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Baczynska, A. M., Shaw, S., Roberts, H. C., Cooper, C., Aihie Sayer, A., Patel, H. P. Human Vastus Lateralis Skeletal Muscle Biopsy Using the Weil-Blakesley Conchotome. J. Vis. Exp. (109), e53075, doi:10.3791/53075 (2016).

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Abstract

웨일 - Blakesley의 conchotome를 사용하여 경피적 근육 생검 잘 모두 임상 및 연구 사례에 설립된다. 그것은 안전하고 효과적이고 내약성 기술이다. 6 mm 폭 중공 - 웨일 - Blakesley의 conchotome는 4 날카로운 물고 팁이있다. 그것은 5를 통해 삽입 - 10 mm의 피부 절개 및 제어 조직 침투 였는데 될 수있다. 팁 열고 조직 내에서 폐쇄하고 근육을 잘라 90 -180 °를 회전합니다. 얻어진 근육의 양은 샘플링 조직학 및 분자 연구 모두 처리 할 수​​ 290 mg의 20 밀리그램에서 변화 할 수있다 반복 다음과 같다. 상처 활동의 정상적인 수준의 절차에 따라 즉시 다시 시작할 수 있지만, 건조하고 격렬한 신체 활동은 약 72 시간 동안 최소한으로 유지 될 필요가있다. 주의는 주체, 전체 무균 및 사후 절차 관리의 선택에 지불하는 경우이 절차는 안전하고 효과적이다. 오른쪽과 왼쪽 모두 Vastus의 lateralis는 참가자의 선호에 따라 조직 검사에 적합하다.

Introduction

근 질환 및 기타 신경 근육 퇴행성 질환의 진단을위한 골격 근육을 얻는 것은 허용 환자 1 무기력하지 않은 안전하고 효율적인 방법을 사용합니다. 역사적으로, 분석을 위해 근육 조직을 얻는 방법은 전신 마취 또는 사후 부검에서 수행 개방 생검을 포함했다. 이러한 기술은 근육의 직접적인 시각화를 허용 근육의 큰 부분이 될 수 생검. 이러한 기술은 입원과 회복의 관점에서 환자에게이 잠재적 인 단점을 감안할 때, 경피적 '반 열린'근육 조직 검사 방법이 대안으로 소개되었다. 이 기술은 제 투관침과 자기 구성 바늘을 사용하는 일반적인 마취이없이 생체로부터 근육 시료를 수득 할 수 있었다 뒤센 (1806-1875)에서 수행 하였다. 그 후, 생검 바늘의 다양한 형태 3,4,5- 사용되었다. 그러나, 생검 N1962 년 버그 스트롬에 의해 개발 eedle는 가장 일반적으로 임상에서 사용하고있다; 두 어린이와 성인뿐만 아니라 연구 6,7,8,9,10있다. 그것은 날카로운 투관침, 절단 캐 뉼러와 조직 후 조직 검사를 추방하기 위해 추진로드를 보유하고있다. 샘플링 11,9 반복 한 후이 절차에서 얻은 근육 수율은 25 -293 mg의 범위에보고되었다.

Henriksson은 (그림 1) 12 대체 세미 오픈 근육 생검 방법으로 1979 년 웨일 - Blakesley의 conchotome을 소개했다. 장비는 버그 스트롬 구조와는 달리 하나의 구조와 날카로운 물고 팁 forcep처럼 설계되어 있습니다. 팁의 크기는 4 mm 내지 폭 6mm의 범위 일 수있다. 팅 팁의 두 대향 에지 때 중공 근육 포착을 보장이 형성된다. conchotome는 1-5 삽입 - 10 ㎜ 피부 절개 scalpe 등 근육과 근막 상부를 관통하는 투관침에 대한 필요성을 회피L은 근육까지 추적하는데 사용될 수있다.

이 방법은 조작성 13,14 높은 수준의 조직 침투를 제어 허용한다. 그것은 과도한 압력이 잠재적 예를 들어, 신경 혈관 또는 기본 뼈 구조가 손상 될 수 있습니다 사이트에 특히 유용합니다., 전 경골근 15,14의 사이트에서. conchotome를 사용하여 근육 수익률은 변수가 될 수 있으며, 우리의 실천 (20) - 근육의 200 mg을 반복 샘플링 후의되었습니다. 버그 스트롬 바늘 위에 conchotome의 하나의 잠재적 인 장점은 제공 기동성 높은 이외에 팅 선단이 뾰족하거나 버그 스트롬의 투관침 (16)을 구성만큼 자주 교체 할 필요가 없다는 것이다.

웨일 Blakesley의 conchotome를 사용하여 근육 조직 검사의 전반적인 목표는 모두 진단 및 resear에 대한 조직 화학 및 분자 분석을 가능하게 근육 조직의 충분한 양을 얻을 수있다채널 연구. 그것은 쉽게 배울 수있는 간단하고 안전한 방법입니다. 이 기술, 조직 검사에 적합한 근육은 이두근, 삼두근, 삼각근, 비복근, 경골근, 가자미근과 sacrospinals 17,15,7,18,14을 포함한다. 이 대퇴부 신경 혈관 내의 주요 구조로서 피할 광근 lateralis의 최 외측 부분은 생검 가장 일반적으로 사용되는 위치이다. 그것은 전방 골극과 슬개골에 합류 가상 선 아래로 약 3 분의 2 식별된다. 근육 형태 데이터는 광근로부터 유도 예 myofibre 영역 myofibre 비율 모세관 밀도 샘플링 연구 11,19 사이의 비교를 허용 문헌에서 널리 사용할 lateralis.

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Protocol

윤리 문 : 우리는 우리의 기관 내에서 다음과 근육 조직 검사 절차에 대한 설명은 이제 다음과 같습니다. 근육 생검 절차는 하트 퍼 드셔 연구위원회 번호 07 / Q0204 / 68에 의해 승인 된 하트 퍼 드셔 감소증 연구에 사용된다. 모든 참가자는 동의서 (20)를 기록했다.
참고 : 하나의 작업자가 불안을​​ 줄이고 그들은 항상 편안 것을 보장하기 위해 대화에 참가자를 참여 할 수있는 조수의 도움 절차를 수행 할 수 있습니다. 프로 시저 객실은 싱크대 높이 조절 소파, 깨끗한 표면과 절차 트롤리 장착해야합니다.

1. 참가자를 준비합니다 (그림 2)

  1. 소파에 누워서 편안하게 누워 참가자를 요청합니다. 사타구니 주름에서 선호 허벅지를 노출. 노출 된 허벅지에서 일회용 흡수 시트를 확산. 다리가 절차 전반에 걸쳐 직선과 편안한 남아 있는지 확인하지만,허벅지는 광근 lateralis 윤곽을 순간적으로 긴장된다.
  2. 슬개골의 전방 골극에서 가상 선 아래로 마크 프로 시저 사이트 약 3 분의 2.

2. 피부를 준비합니다 (그림 2)

  1. 멸균 면도날과 제안 생검 부위를 둘러싸는 직경 약 4cm로 피부를 면도 알콜 면봉으로 피부를 깨끗하게.
    주 :이 치료 과정 동안 상처 후속 머리 포획을 방지하기위한 것이다. 이 단계는 운영자의 선호도에 따라 선택적이다.
  2. 국소 마취제로 피부와 상부 밴드를 침투. 다음 23 G 바늘로 피하 조직에 깊이 침투 2 % 리도카인의 피하 소포를 높이기 위해 25 G 바늘을 사용합니다. 생검 부위의 피하 조직의 함량에 따라 1 인치 적어도 반 투과하고자합니다. 이 깊이 덮는 FAS를 보장하기에 충분해야중앙 정보국 (CIA)은 마취됩니다. 행동 마취에 대한 5 분 - 2를 허용합니다. 바늘이나 메스 블레이드 팁으로 부드럽게 피부를 프로빙하여 마취를 확인합니다.

3. 멸균 필드를 준비합니다 (그림 2)

  1. 비누로 손을 씻고 멸균 가운 착용 할 때까지 깨끗한 손을 유지한다. 프로 시저 트롤리에 멸균 필드를 작성하기 전에 멸균 장갑 손을 커버.
  2. 2 % 클로르헥시딘 / 이소 프로필 알코올 용액 또는 요오드 계 소독제 피부 생검 부위를 소독. 생검 부위를 노출시키는 개구 접착제로 멸균 드레이프 적용뿐만 아니라 멸균 필드를 유지한다.

4. 절차를 수행합니다 (그림 2)

  1. 아래 및 상부 밴드를 통해 피부에 10mm 절개 - 크기 11 메스로, 5합니다. 하나 인치 깊이 평균화 절반, 대퇴골의 장축에 직각으로 절개를 통해서 conchotome의 폐쇄 팅 팁을 삽입한다. 필요한 사용하는 경우자유로운 손을 잡고 conchotome의 선단이 근육 내 개폐하면서 생검 부위를 둘러싸는 대퇴부를지지한다.
  2. 근육을 잘라 180 ° - (90)를 통해 conchotome을 돌립니다. conchotome을 철회하고 멸균 생리 식염수로 적신 멸균 거즈에 팁을 엽니 다. 필요한 경우, 충분한 근육 조직을 얻기 위해, 하나의 상처 부위에서의 절차를 반복한다. 얼음에 배치 된 용기에 거즈를 전송합니다. 로컬 기관 프로토콜에 따라 근육 처리 준비 실험실 용기를 옮긴다.

5. 사후 절차 (그림 2)

  1. 최대 5 분 동안 상처에 직접 압력을 적용합니다. 잠재적 흉터 조직을 제거하고 steri - 스트립 실수로 제거하는 경우 상처 재개 방지 직각 대향로 상처 평행 배치함으로써 steri - 스트립 상처습니다. steri - 스트립에 멸균 흡수 드레싱을 놓고 두 층 넥타이압축 붕대와 테이프로 고정합니다.
  2. 시술 후 4 일 - 그들이 드레싱 변화 3을 수행해야합니다으로 참가자에게 상처 드레싱 방법을 설명한다. 참가자가 나중에 저녁에 자기 전에 압축 붕대를 제거했는지 확인하십시오.

6. 포스트 생검 조언

  1. 이 부드러운 운동에 의해 완화 될 수있다 (예.를 산책) 일부 허벅지 강성을 경험하는 것이 일반적입니다 참가자를 알립니다. 같은 아세트 아미노펜 같은 간단한 진통제를 사용합니다. 최대 2 주뿐만 아니라 상처 감염의 잠재적 인 합병증 지속될 수 생검 사이트 주위에 일시적인 마비에 대한 참가자를 경고한다.

제목 포스트 절차 7. 지침

  1. (예를 들면, 달리기, 무거운 등반 등) 72 시간 동안 활발한 활동을 방지하기 위해 참가자를 요청합니다. 72 시간 - 48 물에 침수를 방지하기 위해 참가자를 요청합니다. 그러나 participan 지시드레싱 건조를 유지하기 위해 샤워를 갖는 경우 t는 집착 필름 또는 생검 사이트 주위에 비슷한 포장합니다.
  2. 4 일 1 주일 후 steri - 스트립을 제거 - 3 후 드레싱을 변경하는 참가자에게 물어보십시오.
    참고 : 참가자가 후 조직 검사 관리, 예비 드레싱 및 절차를 수행 할 책임이 팀의 비상 연락처 정보에 대한 작성 지침을 제공한다.

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Representative Results

전술 한 과정은 모두 임상 연구 설정 안전하고 좋다. 조직 검사가 진단 과정의 일부로서 수행 될 때, 근육은 환자의 증상과 근육 약화의 증상에 따라 선택해야합니다. 조직 검사 사이트는 이전의 부상, 경축 또는 계측 21,1 없어야한다. 연구에서는 당뇨병 환자의 공복 또는 제외 등의 표준화 된 조건은 19해야 할 수 있습니다. 이러한 와파린 같은 항응고제를 중지하고 응고 시간이 절차 전에 확인해야합니다. 경험이 크게 초과 22 출혈의 위험을 증가시키지 않는 있듯이 75mg의 용량 단순 아스피린이 계속 될 수있다. 또한, 고려 상처 치유를 손상 약물을 복용 참가자들에게 주어져야한다. 본질적으로, 약물을 중단의 위험이 각각의 방법의 이점에 대해 칭량해야케이스. 참가자 선정시, 국소 마취제, 요오드 / 클로르헥시딘 및 상처 드레싱에 대한 잠재적 인 알레르기의 상세한 역사를 얻을 수 있어야하고 필요에 따라 대안이 사용된다. 참가자들은 피부의 증가 발적, 지역 붓기 또는 물집으로 나타날 수 알레르기 반응의 드물지만 잠재적 인 발생에 대한 경고해야한다. 항히스타민와 드레싱 (들) 및 치료 이러한 상황 제거에서 / 스테로이드가 필요할 수 있습니다.

20 분 - 절차는 약 15 걸립니다. 창상 감염의 위험을 최소화하기 위해 무균에주의하는 것이 중요하다. 절차 참가자 중 일부 불편 함이 발생할 수 있습니다. 날카로운 통증의 발생은 국소 마취제의 추가 침투를 필요로 할 수 있습니다. 절차 후, 허벅지 강성은 일반적으로 경험하고 (걷기, 예.) 부드러운 운동에 의해 완화 될 수있다. 하트 퍼 드셔 감소증에서연구 (HSS)는 통증 시각적 상사 척도 (VAS) (0mm에서 규모 - 100mm에 '고통'- '가 될 수있는만큼 나쁜 통증')로 측정 한 통증 점수 7 mm의 중간에 일반적으로 낮았다 절차 및 4mm 동안이 연구의 연구 주제를 제안 시술 후 일일 3 %로 1 %에서 절차 최소한의 고통 (22) (자료 표) 문헌에보고 상처 합병증의 국지적 인 속도 범위를 발견하고 주로 상처 혈종을 포함 형성 13,9,14. 한 연구는 심각한 부 근막 혈종 및 후속 심 부정맥 혈전증 (13)을 설명했다. HSS (3 주 동안 흉터 밑에 하드 덩어리로서 설명) 상처 합병증의 비율은 1 % (22)이었다. 참가자는 피부와 피하 조직을 절개 할 필요가 주어진 작은 절개 부위 주위에 마비가 발생할 수 있습니다. 우리의 경험이 마비가 과도하고있다 완전히 하나 또는 두 개의 꼬마 내에 해결했다 KS.

대표 조직 학적 결과에 대해, 우리는 이전에 개발 영향과 근육의 형태 (19) 사이의 관계를 연구 하였다. 본 연구에서는 48 낮은 출생 체중 (≤3.18 kg) 남자는 47 이상 출생 체중 (≥3.63 kg) 남성 4,903 μm의 2 (1354 μm의 2)와 4644 μm의 2 (1022 μm의 2)이었다 내가에게 myofibre 지역 (SD)를 입력 말은, 평균 유형 II myofibre 지역 반면 4046 μm의 2 (1166 μm의 2) 각각 낮은 및 높은 출생 체중의 남성 3,859 μm의 2 (1127 μm의 2)이었다.

그림 1
웨일 - Blakesley Conchotome 그림 1. 이미지. 6mm 물고 끝 웨일 - Blakesley의 conchotome 본 연구에 사용된다.5 / 53075fig1large.jpg "대상 ="_ 빈 ">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 2
웨일 - Blakesley Conchotome를 사용하여 그림 2. 근육 생검 기법. (A) 다리는 사타구니 주름에 노출되었다. 광근 lateralis을 통해 조직 검사 영역은, 머리의 면도 리도카인 침투 및 살균 세정, 표시되었다. 생검 영역을 분리 하였다. 피부 위에 놓인 끈 다음 크기 (11) 메스로 구멍이 있었다. (B) conchotome은 메스로 만든 근육을 절제 90 °를 회전 트랙에 삽입했다. CD. 5 -. 10 mm의 상처가 steri - 스트립 폐쇄 (이전 22 발표) 입고 된 LAR을 보려면 여기를 클릭하십시오이 그림의 게르 버전입니다.

그림 3
그림 3. Steri - 스트립 응용 프로그램. steri- 스트립은 작은 절개에 평행하게 적용됩니다. 이 방법은 치료의 좋은 비율과 관련된다 일반적으로 일주일 이내에. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 4
광근의 Lateralis 그림 4. 근육 생검. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

중간 (분위 범위 [IQR])
절차 중 7 (1-34)
어느 날 게시물 절차 4 (0-16)
세븐 일 후 절차 1 (0-4)
매일 활동 재개 N (%)
일일 후 60 (65 %)
이일 후 26 (28 %)
이상 이일 7 (7 %)

표 1. 통증 시각 아날로그 척도 (VAS) 점수와 하트 퍼 드셔 감소증 연구에서 Conchotome 근육 생검 후 93 연구 참가자의 활동의 재개. '고통'에 - 통증 규모는 0mm에서 원거리100mm의 최대 - '나쁜 통증이 될 수 있습니다'. 참가자의 대부분은 일반적인 일일 활동 하루 후 절차를 재개.

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Discussion

참가자의 안전을 보장하고 효율적으로 근육 생검을 수행하기 위해,이 프로토콜 내의 중요한 단계에 주목하는 것이 중요하다.

참가자들은 조심스럽게 출혈 가난한 상처 치유 등의 합병증을 방지하기 위해 제외 기준을 고려하여 선택해야합니다. 절차 전반에 걸쳐 엄격한 무균 필수적이다. 올바른 기술을 적용, 참가자의 편안함을 보장 참가자의 조직에 불필요한 외상을 최소화하고 분석을위한 충분한 샘플 수율을 수 있습니다. 때때로, 그 참가자가 과도한 피하 지방 조직을 보유하고, 특히 근육 시료를 수득하기가 어려울 수있다. 과도한 출혈도 절차를 진행하기로 결정이 이루어해야하는 경우 참가자의 신중한 선택 후 발생할 수 있습니다. 최대 5 분 동안 상처 부위에 직접 압력이 지혈을 촉진 멍을 최소화 할 필요가있다. 출혈을 최소화하기위한 또 다른 방법이다로컬 혈관 수축의 원인이됩니다 에피네프린과 리도카인을 사용합니다. 그러나, 에피네프린을 사용해야합니다 이후 분석과주의를 방해 할 수 있습니다. 이 절차를 수행하는 동안 에피네프린을 사용하지 않는 저자의 기본 설정입니다.

다중 분석 현미경 화상 분석, 조직 화학 및 분자 분석 방법의 진보가 주어 근육 조직에서 수행 될 수있다. 이러한 형태의 근육 등을 평가 등., 섬유 조성물, 섬유 단면적, 혈관염, 단 섬유 수축 활성 RNA 분석, 단백질뿐만 아니라 효소 활성 23,24,25,19,26,27. 통상적 근병증의 임상 진단 과정에서 사용 된 사용하지만, 근육 생검은 점점 연구에서 수행된다. 예를 들어, 이전의 모폴로지 근육 발달에 영향 낮은 출생 체중과 근육 감소증 (19) 사이의 연결을 설명 할 수 있음을 보여 주었다. 이 기술, 미의 잠재적 한계다른 반 열린 기법 LAR은 형태, 즉, 근육 섬유 유형은 전체 근육 그룹의 대표가되지 않을 수도있는 위치들에 한정되는 것을 포함한다.

웨일 Blakesley의 conchotome와 근육 생검이 가능하고 허용 절차입니다. 이 절차는 버그 스트롬 다른 생검 방법에 대안적인 방법을 제공한다. 마스터하기 쉬운 및 분석을위한 좋은 샘플 수율을 제공합니다. 합병증이 낮고 불편 상술 엄격한 무균 상태로 유지 포스트 생검 케어 광범위한 통보가 주어진 순서로 표준화 기술을 사용하여 수행 될 때 최소로 유지.

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
Weil-Blakesley conchotome Gebrüder Zepf Medizintechnik, Dürbheim, Germany None 6 mm biting tip
5 ml 2% lidocaine Generic use None One 5 ml vial should suffice for adequate anaesthesia
Alcohol swab Generic use None
5 ml syringe Generic use None
25 G and 23 G sterile needles Generic use None
Sterile scalpel size 11 Generic use None
Sterile gauze squares Generic use None
Sodium chloride 0.9% 10 ml Fannin 1122/002/001
Steri-Drape™ Small Drape with Adhesive Aperture 3M 1020
ChloraPrep 2% w/v /70% v/v cutaneous solution  CareFusion 270400 Two
Steri-Strip™ 1/4 inch x 3 inch Reinforced Adhesive Skin Closures 3M R1541
PRIMAPORE sterile dressing 15 cm x 8 cm Smith & 
Nephew
66000318
Cotton crepe bandage Hospicrepe 233 7,5 cm x 4,5 m Hartmann 915562
Flexible cohesive bandage Co-Plus LF BSN medical 2904565
Disposable absorbent sheet Generic use None
Micropore or transpore tape Generic use None
Sterile gown with sterile paper towels Generic use None
Sterile gloves Generic use None

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References

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Comments

1 Comment

  1. Hi. Nice video. It looks like you inject intra-muscular anesthetics - one comment on that is the effects on both morphology and inflammatory markers such as cytokines. We have repeatedly observed these disturbances and recommend only subcutaneous anesthetics. Best regard, Christer Malm, Umeå University, Sweden.

    Reply
    Posted by: Christer M.
    March 8, 2016 - 3:10 AM

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