Karakterisering van Leukocyte bloedplaatjes Rich fibrine, A Novel Biomateriaal

Bioengineering

Your institution must subscribe to JoVE's Bioengineering section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Madurantakam, P., Yoganarasimha, S., Hasan, F. K. Characterization of Leukocyte-platelet Rich Fibrin, A Novel Biomaterial. J. Vis. Exp. (103), e53221, doi:10.3791/53221 (2015).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Protocol

Alle bloed-tekening procedures moeten worden uitgevoerd door erkende en gecertificeerde professionals. Gebruik van menselijke onderwerpen voor onderzoek betreft de goedkeuring van de Institutional Review Board of een andere bevoegde autoriteit. Speciale voorzorgsmaatregelen ten aanzien van informed consent en het beschermen deelnemer identificatie moeten worden gevolgd. Alle in dit protocol vermelde experimenten betrekken afhandeling van menselijk bloed en / of bloedproducten en de juiste persoonlijke beschermingsmiddelen moeten worden gedragen ten alle tijden. Het afval moet worden beschouwd als biologisch en afgevoerd volgens de voorschriften.

1. Venapunctie

  1. Identificeren van de patiënt / deelnemer en bevestig met bestaande records. Verklaren de studie in detail en krijg een informed consent.
  2. Hebben een lade ingesteld voor individuele patiënt met buizen aangegeven op een vlakke stabiele ondergrond.
  3. Verklaren de procedure en maken de patiënt zitting comfortabel met de arm ondersteund. Informeer de patiënt dat hij of she zal een klein snuifje voelen en moet nog steeds de hele procedure te blijven.
  4. Bevestig de naald op de adapter.
  5. Handen wassen en handschoenen dragen.
  6. Bereid de antecubitale fossa voor venapunctie door reiniging met 70% isopropylalcohol in concentrische cirkels van het centrum naar buiten. Laat de plaats aan de lucht drogen gedurende 30 seconden.
  7. Identificeer de juiste ader door palpatie.
  8. Breng de tourniquet 3-4 hierboven de prikplaats om ervoor te zorgen dat het niet te strak (terwijl nog steeds het gevoel van de radiale pols).
  9. Voer venapunctie door het inbrengen van de schuine kant van de naald 15-30 graden om de huid in één beweging. Duw de bloedafname door de naald en het verzamelen van 9 ml volbloed.
  10. Verwijder de tourniquet. Haal de buis uit de naald.
  11. Trek de naald en het gaas plein van toepassing op de prikplaats voorafgaand aan de naald te verwijderen. Gooi de naald op een geschikte biohazard container.
  12. Vraag de patiënt te handhaven prEssure op de prikplaats.
  13. Label de buizen
  14. Controleer de prikplaats om zeker te bloeden is gestopt.
  15. Solliciteer pleister of tape over het gaas plein, vragen of de patiënt zich voelt goed (geen pijn, zwelling of een licht gevoel in het hoofd)
  16. Dank de patiënt / deelnemer vóór lozing.

2. L-PRF Bereiding

  1. Onmiddellijk na veneuze bloedafname in het rood-bedekte droge glazen buis, plaats het in de centrifuge.
  2. Centrifugeren bij 400 xg gedurende 12 min bij RT na het plaatsen van een passend tegenwicht.
  3. Verwijder de buis aan het einde van de cyclus. Let op de drie lagen: bloedplaatjes-arm plasma (PPP), bloedplaatjes-rijk fibrine (L-PRF) en RBC basis (figuur 1).
  4. Zuig het PPP met een pipet. Met behulp van een pincet trek de L-PRF out en plaats het in een steriele, geperforeerde metalen gaas.
  5. Met behulp van chirurgische scalpel, schraap het grootste deel van RBC laag zorgvuldig verlaten van de buffy vacht intact.
  6. Zachtjes comprimeren de L-PRF stolsel (met behulp van de steriele metalen plaat, geschatte gewicht 225 g) gedurende 30 sec. Bloedplaatjes arm plasma wordt uitgeperst.
  7. Verwijder de plaat en til de L-PRF membraan. De L-PRF membraan is gereed voor gebruik in proeven 12.

3. Eenassige Trekproeven

  1. Plaats L-PRF membranen (n = 6) op een filter papier voor gebruiksgemak en punch in "hond botten" met behulp van op maat gemaakte metalen sterft (2,75 mm breed op het smalste punt met een spoorbreedte lengte van 7,5 mm).
  2. Meet de dikte van elk monster op drie plaatsen en neem het gemiddelde.
  3. Voorzichtig grijpen de L-PRF membraan in het midden van de kaak greep van het uniaxiale testsysteem.
  4. Scheur de filer papier steun aan de L-PRF membraan bloot.
  5. Programma het instrument zodat de beweegbare kop werkt met een constante snelheid (10,0 mm / min) en start de proef wanneer de L-PRF nog nat.
  6. Noteer de elastische modulus, energie te breken, en spanning bij breuk van de software bij de eenassige testsysteem. Deze waarden worden automatisch berekend en zonder de gebruiker gedefinieerde invoer vereist. Zie figuur 3.

4. Hechting Retention Strength

  1. Plaats L-PRF membranen (n = 3) op een filterpapier voor gemakkelijke hantering en rechthoekig gesneden monsters meten (10 mm x 25 mm) met een chirurgische scalpel.
  2. Meet de dikte van elk monster (gemiddeld 3).
  3. Voeg een gaatje in het midden van het monster met de roestvrijstalen orthodontische ligatuurdraad (220 pm in diameter).
  4. Leid de ligatuur draad door de pinhole om een ​​lus te vormen en bevestig deze aan de trekbank. Plaats de rand van de L-PRF membraan naar de onderkaak handgreep 13.
  5. Programmeer het instrument zodat de beweegbare kop werkt met een constante snelheid (10 mm / min) en starthet experiment.
  6. Noteer de elastische modulus, energie te breken, en spanning bij breuk van de software bij de eenassige testsysteem. Deze waarden worden automatisch berekend en zonder de gebruiker gedefinieerde invoer vereist. Zie figuur 3.

5. morfologische Onderzoek

  1. Bereid de L-PRF monsters voor SEM onderzoek met behulp van een 10 mm huid biopsie punch en leg ze in een 24-well plaat.
  2. Was de monsters met PBS en bevestig met 2,5% glutaaraldehyde (in PBS) gedurende 20 min.
  3. Uitdrogen de monsters door onderdompeling in achtereenvolgens toenemende concentraties aan ethanol (50%, 70%, 80%, 90% en 100%) gedurende 5 minuten elk.
  4. Behandelen met 0,5 ml 100% HMDS (hexamethyldisilazaan) gedurende 5 min. Beluchten O / N overtollige HMDS 14 te verwijderen.
  5. Mount samples op stompjes met behulp van een dubbelzijdige tape, sputter-coat platina voor 70 sec en te onderzoeken in een scanning elektronenmicroscoop werkt bij een accelking spanning van 20 kV (of juiste instelling).

6. Genipin verknoping van L-PRF, trypsine Susceptibility en Ninhydrin Assay

  1. Om genipin verknoopte L-PRF bereiden spoelen met PBS en membranen geniet in 4 ml 1% genipin-oplossing (in 70% ethanol) gedurende 48 uur. Spoelen met PBS voorafgaand aan experimenten om het overtollige genipin 15, 16 verwijderen.
  2. Beoordeel de stabiliteit van genipin verknoping van L-PRF door zijn weerstand tegen afbraak door trypsine. Plaats L-PRF membraan (n = 3) en genipin verknoopte L-PRF in 500 ui 0,01% trypsine en geïncubeerd bij 37 ° C gedurende 3 dagen bij een dagelijkse verandering van trypsine.
    1. Weeg monsters op dag 1 vóór de blootstelling en op dag 3. Het aantal start enzym en eindgewicht staat enzymatische afbraak 17.
  3. Kwantificeren hoeveelheid verknoping in genipin behandelde L-PRF (G-PRF) van ninhydrine assay. Maak eerst de standaard curve gebruik glycine (1 mM-0,031 mM) curve de verhouding tussen vrije aminozuurconcentratie (FAA) en absorptie stellen.
    1. Heat PRF monsters met 1 ml 2% (w / v) ninhydrine gedurende 15 min bij 100 ° C.
    2. Laat de oplossing afkoelen tot kamertemperatuur en voeg 1,5 ml van 50% ethanol.
    3. Analyseer de absorptie bij 570 nm met een geschikte spectrofotometer.
    4. Bepaal verknoping percentage met de onderstaande formule 15

Vergelijking 1

7. MTS celproliferatietest

  1. Groei MC3T3 (muis calvarial preosteoblasten) in Minimum Essential Medium -alfa modificatie (aMEM) in T-75 kolven totdat een 80% confluente monolaag wordt verkregen.
  2. Bereid verse, steriele L-PRF membraan (open de L-PRF buis in de celkweek kap) en breng het membraan naar een nieuwe cel cultuur schotel.
  3. Zuig media uit de kolf en spoel de monolaag met PBS, voeg 5 ml 0,05% trypsine en plaats de kolf in de 37 ° C incubator gedurende 5 min, pipet de inhoud van de kolf in een centrifugebuis en centrifugeer bij 400 xg gedurende 5 min.
  4. Schenk de supernatant voorzichtig tikken de buis naar de celpellet breken en resuspendeer met 4 ml vers α MEM, afzien een mengsel van celsuspensie (50 ui) en trypan blauw (50 ul) in de hemocytometer en tel het aantal cellen
  5. Zaad 4x10 5 cellen in 10 mm glazen kloneringsringen bovenop L-PRF membranen aan de cellen in de membranen behouden (ringen kan na 24 uur worden verwijderd).
  6. Op dag 4, spoel constructen met PBS driemaal gedurende 10 min.
  7. Voeg 1 ml serumvrij medium en 200 pl MTS reagens aan elk putje en incubeer gedurende 2 uur bij 37 ° C.
  8. Meet absorptie van 200 ul fracties bij 490 nm.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

De scanning elektronenmicroscoop beeld van de L-PRF stolsel in verschillende secties (bovenste, middelste en onderste) laag is geïllustreerd in figuur 2. Zoals te zien, wordt het bovengedeelte voornamelijk uit fibrine netwerk samengesteld zonder cellen. De middelste laag is verrijkt met plaatjes met bewijs van hun activering en degranulatie. De onderste laag een mengsel van leukocyten en rode bloedcellen ingevangen in een fibrinematrix.

De mechanische eigenschappen werden geëvalueerd in twee modi: uniaxiale trekproef en sutureretentie sterktetest. De resultaten tonen visco-elastisch gedrag van L-PRF. Hoewel de elastische modulus laag is (0,47 MPa), het membraan is moeilijk (energie, 5 N · mm breken) en kan ondergaan aanzienlijke vervorming (217%, figuur 3). Gegevens van sutureretentie testen, een indicator van het vermogen van het membraan te worden gehecht aan de weefsels, suggereerde een aanzienlijk taaind vervormbaar materiaal (modulus-0,2 MPa, rek-140% en energie tot breuk-3,2 N.mm) in L-PRF (figuur 4).

Een van de beperkingen van fibrine producten in de regeneratieve geneeskunde is zijn korte biologische leven. Gemaakt van endogeen fibrine, L-PRF is gevoelig voor afbraak enzym en ondergaat fibrinolyse. Om de weerstand van L-PRF evalueren enzym gemedieerde afbraak werd vers L-PRF onderworpen aan trypsinebehandeling (0,01%) en geïncubeerd bij 37 oC We waargenomen volledige afbraak van L-PRF binnen drie dagen. Genipin verknoping van L-PRF membranen afbraak verlaagd met bijna 60% (figuur 5).

Het vermogen van L-PRF membranen om de celgroei te ondersteunen werd geëvalueerd door het kweken muis calvarial osteoblasten op verknoopte en niet verknoopte membranen. Niet-verknoopte stolsels ondergaan afbraak tot verschillende niveaus tijdens de genipin vernette vliezen behouden hun structuur en ondersteund cell groei (figuur 6).

Figuur 1
Figuur 1. Stappen bij het ​​genereren van L-PRF. (A) Na centrifugatie van volbloed in een glazen buis, worden drie lagen zichtbaar. (B) Na decanteren van de PPP, wordt het L-PRF wordt verwijderd met een steriel pincet . (C) De rode bloedcellen base wordt afgeschraapt met een scalpel en legde op een geperforeerde metalen plaat (D). Na de lichte druk, wordt de PPP uitgeknepen en een stevige L-PRF membraan wordt gevormd. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figuur 2
SEM beeld van verschillende lagen van verse L-PRF (A) staat voor de fibrine-rijke laag,. (B) is een zone verrijkt plaatjes met verschillende mate van activatie, (C) is de bufferlaag met talloze leukocyten en (D) is de rode bloedcel basis. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figuur 3
Figuur 3. Spanning-rek krommen na mechanische belasting van L-PRF in uniaxiale treksterkte test stand (A) en retentie hechting sterkte (B). De beladingspatroon van elk monster wordt weergegeven in verschillende kleuren. De eenassige trekproeven data (A) wijzen op een lage modulus, een grote elastische vervorming en een snelle mislukking. Bij uitzetting van een hechting (B), L-PRF is een membraan dat is moeilijk (oppervlakte onder de curve) en uitzetbaar. Goede clustering van gegevens blijkt minimale variatie tussen de monsters. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figuur 4
Figuur 4. Foto van werkelijke falen hechtdraad behoud van sterkte testen. Een 220 um dikke roestvast stalen orthodontische ligatuurdraad werd door het midden van L-PRF en gebonden aan de bovenkaak lid van de trekbank. Het andere uiteinde is bevestigd aan het lagere grip en gestrekt met een constante snelheid. Merk de rek van het membraan en de weerstand tegen scheuren, wat suggereert uitstekende veerkracht van L-PRF.OM / files / ftp_upload / 53.221 / 53221fig4large.jpg "target =" _ blank "> Klik hier om een ​​grotere versie van deze figuur te bekijken.

Figuur 5
Figuur 5. Afbraak van L-PRF membranen na incubatie in 0,01% trypsine. All L-PRF membranen volledig gedesintegreerd in trypsine binnen 3 dagen, terwijl genipin-verknoopte L-PRF was 60% stabieler. Hieruit blijkt dat de chemische verknoping een haalbare strategie om de levensduur van L-PRF membranen te verbeteren kan bij plaatsing in vivo.

Figuur 6
Figuur 6. Effect van L-PRF crosslinking op cellevensvatbaarheid. Representatieve beelden van 4 dagen kweek van MC3T3 cellen op onverknoopte L-PRF (A), genipin verknoopt L-PRF (B) eennd weefselkweek kunststof (C). Onverknoopte L-PRF afgebroken in kweek variabele omvang en vertoonden cel activiteit vergelijkbaar met plastic. Genipin verknoopt L-PRF behouden hun structuur en ondersteund robuuste overleving van de cel. Aan de rechterkant is gekwantificeerde gegevens (+ SD) van onafhankelijke experimenten met drie herhalingen. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Autologe bloedplaatjes concentraten zijn veelbelovend op het gebied van regeneratieve geneeskunde 18 vanwege de overvloed van de groeifactoren. Echter, deze voorbereidingen misten vaak een gedefinieerde structuur die chirurgische manipulatie erg moeilijk maakt. Vaak worden de suspensies en gels niet effectief vastgehouden op de plaats van afgifte, wat resulteert in onvoorspelbare resultaten. L-PRF betekent een enorme vooruitgang in de ontwikkeling van bloedplaatjes concentraten doordat het in wezen een vaste fibrine membraan met ingesloten bloedplaatjes. Deze vaste membranen bezitten uitstekende rijeigenschappen, en kan veilig worden gehecht aan een anatomisch gewenste plaats tijdens open ingrepen. Echter, de fysische en biologische eigenschappen zijn relatief onbekend.

De L-PRF consequent vormen wanneer bovenstaande stappen strikt te volgen (figuur 1). Een van de belangrijkste overwegingen bij het genereren van een goede L-PRF membraan de time vertraging tussen bloedafname en centrifugeren. Het succes van L-PRF techniek volledig afhankelijk van de snelheid van bloedafname en onmiddellijke overgang naar de centrifuge 19, meestal binnen een minuut. Het is onmogelijk om een ​​goed gestructureerde L-PRF stolsel (met specifieke celinhoud, matrix architectuur en groeifactor afgifteprofiel) genereren wanneer bloed oogsten wordt verlengd en niet homogeen; een kleine onsamenhangende, brokkelige massa van fibrine met onbekende inhoud in plaats daarvan gevormd.

Het is aanvaard dat mechanobiologische interacties tussen cellen en extracellulaire matrix (ECM) een kritische invloed op alle aspecten van celgedrag zoals migratie, proliferatie en differentiatie 20,21. L-PRF, een uniek soort bloedstolsel wordt gevormd onder specifieke omstandigheden en bestaat uit complexe vertakt netwerk van fibrine. L-PRF functioneert als een voorlopige ECM die wordt omgedraaid in functionele weefsel tijdens de genezing. Wordt onderworpen aan mechanische krachten succesvolle genezing uitkomsten afhankelijk van de structurele integriteit van L-PRF en dus ophelderen van de fysische eigenschappen van belang. We voerden eenassige treksterkte retentie hechting testen (het falen kenmerken te identificeren) op verse L-PRF testen (de intrinsieke eigenschappen van het materiaal te identificeren) en. In tegenstelling tot PRP gel of geronnen bloed, dat niet beschikt over een bepaalde structuren, L-PRF lijkt dichte bindweefsel met superieure rijeigenschappen. Wij rapporteren een elastische modulus van 0.470 MPa (SD = 0,107) voor het L-PRF membranen en rek twee keer zijn oorspronkelijke lengte voor falen (stam van 215%). Deze gegevens overeenkomen met gepubliceerde literatuur 22,23 die lage stijfheid (1-10 MPa) en hoge spanning (tot 150%) rapporteerde voordat breken. Het verschil in de waarden als gevolg van het gebruik van fibrinenetwerk vergelijking met het gebruik van AFM analyse van afzonderlijke fibrine vezels in de bovengenoemde studies.

Sterkte sutureretentie een chirurgischbelangrijke parameter van transplantaatmaterialen en wordt gedefinieerd als de kracht die nodig is om een ​​hechting te trekken van het transplantaat of kan de wand van het transplantaat te mislukken. Onze experimenten gebruikt straight-across procedure (zoals gedefinieerd door ANSI 24). De kracht die nodig is om het trekken van de ligatuurdraad via de L-PRF van 3,23 N.mm (SD = 0,329). Algemeen vonden we de L-PRF mechanisch taaie, kunnen dragen belastingen en het vermogen om twee keer strekken zoveel aan spanning en behoudt hechtingen heel goed (aanzienlijk vervormd alvorens te scheuren).

Het gebrek aan stabiliteit en structurele integriteit van L-PRF in biologische omgevingen is een belangrijke beperking in het gebruik in weefselmanipulatie. Wij hebben geprobeerd om dit probleem aan te pakken door chemisch verknopen van L-PRF behulp genipin. Unlike glutaaraldehyde die wordt geassocieerd met toxiciteit genipin is een natuurlijk voorkomend biologisch afbreekbare molecuul met lage cytotoxiciteit. Na genipin behandeling, de membranen aanzienlijk stabiel in trypsine en supported celproliferatie over 4 dagen. Slechts 20% van L-PRF werd verknoopt met genipin (bepaald met ninhydrine-assay). Deze gegevens suggereren dat terwijl de chemische verknoping is een haalbare strategie, moeten alternatieven worden onderzocht.

Op basis van deze bevindingen is het duidelijk dat L-PRF is een nieuw biologisch materiaal met unieke eigenschappen: voorspelbare bereiding van autoloog bloed, eenvoud van protocol gedefinieerde architectuur, indrukwekkende mechanische eigenschappen en de overvloed van groeifactoren uit geactiveerde bloedplaatjes. Het bloed stollen onder fysiologische omstandigheden zonder blootstelling aan anticoagulantia exogene trombine en calciumchloride. Al deze eigenschappen maken L-PRF veelbelovende biomateriaal voor toepassingen in regeneratieve geneeskunde.

Een van de klinische problemen te behandelen bij de toepassing van L-PRF is de heterogeniteit in de kwaliteit van bloedplaatjes en bloedbestanddelen. Op dit moment weinig begrepen overL-PRF gegenereerd uit patiënten met stollingsstoornissen of patiënten die medicijnen die de bloedstolling beïnvloeden (heparine, warfarine of bloedplaatjes remmers). Antwoorden op deze vragen zal ongetwijfeld verbeteren van ons begrip van genezing, alsmede bij te dragen tot het gebied van gepersonaliseerde geneeskunde te bevorderen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

De auteurs hebben niets te onthullen en bevestigen dat er geen bekende belangenconflicten in verband met deze publicatie.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Needle 19G BD 305186
Needle Disposal Container Fisherbrand 14-827-122
Red-Topped Glass Collection Tube BD 8020129
Gauze Pads Tyco 5750
Bandage Johnson & Johnson 5005989
Surshield Terumo SV*S19BL Safety winged infusion set
Blood Collection Assembly BD 303380
Tourniquets BD 367203
Brand Luer Adapter Vacutainer L42179
Intra-Spin System  Intra-Lock International ISS110 Centrifuge and Xpression L-PRF FabricationKit 
Pipettes (Serological & Micro) Corning
Scalpel Exelint 29552
MTS Bionix 200 MTS Systems Corporation Material testing systems
MTS Test Works 4 MTS Systems Corporation
Whatman Filter Paper Whatman 1004 070
SS Orthodontic ligature wire Patterson Dental 628-4228
200 Proof Ethanol Koptec V1001
Hexamethyldisilazane (HMDS) Aldrich 440191
Aluminium Mounting Stubs Ted Pella 16324
Double Sided Carbon Tape PELCO Tabs 16084-1
Scanning Electron Microscope JEOL LV 5610
Trypsin HyClone SH30042.01
Cell Culture Incubator Thermo Fisher Scientific Inc 51026282
Antibiotic-Antimicotic Gibco 15240-062
Genipin Wako 078-03021
Cell Culture Media Gibco 12000-022 Minimum Essential Medium-Alpha
MTS Reagent Promega G1118
PMS Reagent Sigma P9625
Spectrophotometer BioTek Epoch Spectrophotometer
10mm Glass Cloning Rings Corning 3166-10
T-75 Flask Corning 430641
DPBS Corning 55-031-PB
Ninhydrin 98% Aldrich 454044
24 Well Plate Corning 3987
Biopsy Punch Acu Punch P1025
Digital Micrometer Pittsburgh 68305
Glutaraldehyde Sigma G6257
12 Well Plate Corning 3336
96 Well Plate Corning 3596

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Marx, R. E., et al. Platelet-rich plasma Growth factor enhancement for bone grafts. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 85, (6), 638-646 (1998).
  2. Rodriguez, I. A., Growney Kalaf, E. A., Bowlin, G. L., Sell, S. A. Platelet-rich plasma in bone regeneration: Engineering the delivery for improved clinical efficacy. BioMed Res In. 2014, (2014).
  3. Del Corso, M., et al. Current Knowledge and Perspectives for the Use of Platelet-Rich Plasma (PRP) and Platelet-Rich Fibrin (PRF). in Oral and Maxillofacial Surgery Part 1: Periodontal and Dentoalveolar Surgery. Curr Pharm Biotechno. 13, (7), 1207-1230 (2012).
  4. Mazzucco, L., Balbo, V., Cattana, E., Guaschino, R., Borzini, P. Not every PRP-gel is born equal Evaluation of growth factor availability for tissues through four PRP-gel preparations: Fibrinet, RegenPRP-Kit, Plateltex and one manual procedure. Vox San. 97, (2), 110-118 (2009).
  5. Fernández-Barbero, J. E., et al. Flow cytometric and morphological characterization of platelet-rich plasma gel. Clin Oral Implants Re. 17, (6), 687-693 (2006).
  6. Li, Z., Guan, J. Hydrogels for cardiac tissue engineering. Polymer. 3, (2), 740-761 (2011).
  7. Zhu, J., Cai, B., Ma, Q., Chen, F., Wu, W. Cell bricks-enriched platelet-rich plasma gel for injectable cartilage engineering – an in vivo experiment in nude mice. J Tissue Eng Regen Med. 7, (10), 819-830 (2013).
  8. Dohan, D. M., et al. Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part I: technological concepts and evolution. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101, (3), e37-e44 (2006).
  9. Dohan, D. M., et al. Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part II: platelet-related biologic features. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101, (3), e45-e50 (2006).
  10. Choukroun, J., et al. Platelet-rich fibrin (PRF): a second-generation platelet concentrate. Part V: histologic evaluations of PRF effects on bone allograft maturation in sinus lift. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 101, (3), 299-303 (2006).
  11. Dohan Ehrenfest, D. M., Bielecki, T., et al. Do the Fibrin Architecture and Leukocyte Content Influence the Growth Factor Release of Platelet Concentrates? An Evidence-based Answer Comparing a Pure Platelet-Rich Plasma (P-PRP) Gel and a Leukocyte- and Platelet-Rich Fibrin (L-PRF). Curr Pharma Biotechno. 13, (7), 1145-1152 (2012).
  12. Dohan Ehrenfest, D. M., Rasmusson, L., Albrektsson, T. Classification of platelet concentrates: from pure platelet-rich plasma (P-PRP) to leucocyte- and platelet-rich fibrin (L-PRF). Trends Biotechno. 27, (3), 158-167 (2009).
  13. Mine, Y., et al. Suture Retention Strength of Expanded Polytetrafluoroethylene (ePTFE) Graft. Acta Med Okayam. 64, (2), 121-128 (2010).
  14. Braet, F., De Zanger, R., Wisse, E. Drying cells for SEM , AFM and TEM by hexamethyldisilazane: a study on hepatic endothelial cells. J Micros. 186, (1), 84-87 (1997).
  15. Yuan, Y., et al. The effect of cross-linking of chitosan microspheres with genipin on protein release. Carbohydr Poly. 68, (3), 561-567 (2007).
  16. Sell, S. A., et al. Cross-linking methods of electrospun fibrinogen scaffolds for tissue engineering applications. Biomed Mater. 3, (4), (2008).
  17. Gorczyca, G., et al. Preparation and characterization of genipin cross-linked porous chitosan-collagen-gelatin scaffolds using chitosan-CO2 solution. Carbohydr Poly. 102, 901-911 (2014).
  18. Rozman, P., Semenic, D. Chapter 15. The Role of Platelet Gel in Regenerative Medicine. Advances In Regenerative Medicine. Wislet-Gendebien, S. abine In Tech. 319-349 (2011).
  19. Dohan Ehrenfest,, Lemo, D. M., Jimbo, N. Selecting a relevant animal model for testing the in vivo effects of Choukroun’s platelet-rich fibrin (PRF): Rabbit tricks and traps. Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 110, (4), 413-416 (2010).
  20. Guilak, F., Baaijens, F. P. Functional tissue engineering: Ten more years of progress. J Biomec. 47, (9), 1931-1932 (2014).
  21. Guilak, F., Butler, D. L., Goldstein, S. A., Baaijens, F. P. Biomechanics and mechanobiology in functional tissue engineering. J Biomec. 47, (9), 1933-1940 (2014).
  22. Collet, J. P., Shuman, H., Ledger, R. E., Lee, S. The elasticity of an individual fibrin fiber in a clot. Proc Natl Acad Sci. 102, (26), 9133-9137 (2005).
  23. Liu, W., et al. Fibrin fibers have extraordinary extensibility and elasticity. Science. 313, (5787), 634 (2006).
  24. American National Standard. Chapter 8: Test methods for vascular prostheses. Association for the Advancement of Medica lnstrumentation Guidance document: Cardiovascular Implants - Tubular vascular prostheses. ANSI/AAMI/ISO. 33-34 (2001).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics