धो लें। पहियों पर रंग ताकि जानवरों पर चला जब पहिया शोर हो जाता है कि फीका करने के लिए शुरू होता है, पहिया और एक्सल से कनेक्ट करने के लिए जहां एक छोटी राशि पेट्रोलियम जेली लागू होते हैं।
    4. ई में लकड़ी के लॉग का उपयोग करें। हाथ से किसी भी बिस्तर या अन्य मलबे को हटाने के द्वारा लॉग्स साफ करें। फिर 15 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस के तापमान तक पहुँच जाता है, जो एक सूखी चक्र या कपड़ा चक्र, पर उन्हें autoclaving द्वारा लॉग्स बाँझ।
    5. एक खिला और पीने के तार के लिए पिंजरे के सामने के नीचे से बाहर एक छेद व्यास में कम से कम 5 सेमी rack.Cut धारण करने के लिए 29 सेमी x 18 सेमी x 12.5 सेमी और एक्स 19 सेमी x 14 सेमी 30.5 सेमी के आयामों के बीच पिंजरों का प्रयोग करें चूहों ईई से और बाहर जाने के लिए। पिंजरे धोने के माध्यम से इन खिला पिंजरों को साफ करें।
  2. पर्यावरण की स्थापना
    1. बड़े संवर्धन बिन में ¼ इंच मकई सिल प्रयोगशाला पशु बिस्तर डालो। बिस्तर के साथ 2-2.5 सेमी की गहराई तक बिन के पूरे फर्श सतह को कवर किया।
    2. बिन के एक कोने में दो या तीन लॉग्स रखें। कोने में रखें लॉग्स के बारे में 1,225 2 सेमी की एक क्षेत्र को पृथक करने के लिए। लॉग द्वारा तनहा क्षेत्र में, शीर्ष पर तश्तरी पहियों के साथ तीन इग्लू जगह है। पहियों स्वतंत्र रूप से स्पिन करने के लिए पर्याप्त जगह नहीं है, इसलिए है कि पहियों, बिन, लॉग, या एक दूसरे की दीवारों को छू नहीं कर रहे हैं सुनिश्चित करें।
    3. टुकड़ा एक साथ प्लास्टिक टयूबिंग इतना है कि centeral जोड़ने के टुकड़े से बाहर कई हथियार शाखा। बिन के बीच में इस ट्यूबिंग रखें।
    4. बिन के दो कोनों पर, एक खिला पिंजरे बिन के रूप में एक ही बिस्तर से भर हर जगह है, और खिला पिंजरे के सामने छेद बिन के केंद्र की ओर का सामना करना पड़ जाना चाहिए। इन खिला पिंजरों एक स्वच्छ भोजन और पानी के तार के शीर्ष परभोजन और पानी धारण करने के लिए रखा जाना चाहिए। पिंजरे पर किसी भी ढक्कन जगह नहीं है। पिंजरे के तारों में भोजन और पानी डाल दिया।
    5. एक दूसरे के लिए हालांकि अगले सभी नहीं, बिन में तीन धातु पहियों रखें। पहियों के तीन अलग अलग प्रकार के एक 11.5 सेमी पहिया, एक 20.5 सेमी पहिया, और एक 28 सेमी पहिया कर रहे हैं। तब संवर्धन बिन भर में 4-5 अधिक प्लास्टिक हच-तरह के खिलौने या सुरंगों जगह है।
    6. माइक्रो अलगाने फिल्टर पेपर के साथ बिन कवर। बिन करने के लिए फिल्टर पेपर क्लिप को बांधने की मशीन क्लिप का प्रयोग करें।
    7. नवीनता ईई के लिए महत्वपूर्ण है। जानवरों के लिए एक उपन्यास माहौल बनाने के लिए ईई के ढांचे के रूप में इस स्थापना का प्रयोग करें और aforementioned पिंजरों, वस्तुओं, और खिलौने की नियुक्ति बदलती हैं।

2. हाउसिंग पशु

  1. ईई नियमित प्रयोगशाला आवास में नहीं है और प्रयोगों के लिए जानवरों नस्ल। वैकल्पिक रूप से, प्रातः पर ई में उम्र के रूप में जल्दी के रूप में 21 दिनों जानवरों जगह है। पूर्व ईई आवास के लिए जीनोटाइप और कान पंच / टैग जानवरों।
  2. रखनेजानवरों के संवर्धन बिन करने के लिए मानक पिंजरे से स्वतंत्र रूप से स्थानांतरित कर सकते हैं इतना है कि एक मानक पिंजरे से संवर्धन बिन में पशुओं, उसकी तरफ से बिन में पिंजरे जगह है। घोंसले के शिकार सामग्री संवर्धन बिन में स्थानांतरित होने की अनुमति न दें।
  3. हाउस ई में एक ही उम्र, लिंग, और आनुवंशिक तनाव के 10-20 जानवरों।

3. पर्यावरण को बनाए रखने और अध्ययन के दौरान चूहों अवलोकन

  1. दैनिक
    1. चुपचाप बीमारी या संकट के संकेत के लिए जानवरों का पालन। यदि आवश्यक हो, धीरे आगे स्वास्थ्य की स्थिति का निरीक्षण करने के लिए पशुओं को संभाल। रिकॉर्ड असामान्य टिप्पणियों और प्रयोग से हटाने की आवश्यकता है कि पशु प्रदर्शित करता है स्थितियों अगर एक स्वास्थ्य तकनीशियन या पशु चिकित्सक स्टाफ से परामर्श करें।
    2. छोटे घाव या scabs के लिए ट्रिपल विरोधी जैविक मरहम साथ सामयिक उपचार प्रदान करें। एक जानवर एक पुरानी बीमारी या चोट की वजह से हटा दिया जाना चाहिए, तो इच्छामृत्यु के लिए प्रयोग से पशुओं को हटा दें। जानवरों हैंवापस ईई के लिए जानवरों वापस नहीं करते हैं, की देखरेख पशु अनुसंधान देखभाल समिति या पशु चिकित्सक के लिए जल्दी हटाने के मानदंडों को पूरा।
  2. सप्ताह में दो बार
    1. भोजन और पानी के स्तर की जाँच करें। उस फ़ीड सुनिश्चित करें और पानी के लिए अगले 3-4 दिनों के लिए पिछले जाएगा। वे बाहर फैले हुए हैं और चूहों द्वारा इस्तेमाल किया जा सकता है, ताकि चल पहियों और संवर्धन खिलौने को सीधा। बहुत गंदा कर रहे हैं कि किसी भी बदलें।
  3. साप्ताहिक
    1. साफ पानी की बोतल के साथ पानी की बोतलें बदलें। धारा 1.2 में सेटअप है कि इस प्रकार के एक तरीके में संवर्धन उपकरणों को पुनर्व्यवस्थित करें। अभी तक पिछले सप्ताह की स्थापना से अलग है।
      नोट: एक प्रयोग एक गतिविधि के लिए समृद्ध वातावरण से हटा दिया जाना जानवरों की आवश्यकता है (शरीर के वजन, खून आकर्षित, व्यवहार परीक्षण, आदि रिकॉर्डिंग) यह जानवरों दूर संवर्धन बिन से कर रहे हैं, जबकि पर्यावरण को पुनर्व्यवस्थित करने के लिए सबसे अच्छा है।
    2. हाथ से ई में खिला पिंजरों साफ या पिंजरे धोने के माध्यम से भेजके रूप में धारा 1.1.5 में विस्तृत जानकारी दी। के रूप में अच्छी तरह से साफ तार रैक के साथ भोजन और पानी पकड़ कि तार रैक बदलें।
    3. धारा 2.2 में निर्देश का पालन करें। संवर्धन में वापस पशुओं को रखने के लिए जब। यदि आवश्यक हो तो गंदे कूड़े बाहर scooping और नई स्वच्छ बिस्तर के नीचे के प्रसार के द्वारा, बड़े संवर्धन बिन और साफ के आराम की जांच हाजिर।
  4. द्वि-साप्ताहिक
    1. साप्ताहिक पशुपालन प्रदर्शन करते हुए, हाथ से खिलौने साफ या धारा 1.1.2 में विस्तृत रूप में पिंजरे धोने के माध्यम से भेज सकते हैं। यदि आवश्यक हो, साफ करने के लिए आवश्यक समय के लिए एक मानक माइक्रो अलगाने पिंजरे में चूहों जगह है।
  5. मासिक
    1. संवर्धन खिलौने चलती है और पिंजरों खिलाने और कूड़े बाहर scooping द्वारा कूड़े बाहर के बहुमत को साफ करें। ताजा कूड़े के साथ बदलें। पिंजरे के सभी क्षेत्रों में बिस्तर से एक इंच है कि वहाँ सुनिश्चित करें। यदि आवश्यक हो, साफ करने के लिए आवश्यक समय के लिए एक मानक माइक्रो अलगाने पिंजरे में चूहों जगह है।
  6. हर तीनमहीने के (या प्रयोग के अंत में)
    1. सभी बिस्तर और खिलौने और स्वच्छ निकालें और धारा 1.1.1 में वर्णित के रूप में संवर्धन बिन कीटाणुरहित। प्रयोग चल रहे हैं, तो पिंजरों, खिलौने का वर्गीकरण खिला, नए बिस्तर के साथ की जगह है और फिर बिन करने के लिए चूहों वापसी।
  7. ईई रखे है जिसमें अनुसंधान संस्था द्वारा यदि जरूरी हुआ तो हर तीन महीने की तुलना में अधिक बार पूरे संवर्धन बिन कीटाणुरहित। यह आवश्यक है और एक अन्य बड़े संवर्धन कंटेनर धारा 1.2 में विस्तृत रूप में अतिरिक्त संवर्धन कंटेनर की स्थापना की, उपलब्ध है। पिछले एक साफ किया जा रहा है, वहीं नए कंटेनर के लिए जानवरों को हस्तांतरण।

4. नियंत्रण आवास की स्थिति

  1. आयाम 30.5 सेमी x 19 सेमी x 14 सेमी की सूक्ष्म अलगाने पिंजरों में नियंत्रण समूह में घर पशुओं। पिंजरे एक स्वचालित पानी प्रणाली को झुका नहीं है, भोजन और एक पानी की बोतल के आयोजन के लिए पिंजरे में एक तार रैक शामिल करें।
  2. ई में है के रूप में नियंत्रण पिंजरे में एक ही मकई सिल बिस्तर प्रदान करें। चूहों के बाहर एक घोंसला बनाने के लिए के लिए एक 4 सेमी x 4 सेमी nestlet प्रदान करें।
  3. एक सप्ताह में एक बार तार, भोजन और पानी खिला, बदलें और / या पिंजरों को साफ। पिंजरों और तार रैक साफ पिंजरे धोने के माध्यम से या खंड 1.1.1.1 में विस्तृत रूप में। जानवरों के अधिक बार या बिस्तर पर पीने के पानी लीक अगर पेशाब अगर अधिक बार पिंजरों को साफ करें।
  4. नियंत्रण आवास दैनिक में पशुओं के स्वास्थ्य की निगरानी। जानवरों के भोजन और पानी की बहुत है विश्वास दिलाता हूं।
  5. नियमित माउस पिंजरे में एक ही लिंग के हाउस 3 ~ 5 चूहों। पिंजरे में कोई खिलौना, ट्यूब, या हच प्रदान नहीं करते।
  6. संस्थागत प्रयोगशाला पशु की देखभाल की सुविधा के लिए स्वास्थ्य और प्रयोगशाला तकनीशियनों इन पर नियंत्रण चूहों के लिए पशुपालन प्रदान कर सकता है।
  7. ई में चूहों के लिए है के रूप में एक 12 घंटा / प्रकाश अंधेरे चक्र पर पशुओं को रखने के।

Representative Results

ईई, वृद्धि कारक अभिव्यक्ति को प्रभावित करता है केंद्रीय तंत्रिका तंत्र (सीएनएस) 12,13 भीतर न्यूरोजेनेसिस और कोशिकाओं के अस्तित्व बढ़ जाती है। हाल के अध्ययनों ईई की इस तकनीक का एक germline उत्परिवर्तन होता है और में सहज ग्रंथ्यर्बुद गठन के लिए अत्यधिक संभावना है कि B16 मेलेनोमा, MC38 पेट के कैंसर और एपीसी मिनट / + माउस सहित तीन माउस कैंसर मॉडल में कैंसर के विकास का एक उल्लेखनीय दमन की ओर जाता है पता चला है कि आंतों 14। चित्रा 2 की पुष्टि में परिणाम 5 सप्ताह (~ ट्यूमर जन का 80% कमी) के लिए ई उजागर करने के लिए चूहों में प्रत्यारोपित B16 मेलेनोमा ट्यूमर के विकास के दमन। ट्यूमर 14 स्थापित किया गया था के बाद ईई शुरू किया गया था जब कैंसर के विकास दमन भी चूहों में मनाया गया। ईई सामान्य वजन (~ ट्यूमर जन का 50% कमी) 14 से चूहों में है कि अधिक से उच्च वसा वाले आहार प्रेरित मोटापा चूहों में मेलेनोमा विकास (~ ट्यूमर जन का 70% कमी) का अधिक से अधिक निषेध में हुई। ईई इंडस्ट्रीज़ मजबूत लेप्टिन की बूंद, IGF-1 की कमी, और एडिपोनेक्टिन का स्तर 14 वर्ष की वृद्धि सहित सीरम बायोमार्कर में uced हस्ताक्षर बदल जाता है।

इसके अलावा, ईई की इस तकनीक, adiposity कम हो जाती है ऊर्जा खर्च बढ़ जाती है, आहार-प्रेरित मोटापे के खिलाफ प्रतिरोध की ओर जाता है, और 15 अक्ष हाइपोथैलेमस-sympathoneural-adipocyte सक्रिय द्वारा ब्राउन वसा प्ररूपी स्विच करने के लिए एक सफेद लाती है। adiposity में कमी ईई को उजागर कर के रूप में जल्दी के रूप में छह दिनों में देखा गया था (चित्रा 3 ए, बी) और फिर चार सप्ताह (चित्रा -3 सी, डी) के लिए ईई के संपर्क में पशुओं में पुष्टि की। यह (है कि, एक, ईई के साथ जुड़े विरोधी कैंसर और मोटापे के प्रभाव दो, ईई प्रभाव मस्तिष्क व्युत्पन्न neurotrophic कारक की overexpression द्वारा reproduced किया जा सकता है, अकेले शारीरिक गतिविधि से जिम्मेदार है, और नहीं किया जा सकता भी ध्यान दें BDNF महत्वपूर्ण है hypothalamus) 14,15 में।

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चित्रा 1: समृद्ध वातावरण बिन स्थापित की समृद्ध वातावरण x 90 सेमी 120 सेमी का एक क्षेत्र है और तश्तरी पहियों, प्लास्टिक टयूबिंग, लकड़ी के लॉग, और अन्य प्लास्टिक संवर्धन खिलौनों के साथ दो संशोधित पिंजरों, चल पहियों, इग्लू भी शामिल है।।

चित्र 2
चित्रा 2: समृद्ध वातावरण C57BL 6 / नर चूहों में ट्यूमर के विकास को कम कर देता है तीन सप्ताह पुराने नर चूहों में ट्यूमर टीका करने से पहले 5 हफ्तों के लिए ई या नियंत्रण पिंजरों में घर थे।। सही दिशा से ऊपर पशु subcutaneously प्रति 10 5 कोशिकाओं का टीका के बाद 17 दिनों में B16 मेलेनोमा ट्यूमर भार (एन = समूह में 10। छात्र के टी -test, * पी ​​<0.05)।

चित्रा 3A
चित्रा 3 बी
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चित्रा 3 डी
चित्रा 3: समृद्ध वातावरण C57BL 6 / नर चूहों में adiposity कम हो जाती है तीन सप्ताह पुरानी चूहों ईई के अधीन थे;। चार सप्ताह के लिए 6 दिन, किसी अन्य के लिए एक समूह। (ए) ई में छह दिन (* पी <0.05, एन = समूह प्रति 5। छात्र के टी -test) वसा पैड वजन कम किया है। (बी) ई में छह दिन (* पी <0.05, एन = समूह प्रति 5। छात्र के टी -test) सापेक्ष शरीर के वजन को वसा पैड वजन कम किया है। (सी) ई में चार सप्ताह (* पी <0.05, एन = समूह प्रति 5। छात्र के टी -test) वसा पैड वजन कम किया है। (डी) ई में चार सप्ताह (* पी <0.05, एन = समूह प्रति 5। छात्र के टी -test) सापेक्ष शरीर के वजन को वसा पैड वजन कम किया है। बैट: भूरा वसा ऊतकों, IWAT: वंक्षण सफेद वसा ऊतकों, EWAT: अधिवृषणी सफेद वसा ऊतकों,RWAT: retroperitoneal सफेद वसा ऊतकों।

Discussion

मस्तिष्क में जीन की अभिव्यक्ति पर ईई के मजबूत प्रभाव है, फिर भी, adiposity और चूहों में कैंसर के विकास को शारीरिक गतिविधि, सामाजिक संपर्क, और संज्ञानात्मक चुनौतियों को बढ़ावा देता है एक तरह से जानवरों के उपन्यास वातावरण बनाए रखने और संभाल करने के लिए शोधकर्ता की क्षमता पर भारी निर्भर कमी आई नहीं संकट जानवरों करता है। याद करने के लिए दो सबसे महत्वपूर्ण प्रक्रियात्मक कदम उठाए हैं। सबसे पहले, हर हफ्ते खिलौने, वस्तुओं, और पिंजरों की नियुक्ति को बदलने के लिए याद है। खिलौने और वस्तुओं को पिछले सप्ताह से ही हो सकता है हालांकि, चूहों उपन्यास के रूप में पर्यावरण मानता है। खिलौने बदलें और हर दूसरे हफ्ते में अलग अलग लोगों के साथ खुद को वस्तुओं। दूसरा, पर्यावरण को स्वच्छ रखने के लिए याद है। गंदे बिस्तर हटा ले नहीं करता है, वृद्धि हुई नाइट्रोजन का स्तर जानवरों के लिए एक तनाव-हो सकता है।

इसके अलावा, इस ईई प्रोटोकॉल में नोट करने के लिए कई तकनीकों हैं। अलग या अद्वितीय खिलौने और विभिन्न के उपयोगप्लास्टिक ट्यूब mazes की डिजाइन के लिए प्रोत्साहित किया जाता है। वातावरण चुनौतीपूर्ण हो सकता है, लेकिन पशुओं के स्वास्थ्य के लिए एक खतरा नहीं किया जाना चाहिए। बेकार खिलौने पकड़ा हो रही माउस अंगों का खतरा बढ़ जाता है, या उस पर चबाने से भस्म अगर पशुओं को विषाक्त हो सकता है, क्योंकि इसके अलावा, बेकार हैं कि खिलौनों से सावधान रहना। ईई करने के लिए एक लगातार 2-3 लॉग्स द्वारा बिन के एक कोने या पक्ष को तनहा इग्लू के शीर्ष पर तीन तश्तरी पहियों, का उपयोग है। लॉग को पीछे तश्तरी चलाने का इस सेटअप हमारे सभी संवर्धन अध्ययन में उपस्थित किया गया है। अन्य वस्तुओं के उपयोग और स्थान के संदर्भ में, लेआउट का वर्णन से ऊपर ईई स्थापना के एक मूलभूत ब्लू प्रिंट है। प्लास्टिक टयूबिंग की इस मूलभूत ढांचे की सूचना दी, परिणाम प्रतिलिपि करने के लिए एक पर्याप्त उपन्यास वातावरण प्रदान करना चाहिए तश्तरी, पिंजरों और लॉग चल रहा है, पहियों के साथ चल रहे सेटअप का रूपांतर।

मधुमेह या अन्य चयापचय है कि ट्रांसजेनिक जानवरों के साथ काम कर रहे हैंबीमारियों, पशुओं के लिए भोजन और पानी से बाहर नहीं चला है कि आश्वस्त करने के लिए भोजन और पानी की खपत करने के लिए करीब ध्यान देना। जानवरों मधुमेह है, वे और अधिक पेशाब होगा, तो ईई आवास के बिस्तर स्थान की जाँच की और अधिक बार साफ करने की आवश्यकता हो सकती है। बिस्तर सबसे अधिक बार हटाया की जरूरत है कि ईई आवास में स्थानों के कोनों कर रहे हैं। वे जानवरों द्वारा इस्तेमाल किया जा सकता है, ताकि पहियों और अन्य खिलौने समायोजित करने के लिए याद रखें। जानवरों के बिस्तर में तश्तरी पहियों चल रहा है और अधिक चल रहा पहियों दस्तक करने में सक्षम हैं। जानवरों उम्र के 3 से 5 सप्ताह, युवा कर रहे हैं, वे जानवर हैं, जहां के रूप में जानकारी नहीं शोधकर्ता छोड़ रहा है, ई में पिंजरों के तहत खुदाई और वहाँ के तहत एक साथ छिपा हो सकता। , गंदे बिस्तर को हटाने के खिलौने की जगह, या पिंजरों की सफाई करते हैं, यह उनके पर्यावरण का समायोजन करते हुए उन्हें तनाव से बाहर तो नहीं के रूप में एक स्वच्छ मानक पिंजरे में जानवरों को डाल करने के लिए सुझाव दिया है। यह वे वातावरण में छिपाने के लिए कम जगहों पर है, तो एक पिंजरे में सभी जानवरों को पाने के लिए आसान हैironment। इसलिए, एक पिंजरे में जानवरों sequestering करने से पहले खिलौने को हटाने की प्रक्रिया को आसान बना देता है। सफाई के लिए इंतज़ार कर रहे हैं या उनके ईई वातावरण का समायोजन इसके अलावा, जबकि एक मानक पिंजरे में अधिक से अधिक 5-6 जानवरों जगह नहीं है। ईई वयस्कता में शुरू की है, खासकर जब ई में पुरुष जानवरों आक्रामक हो सकता है। इसलिए, यह किसी भी घायल या मृत पशुओं के लिए पर्यावरण का निरीक्षण करने के लिए महत्वपूर्ण है।

इसके अलावा, हम कंटेनर के इस बड़े आकार के लिए ई में घर पशुओं की विशिष्ट संख्या 10-20 चूहों है। ई में घर के लिए पशुओं की संख्या निर्धारित करते समय लगभग 10 या उससे कम चूहों का उपयोग अन्य शोधकर्ताओं भिन्न हो ईई के लिए उपयोग पशुओं की संख्या, और पिंजरे या बिन के आकार को ध्यान में रखा जाना चाहिए। एक जीवित वातावरण में भी कई जानवरों के बाद नर चूहों में आक्रामकता बढ़ सकता है। हम ई में रखे गए चूहों C57BL 6 / पृष्ठभूमि के लिए किया गया है। अन्य प्रकारों के चूहे कम या ज्यादा आक्रामक, या अधिक होने का खतरा स्वास्थ्य के मुद्दों के लिए में हो सकता हैइस ईई सेटअप। यह चूहों और समृद्ध पर्यावरण के लिए पशुपालन योजना का निर्धारण करने में ध्यान में रखा जाना चाहिए।

चार सप्ताह के ईई आवास adiposity की कमी, लेप्टिन स्तर की बूंद, और B16 मेलेनोमा विकास के अवरोध उत्पन्न करने के लिए पर्याप्त है। अब ईई चयापचय और कैंसर के निषेध पर मजबूत प्रभाव हो सकता है। चूहों के दौरान या ईई के लिए जोखिम से पहले शल्य चिकित्सा प्रक्रियाओं से गुजरना है, वे बरकरार टांके के साथ रखे जा सकते हैं। चाहे या नहीं जानवरों शल्य स्टेपल या अध्ययन नहीं किया गया बरकरार कैथेटर के साथ इस विशेष ईई सेटअप करने के लिए अच्छी तरह से प्रतिक्रिया। इसके अलावा, हम वर्तमान में इस विशेष ईई वृद्ध जानवरों की उम्र या healthspan को प्रभावित करता है कि कैसे जांच कर रहे हैं। प्रारंभिक आंकड़ों से महिला C57BL / 6 चूहों, उम्र के 10 महीने, युवा चूहों के लिए इसी तरह ईई का जवाब दें। ईई आवास की एक सीमा है और अधिमान्यतया एक लिंग विशिष्ट कक्ष में, जानवरों की सुविधा अंतरिक्ष में इस तरह के एक बड़े बिन मिलनसार है। Eff पर इस प्रकार भविष्य के अध्ययनोंएक छोटे पैमाने पर ईई के ECTS है, साथ ही, साफ उच्च तापमान सफाई सहन करने के लिए आसान कर रहे हैं और पशुओं के स्वास्थ्य के लिए सुरक्षित कर रहे हैं लग रहा है कि खिलौने, चयापचय और कैंसर अनुसंधान में ईई के आवेदनों में सुधार होगा।

Disclosures

लेखक ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा।

Acknowledgements

एनआईएच द्वारा समर्थित किया गया था इस काम के लिए नियंत्रण रेखा को CA163640, CA166590, और AG041250 अनुदान।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Large enrichment bin (120 cm x 90 cm x 76 cm) Custom made. Custom made. Made of polypropylene. Edges of the bin are 1.5 cm thick.
Large enrichment bin alternative (120 cm x 110 cm x 76 cm) Global Industrial 155202 If necessary, this bin works as an alternative to the one above.
Habitrail Mini tubes Habitrail 62720; 62705; 62725; 62715; 62054 -
Plastic igloos with saucer wheels Bio Serv K3327; K3250 -
Metal Running Wheels Super Pet 61392; 61394; 61396 -
Manzanita Wood Gnawing Sticks, 3" Bio Serv W0016
Mouse Tunnels Bio Serv K3322 -
Mouse cages that go in the large EE bin. Lab Products Inc 10027 Mouse Cage -
Cage Klenz 180 Alkaline Cage Wash Detergent, Cage Klenz 250 Acid Detergent Steris Life Sciences 1K1802; 1K2502 These detergents are used in the cage wash for the toys, large enrichment bins, and cages.
Sporklenz Steris Life Sciences 6526Q8 Alternative sporicide/disinfectant to washing toys, bins, and cages in cage wash.
Bed-O-Cobs 1/4" bedding The Andersons, Inc. 4B Corn cob bedding is 1/4" in diameter.
Nestlets for control housed mice Ancare Cotton squares

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References

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