स्टेटिक अंग संस्कृति का उपयोग कर तालु फ्यूजन का अध्ययन की विधि

Developmental Biology

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Summary

तालू विकास के अध्ययन फांक तालु, एक जबरदस्त स्वास्थ्य बोझ लगाता है और विरूपण से स्थायी छोड़ सकते हैं कि एक जन्म दोष की घटनाओं से प्रेरित हैं। हम यहाँ तालु विकास और फ्यूजन में शामिल विभिन्न संकेत दे रास्ते अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है कि संस्कृति तालु समतल करने के लिए एक तकनीक का प्रदर्शन।

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Ibrahim, I., Serrano, M. J., Svoboda, K. K. Method of Studying Palatal Fusion using Static Organ Culture. J. Vis. Exp. (103), e53063, doi:10.3791/53063 (2015).

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Abstract

फांक होंठ और तालू सभी जन्म दोष का सबसे आम के बीच में हैं। midline उपकला सीवन के लिए फार्म का पालन करता है कि उपकला के साथ कवर mesenchymal अलमारियों से माध्यमिक तालू रूपों (एमईएस)। सिद्धांतों एमईएस कोशिकाओं को एक दूसरे से जुड़ने तालू 1, जिससे mesenchymal संक्रमण (EMT), एपोप्टोसिस और पलायन करने के लिए एक उपकला का पालन करें कि सुझाव। एमईएस का पूरा विघटन mesenchymal कोशिकाओं के आसपास के साथ तालु संगम के अंतिम आवश्यक चरण है। हम तालू अंग संस्कृति के लिए एक विधि प्रदान करते हैं। इन विट्रो प्रोटोकॉल में विकसित संलयन के दौरान जैविक और आणविक प्रक्रियाओं के अध्ययन की अनुमति देता है। इस तकनीक के अनुप्रयोगों बहिर्जात रासायनिक एजेंटों के लिए मूल्यांकन करने की प्रतिक्रियाएं, विनियामक और विकास कारकों और विशिष्ट प्रोटीन के प्रभाव सहित कई हैं। तालु अंग संस्कृति vivo अध्ययन में उपयोग संभव नहीं है कि विकास के विभिन्न चरणों में हेरफेर सहित लाभ के एक नंबर है।

Introduction

Orofacial clefts सबसे प्रमुख craniofacial जन्म दोष हैं। इसके अलावा, विचार में सभी संभव craniofacial दोष ले रही है, इन नवजात शिशुओं 2 में दूसरा सबसे आम जन्म विसंगति है। फांक palates के लगभग 1 संयुक्त राज्य अमेरिका (अमेरिका) में हर साल में हर 700 बच्चों के जन्म में कम पाए जाते हैं, तालु की घटनाओं फांक प्रति माह palates या 3 दिन प्रति clefts के साथ 15 बच्चों के साथ पैदा हुआ 475 बच्चों के बराबर है। बच्चों का लगभग 1% हर साल प्रदर्शनी में दुनिया भर के craniofacial dysmorphology के कुछ फार्म का जन्म।

तालू और होंठ के clefts इस विसंगति है, जो मरीजों के लिए आजीवन प्रभाव के साथ एक बहुत ही महंगे और जटिल प्रक्रिया की जरूरत है। मौखिक फांक साथ प्रत्येक रोगी के लिए अनुमानित लागत लगभग $ 100,000 4 है। फांक होंठ और तालू के साथ एक रोगी के उपचार, craniofacial सर्जन, Otolaryngologists, आनुवांशिकी, निश्चेतक सहित डॉक्टरों की एक टीम की आवश्यकताभाषण भाषा पैथोलॉजिस्ट, पोषण विशेषज्ञ, Orthodontists, Prosthodontists, मनोवैज्ञानिक, न्यूरो सर्जन, और नेत्र रोग विज्ञानियों।

Palatogenesis में, माध्यमिक तालू शुरू में खड़ी बढ़ने और जीभ की पीठ के ऊपर तालु शेल्फ ऊंचाई से गुजरना जो बनती outgrowths, के रूप में उठता है। पदोन्नति के बाद बनती तालु समतल (मानव में चूहों में E14.5 -E15 पर और सप्ताह 9) midline की ओर बढ़ता है। शेल्फ टिप को शामिल किया गया है कि औसत दर्जे बढ़त उपकला (इ) midline उपकला सीवन के गठन का पालन करता है।

इस mesenchymal संगम अनुमति देने के लिए mesenchymal संक्रमण और / या apoptosis को उपकला द्वारा पीछा किया जाता है। विरोध करने इ के आसंजन जिसका परिवर्तन तालु का कारण बनता है एक अनिवार्य घटना है। हालांकि, केवल कुछ अध्ययनों तालु अलमारियों 5 की प्रारंभिक आसंजन की जांच की। अस्थिकोरक में mesenchymal कोशिकाओं के भेदभाव से कठिन तालू रूपों। कुंजी उत्पादन कर सकते हैं तालू की असामान्य विकासटी के साथ या होंठ की भागीदारी के बिना palates।

तालु अंग संस्कृति तकनीक पिछले 30 साल से 6.7 पर कई प्रयोगशालाओं के लिए व्यापक रूप से इस्तेमाल किया गया था।

इस प्रोटोकॉल में हम विवरण में तालु विच्छेदन और स्थिर अंग संस्कृति की एक विधि का वर्णन है। एक स्तब्ध अंग संस्कृति का लाभ यह है तालु अलमारियों फ्यूज करने के लिए अनुमति देता है। इस तकनीक में कई विलय और संकेतन प्रयोगों 8,9 के लिए हमारी प्रयोगशाला में सफलतापूर्वक इस्तेमाल किया गया था। तकनीक के दायरे विशाल है और स्थिर अंग संस्कृति प्रणाली बहिर्जात रासायनिक एजेंटों के लिए प्रतिक्रियाओं के मूल्यांकन सहित आवश्यक है, जब भी इस्तेमाल किया जा सकता हालांकि, अलग अलग रास्ते और विशिष्ट प्रोटीन में नियामक विकास कारकों का प्रभाव।

चित्र 1
चित्रा 1. माउस Palatogenesis। चूहों तालू के विकास के चरणों। (बीएफ) स्कैनिंग हाथीप्रतिनिधि विकासात्मक समय पर माध्यमिक तालू के ctron micrographs (SEM)। लाल तीर: तालु आसंजन और फ्यूजन की प्रारंभिक हिस्सा दिखा। पीले तीर: संलयन के बाद गायब हो जाएगा कि प्राथमिक और माध्यमिक palates के बीच अंतरिक्ष के लिए बिंदु (PLoS एक से अनुमति के साथ कॉफ़मैन 11 से reprinted)।

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Protocol

वर्णित सभी प्रक्रियाओं स्थानीय संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति द्वारा पूर्व अनुमोदन सहित कशेरुकी जीवों, के उपयोग के लिए दिशा निर्देशों और नियमों के अनुसार में प्रदर्शन किया जाना चाहिए।

विदारक उपकरण और संस्कृति मीडिया के 1. तैयारी

  1. Prewash सभी उपकरणों 3% हाइड्रोजन पेरोक्साइड और 20 मिनट के लिए 121 डिग्री सेल्सियस पर तो आटोक्लेव साथ विच्छेदन में इस्तेमाल किया जाएगा। एक डाकू में वैक्यूम सक्शन के साथ एक 0.22 माइक्रोन ताकना आकार फिल्टर का उपयोग एंटीबायोटिक और कवकनाशी के समाधान के साथ BGJb मीडिया फिल्टर।

संस्कृति उपकरण की 2. तैयारी

  1. 70% शराब के साथ स्प्रे, छोटे त्रिकोण में तालु अंगों का समर्थन करेंगे कि पॉली कार्बोनेट झिल्ली फिल्टर कटौती और उन्हें सुखाने के लिए अनुमति देते हैं। अंग संस्कृति प्लेट पर एक स्वच्छ और निष्फल समभुज त्रिकोणीय के आकार का तार ग्रिड (20 मिमी) रखकर केंद्र-वैसे अंग संस्कृति डिश (60x15 मिमी) तैयार करें। तो बी के 1 मिलीलीटर के साथ अच्छी तरह से भरनेGJB मीडिया संस्कृति मीडिया। नोट: मीडिया palates के जलमग्न बिना ग्रिड के स्तर तक पहुंचने के लिए पर्याप्त होना चाहिए। प्रयोग पर .Depending ग्रिड के शीर्ष पर झिल्ली फिल्टर, चमकदार ओर नीचे, (ग्रिड प्रति 3-4 झिल्ली) प्लेस, उपचार (प्रोटीन, एंटीबॉडी या अवरोधकों) मीडिया के लिए जोड़ा जा सकता है

3. माउस भ्रूण संग्रह और संस्कृति के लिए तैयारी

  1. जंगली प्रकार माउस भ्रूण प्राप्त करने के लिए, उपयोग 13.5 गर्भवती सीडी-एक माउस आनुवंशिक पृष्ठभूमि तनाव समय पर। 70% इथेनॉल के साथ विच्छेदन क्षेत्र को साफ।
    नोट: चूहों की अन्य उपभेदों के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। हम बड़ा कूड़े नंबर की सीडी-1 चूहों पसंद करते हैं।
  2. मंजूरी दे दी प्रोटोकॉल का उपयोग मौत का बीमा करने की ग्रीवा अव्यवस्था के बाद 5% isoflurane साथ E13.5 डीपीसी (दिन सहवास पोस्ट) पर गर्भवती चूहों euthanize।
  3. उपकरणों के पेट में बाल छड़ी होने से बचने के उदर पेट की सतह पर 70% इथेनॉल का छिड़काव करें। फिर पेट के बल उदर गुहा खुलातेज-कुंद ऑपरेटिंग कैंची और सूक्ष्म विदारक संदंश एक का उपयोग कर गर्भाशय का पता लगाने के लिए। संदंश का प्रयोग, पूरे गर्भाशय उठा और गर्भाशय शरीर पर काटने से और एक प्रकाश ऑपरेटिंग कैंची से गर्भाशय सींग के सुझावों पर शरीर से अलग।
  4. (देखभाल और प्रयोगशाला पशुओं के इस्तेमाल के लिए प्रोटोकॉल मार्गदर्शिका के अनुसार) बर्फ पर एक साफ कागज तौलिया पर गर्भाशय रखें। प्रदूषण को रोकने के लिए एक और साफ कागज तौलिया के साथ गर्भाशय को कवर किया। पहले आगे का उपयोग 70% इथेनॉल स्प्रे का उपयोग उपकरणों जीवाणुरहित। गर्भाशय और भ्रूण बर्फ पर प्रयोगशाला के लिए ले जाया जा सकता है।
  5. एक खुला लामिना का प्रवाह हुड में, ध्यान से तेज-कुंद ऑपरेटिंग कैंची और सूक्ष्म विदारक संदंश का उपयोग जर्दी थैली में एक छोटी सी शुरुआत कर सकते हैं। उद्घाटन व्यापक बनाने और फिर धीरे जर्दी थैली से भ्रूण अमल करने के लिए धक्का।
  6. ठंड फॉस्फेट बफर खारा 1X (पीबीएस) 7.4 पीएच के साथ एक पेट्री डिश के लिए तुरंत भ्रूण स्थानांतरण। उचित मंच, पूर्व आश्वस्त करने के लिएशरीर, सिर का आकार और अंग आकृति विज्ञान के लिए एक विदारक माइक्रोस्कोप के तहत भ्रूण amine।
    नोट: विकास की सही अवस्था में नहीं हैं कि भ्रूण प्रयोग के लिए इस्तेमाल नहीं कर रहे हैं।

चित्र 2
चित्रा 2. अंग कली आकृति विज्ञान। आगे और हिंद अंग अंक के बीच बद्धी खरोज की डिग्री के लिए जाँच कर रहे हैं। E13.5 में, सभी अंकों condensations अंक के बीच बद्धी और बाहर का indentations बहुत अलग प्रदर्शित होने के साथ, प्रमुख हैं। हिंद अंक एक आधे दिन से पीछे हैं 12 ऊपरी पंक्ति:। forelimb, कम पंक्ति: हिंद अंग।

4. तालु विच्छेदन

  1. विदारक माइक्रोस्कोप के तहत पीबीएस के साथ एक पेट्री डिश में एक समय में एक भ्रूण रखें। का उपयोग कर छोटे विदारक कैंची और चिमटी भ्रूण के शरीर से सिर अलग।
  2. ध्यान से संदंश के साथ आंख के स्तर से ऊपर माउस कपाल होल्डिंग (परहेजदाढ़ की प्रक्रिया) होंठ लाइन के दोनों किनारों पर दो चीरों बनाते हैं। तब जबड़ा और जीभ को हटा दें। आंखों के स्तर पर एक कट बनाकर दाढ़ की प्रक्रिया क्षेत्र को अलग और मस्तिष्क, आंखों, नाक पट और आसपास के ऊतक को हटा दें।

चित्र तीन
चित्रा 3. तालु ऊतक तालू अलमारियों ऊंचा था जब 13.5 भ्रूण से एकत्र लेकिन संपर्क नहीं बने। तालु अलमारियों स्थिर मॉडल में 72 घंटे के लिए हवा मीडिया इंटरफेस में एक फिल्टर पर अंग संस्कृति में रखा गया था। (ए) स्तर E13.5 भ्रूण पर विच्छेदन। (बी) ब्लू सितारे विच्छेदन के दौरान संदंश के साथ ऊतक धारण करने के लिए क्षेत्रों को चिह्नित। एक चतुर्भुज फिल्टर झिल्ली पर रखा विच्छेदित तालु अलमारियों (सी) देखें। संस्कृति डिश (डी) साइड दृश्य की नियुक्ति के बाद विच्छेदित palates और संस्कृति मीडिया के अलावा।

  1. पीछे पूर्वकाल से पूरबी यह मदद करने के लिए संलग्न प्राथमिक तालू रखने, तालु मौखिक ऊपर की ओर रखें और नाक पट और उसके चारों ओर के ऊतकों को हटा दें। एक चम्मच रंग का प्रयोग करें और बहुत सावधानी से संस्कृति बर्तन में ग्रिड पर तैयार फिल्टर करने के लिए (नाक नीचे की ओर) तालु अलमारियों हस्तांतरण। नोट: उचित हवा मीडिया इंटरफ़ेस अनुमति देने के लिए मीडिया की मात्रा समायोजित करें।
  2. स्टीरियो माइक्रोस्कोप के तहत प्राथमिक तालू टुकड़े करना और एक दूसरे के करीब तालु अलमारियों जगह के लिए चिमटी का उपयोग करें। वे संपर्क में नहीं रखा जाता है, तो तालु अलमारियों फ्यूज नहीं होगा। तालू का अग्र भाग में स्थित है जहां त्रिकोणीय झिल्ली फिल्टर कट। चतुर्भुज आकार तालू का अग्र भाग स्थानीयकृत करने में सहायता करेगा।
  3. संस्कृति तालु अलमारियों व्यक्तिगत रूप से या दो या BGJb संस्कृति मीडिया का उपयोग कर एक ही अंग संस्कृति डिश में तीन के साथ।

5. संवर्धन माउस तालु अलमारियों

  1. Tissu सेते72 घंटे के लिए एक humidified गैस मिश्रण (5% सीओ 2 और 95% हवा) में 37 डिग्री सेल्सियस पर तों, और मध्यम हर 24 घंटा बदल जाते हैं।

Histological विश्लेषण के लिए 6. तालु प्रसंस्करण

  1. / एन 4 डिग्री पर 4% formaldehyde / फॉस्फेट बफर खारा हे के साथ संस्कृति में 72 घंटे के बाद palates के फिक्स   सी फिर, धीरे से एक हस्तांतरण विंदुक के साथ पीबीएस के साथ संस्कृति डिश में ऊतक धो लें। कैसेट embedding में प्रयोगशाला पोंछे और जगह का एक टुकड़ा में palates के लपेटें।
    नोट: प्रयोगशाला पोंछे में palates के लपेटकर निर्जलीकरण की प्रक्रिया के दौरान उनके नुकसान को रोकने के।
  2. 70%, 80% के बाद और नियमित आयल एम्बेडिंग प्रक्रिया के द्वारा पीछा 1 घंटे के लिए 100% इथेनॉल washes, अप करने के लिए ऊतक निर्जलीकरण। एम्बेड करने के लिए, ट्रे का सामना करना पड़ तालू का अग्र भाग को जगह है।
  3. पीछे पूर्वकाल से राज्याभिषेक अभिविन्यास में सीरियल 6 माइक्रोन वर्गों में कटौती। एक पूरा खंड तालू 350-450 secti निकलेगाons। Hematoxylin और eosin (एच एंड ई)। 10 स्कोर पहले से वर्णित मतलब फ्यूजन स्कोर का उपयोग करते हुए हर 20 वें खंड (म्यूच्युअल फंड) पैमाने (तालिका 1) के साथ वर्गों दाग। 8

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Representative Results

तकनीक experiments.The निम्नलिखित अध्ययन के विभिन्न प्रकार के लिए लागू किया जा सकता है, तालु संलयन पर इन विट्रो में निकोटीन की टेराटोजेनिक प्रभाव का परीक्षण करने के लिए डिजाइन किया गया था। चूहों के दो नस्लों इस प्रयोग के लिए उपयोग किया गया, CD1 और C57.Palatal ऊतक निकोटीन hemisulfate की 0.06 और 6 मिमी सांद्रता के साथ इलाज किया गया था। यह तालु संलयन पैटर्न और समय दो विभिन्न प्रकारों में अलग थे कि मनाया गया। CD1 चूहों में, नियंत्रण समूह से तालु अलमारियों समय निर्भर तरीके से संलयन जारी रखा। हालांकि, विशेष रूप से 6MM निकोटीन एकाग्रता (चित्रा 4 ए) में इलाज समूह निकोटीन देरी संलयन में। CD1 माउस palates के ऊतक विज्ञान वर्गों नियंत्रण नमूनों में 72 घंटे के बाद कुल संलयन दिखाया। निकोटीन की कम मात्रा में तालु अलमारियों पालन लेकिन उपकला कोशिकाओं संस्कृति में 3 दिनों के बाद रहते हैं। निकोटीन की उच्च खुराक पर incubated तालु अलमारियों ऊष्मायन के 72 घंटे के बाद संपर्क नहीं बना था।

(चित्रा 4 बी) के लिए निकोटीन की 0.6 मिमी एकाग्रता पर incubated नमूनों के साथ तुलना में 48 घंटे के लिए incubated रहे थे लेकिन, जब C57 चूहों के तालु अलमारियों 6 मिमी एकाग्रता में उच्च स्कोर दिखाया। C57 चूहों palates के ऊतक विज्ञान वर्गों उपचार समूहों में एक सतत उपकला सीवन midline में कायम है कि पता चला है। फ्यूजन 72 घंटा पर नियंत्रण समूह में सिर्फ मनाया गया।

हम चूहों में दोनों प्रकार कि तालु संलयन निकोटीन की उच्च खुराक से प्रभावित था मनाया। हालांकि, C57 से palates के निकोटीन के लिए और अधिक समझदार थे। अंत में, हमारे परिणाम चूहों की आनुवंशिक पृष्ठभूमि तालु ऊतकों में निकोटीन की प्रतिक्रियाएं प्रभावित करती है कि प्रदर्शित करता है।

चित्रा 4
दो 24 के लिए निकोटीन की मौजूदगी में सुसंस्कृत माउस palates के तनाव, 48, या 72 घंटा। माउस उपभेदों विभिन्न डिग्री में निकोटीन को जवाब दिया। निकोटीन की उच्च खुराक (6 मिमी) के संपर्क में सभी palates के फ्यूज करने में विफल रहा है और 24 घंटे में, palates से कोई भी बंद कर दिया था कि कम मतलब संलयन स्कोर (म्यूच्युअल फंड) है.नोट था और म्यूच्युअल फंड (तालु अलमारियों को छू नहीं) 1 से लेकर सभी समूहों में 3 (आंशिक फ्यूजन) के लिए। 48 घंटा तक, नियंत्रण palates की कई आंशिक रूप से (3 से अधिक अंक) जुड़े हुए थे और 72 घंटा से, CD1 palates के पूरी तरह से (5 अंक) जुड़े हुए थे, लेकिन C57 नियंत्रण पूरी तरह से (3.67) जुड़े नहीं था। (मारिया सेरानो और डॉ कैथी Svoboda से अप्रकाशित डेटा)।

स्कोर मानदंड
1 कोई आसंजन के साथ गैर-संलयन।
2 कुछ स्पष्ट आसंजन के साथ गैर-संलयन।
3 कुछ इ परतों के विघटन और स्पष्ट आंशिक mesenchymal संगम के साथ आसंजन।
4 इ कोशिकाओं या सीम शेष के कुछ निशान के साथ पूर्ण करें संलयन।
5 इ कोशिकाओं या सीम दृश्यमान का कोई सबूत के साथ पूर्ण करें संलयन।

तालिका 1: मीन फ्यूजन स्कोर (म्यूच्युअल फंड) पैमाने (कांग और Svoboda, 2002)। पूर्वकाल के लिए प्रत्येक तालू के लिए स्कोर की गणना (वर्गों 1-150), मध्य (वर्गों 150-300) और पीछे (वर्गों 300-450)। 8

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Discussion

इस लेख में प्रोटोकॉल भ्रूण दिन 13.5 पर भ्रूण से तालु अलमारियों विदारक का एक तरीका प्रदान करता है। माउस भ्रूण से तालु अलमारियों 37 डिग्री सेल्सियस पर 95% ओ 2 से 5% सीओ 2 के माहौल में एक सीरम मुक्त संस्कृति मीडिया में सुसंस्कृत थे। सफल तालु विच्छेदन संस्कृति के पूरा होने से euthanized चूहों के भ्रूण समय से प्रक्रिया के दौरान हर कदम पर कई कारकों पर निर्भर है। तालु संलयन को प्रभावित करने के लिए सबसे महत्वपूर्ण कारकों में से एक अंग संस्कृति शुरू करने के लिए समय ले लिया है; भ्रूण भ्रूण दिन 13.5 माध्यमिक तालू अलमारियों क्षैतिज रहे हैं के रूप में रहने की जरूरत है, लेकिन चित्रा (1) फ्यूज करने के लिए शुरू नहीं किया है।

प्रक्रिया के दौरान एक अन्य महत्वपूर्ण बिंदु जर्दी थैली से भ्रूण की बाह्यीकरण है। यह कदम चेहरे संरचनाओं को होने वाले नुकसान को रोकने के लिए बड़ी सावधानी की आवश्यकता है। भ्रूण थैली से हटा दिया है, एक बार सिर से निकाल दिया जाता हैएक पेट्री डिश में रखा शरीर और दोनों पक्षों से फाइबर ऑप्टिक रोशनी के साथ एक stereomicroscope के साथ देखा जाना चाहिए। जबड़ा और जीभ तालू उजागर हटा रहे हैं। मस्तिष्क और अवशिष्ट ऊतक आँख के स्तर पर निकाल रहे हैं। इस बिंदु पर यह अलमारियों के आसपास उपकला परत विचार करने के लिए महत्वपूर्ण है। यह इन कोशिकाओं की अखंडता को बनाए रखने के लिए बहुत ध्यान से ऊतक हेरफेर करने के लिए आवश्यक है। उपकला कोशिकाओं एमईएस के पालन और गठन के लिए जिम्मेदार हैं।

प्रत्येक विच्छेदित तालू नाक पट से किसी भी उपास्थि साफ करने के लिए नीचे मौखिक ओर कर दिया है। इस ऊतक तालू के पूर्वकाल तरफ है और whiter और अधिक गाढ़ा प्रकट होता है। अवांछित ऊतक से मुक्त तालु अलमारियों एक संस्कृति डिश में ले जाया गया और फिल्टर झिल्ली के शीर्ष पर रखा जाता है। अलमारियों की स्थिति स्टीरियो विदारक माइक्रोस्कोप के तहत फिर से जाँच की है। वे तालु संलयन पर पालन करने और आगे की अनुमति के लिए एक साथ धक्का दे दिया जाना चाहिए।

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
BGJb Invitrogen
Penicillin/Streptomycin Lonza Inc. 17-602E 100X
Petri dishes VWR 25384-088 100 x15 mm
Center-well organ culture dish Falcon  #353037 60 x15 mm
Wire triangular grid Custom made with stainless steel wire mesh to fit the organ culture dish well.  
Polycarbonate filter GE& Water and Process Technologies K04BP04700 Black 0.4 micron, 47 mm
Stereo microscope ZEISS  Stemi SR
Culture hood NUAIRE Laminar Flow
Microdissecting forceps Dumont Medical  #5
Microdissecting scissors Kent Scientific Corporation INS14003-G Vannas Scissors, straight, 8 cm long, 0.1mm tips, 5 mm blades, German made
Microdissecting scissors Kent Scientific Corporation INS500086 Vannas Scissors, straight, 8.5 cm long, 0.025 mm x 0.015 mm tips, 7 mm blades
Microdissecting scissors Kent Scientific Corporation INS14127-G Spring scissors curved curved, 10.5 cm long, 8 mm blades, German made
Surgical currete (spoon spatula) Hu-friedy CM 2/4
Protector laboratory hood Labconco
Incubator Thermo Scientific Farma
Series11 water Jacket
CO2 incubator
PBS  GIBCO 10010-023  1X
Fiber optic Light source Fiber-light  Dolan-Jenner PL-750
Embedding cassette  Statlab EC301
Kim Wipes VWR 470173-504

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References

  1. Nawshad, A. Palatal seam disintegration to die or not to die that is no longer the question. Developmental dynamics an official publication of the American Association of Anatomists. 237, 2643-2656 (2008).
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