Een veelzijdige muizenmodel van Subcortical White Matter Stroke voor de Studie van axonale degeneratie en White Matter Neurobiologie

Medicine

Your institution must subscribe to JoVE's Medicine section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Nunez, S., Doroudchi, M. M., Gleichman, A. J., Ng, K. L., Llorente, I. L., Sozmen, E. G., Carmichael, S. T., Hinman, J. D. A Versatile Murine Model of Subcortical White Matter Stroke for the Study of Axonal Degeneration and White Matter Neurobiology. J. Vis. Exp. (109), e53404, doi:10.3791/53404 (2016).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Stroke invloed witte stof kan oplopen tot 25% van de klinische beroerte presentaties, gebeurt in stilte tegen tarieven die 5-10 keer groter kunnen zijn, en draagt ​​aanzienlijk bij aan de ontwikkeling van vasculaire dementie. Er zijn maar weinig modellen van focale witte stof beroerte bestaan ​​en dit gebrek aan geschikte modellen heeft inzicht in de neurobiologische mechanismen die betrokken zijn in blessuretijd respons en herstel na dit type van een beroerte belemmerd. De belangrijkste beperking van andere subcorticale beroerte modellen is dat ze het infarct tot de witte stof niet focaal beperken of zijn in de eerste plaats zijn gevalideerd in niet-muizen soorten. Dit beperkt de mogelijkheid om de grote verscheidenheid van murine onderzoeksinstrumenten toepassing op neurobiologie witte massa beroerte bestuderen. Hier presenteren we een methode voor de betrouwbare productie van een focale beroerte bij muizen witte stof met een lokale injectie van een irreversibele inhibitor eNOS. We hebben ook verschillende varianten te presenteren over de algemene protocol waaronder twee unieke stereotactischevariaties retrograde neuronale tracing, alsmede labeling vers weefsel dissectie en de mogelijke toepassingen van deze techniek uit te breiden. Deze variaties mogelijk voor meerdere benaderingen voor de neurobiologische effecten van deze gemeenschappelijke en onderbestudeert vorm van een beroerte te analyseren.

Protocol

Het gebruik van dieren in dit protocol is uitgevoerd in overeenstemming met de procedures die door de University of California Los Angeles Animal Care en gebruik Comite goedgekeurd.

Let op: Begin met het identificeren van de doelgroep muizen bevolking. In eerdere studies hebben alleen mannelijke wildtype C57 / Bl6 muizen gebruikt echter verschillende transgene of knockout muizen kunnen ook worden gebruikt. Merk op dat stereotactische coördinaten op basis van C57 / Bl6 anatomie. Aanbevolen wordt elke gebruiker aanvankelijk lokalisatie van de slag om witte stof controleren.

1. White Matter Stroke Inductie - Mediale Hoekige Benadering

  1. Eerst bereiden van een getrokken glazen pipet gebruikt 0,5 mm capillaire buis zodanig dat het distale diameter tussen 15-25 pm 11.
  2. Bereid een steriele 10 pl aliquot van L-Nio (N (5) - (1) -iminoethyl-L-ornithine HCl) en 27,4 mg / ml (130 pM) in steriele 0,9% normale zoutoplossing.
  3. Pre-vul de getrokken glazen pipetmet een klein volume L-Nio (2-5 ul) door het aanbrengen van de glazen pipet buis verbonden met een vacuümleiding. Leg de pipet plat op de bank top en steek de trok uiteinde in de L-Nio-oplossing.
    1. Onder vacuüm tot minstens 2 mm van de 0,5 mm gedeelte van de pipet wordt gevuld. Schakel de stofzuiger en de pipet te trekken. Leg het opzij totdat Step 1.12.
  4. Plaats de muis in een inductie kamer en induceren anesthesie van de muis met behulp van standaard 32% isofluraan stroomde door een verdamper (5 l / min ingeademd met 5 l / min zuurstof en 0,5 l / min N2) gedurende 1 min of tot diep verdoofd. Breng de muis een stereotactische inrichting voorzien van een stereotactische microscoop. Onderhoudsdiensten anesthesie via 32% isofluraan stroomde door een verdamper (2 l / min geïnhaleerd met 5 l / min zuurstof en 0,5 l / min N2) en een neuskegel. Controleer de diepte van de anesthesie met een teen knijpen.
  5. Stel de injectie arm 36 °.
  6. Affix getrokken glazen pipet houder aan het distale einde van een lage volume druk injectiesysteem en bevestig deze aan de injectie arm van de stereotactische setup.
  7. Coat snorharen van de verdoofde dier met vaseline en plaats kunsttranen zalf over beide ogen. Bereid een steriele chirurgische veld door een steriele doek over het hoofd van het dier met een 5-10 cm opening over de weg. Bereid een aspetic chirurgische oppervlak door het scheren van de vacht bovenop de schedel. Reinig de hoofdhuid met afwisselend betadine en 70% in alcohol gedrenkte doekjes.
  8. Maak een 1,5 cm middellijn hoofdhuid incisie met steriele fijne schaar om de schedel oppervlak bloot te leggen. Droog de schedel met een steriel wattenstaafje en met behulp van een stereotactische microscoop bij 1-3x vergroting, verwijder bovenliggende periostale weefsel met behulp van een steriele micro punt tool.
  9. Markeer de Bregma als referentiepunt met behulp van een fijne punt marker.
  10. Boor een 2 mm ellipitical craniotomy behulp van een steriele fijne stip chirurgische boor0; beginnend posterieur aan de Bregma en de uitbreiding naar voren net links van de middellijn. Verwijderen botfragmenten en bovenliggende zachte weefsel zodat de cerebrale cortex kan worden gevisualiseerd.
  11. Houd het chirurgische veld en corticale oppervlak vochtig door intermitterend aanbrengen van druppels steriele zoutoplossing.
  12. Kleef een getrokken glazen pipet om de injector arm van de stereotactische apparaat. Lijn het distale uiteinde van de pipet met de Bregma en nul de stereotactische coördinaten.
  13. Vooraf de pipet om de eerste anterior / posterior (A / P) en mediale / laterale (M / L) coördinaten in tabel 1.
  14. Vooraf de pipet om de corticale oppervlak en nul de dorsale / ventrale (D / V) meting.
  15. Passeren langzaam de pipet in de hersenen tot aan de eerste D / V coördineren tabel 1.
  16. Met behulp van een lage volume druk inspuitsysteem ingesteld op 20 psi gedurende 20 msec pulsen, injecteren 100 nl van L-Nio in de hersenen en wacht 5 min naar reflux te voorkomende pipet spoor.
    1. Gebruik een gekalibreerde dradenkruis in het oculair van de stereotactische microscoop en een vergroting van 3X.
    2. Dienovereenkomstig verplaatsen in totaal 0,100 mm 3 (lengte 0,5 mm in een 0,5 mm diameter pipet, overeenkomend met 100 nl) vanaf het getrokken glazen pipet voor elke reeks coördinaten. Door een reticule, meten en standaardiseren omdat elke ingesteld afhankelijk van de vergroting en gebruikte schalen.
    3. Voor nauwkeurige volumemeting bij elke injectie, naderen de schuine pipet met de microscoop vanaf de zijkant, zodat de lucht-vloeistof meniscus een sagittaal beeld. De meniscus moet in hetzelfde brandvlak van zowel de binnen- als buitenwand van de pipet.
  17. Langzaam trekken de pipet en herhaal stappen 1.13-1.16.3 bij de tweede en derde set coördinaten in Tabel 1.
  18. Na de laatste injectie, verwijder de pipet en plaats genoeg bot was om de craniotomie site te vullen. EENpproximate de randen van de wond en hoofdhuid binden dermale hechtmiddel.
  19. Injecteer 0,1 ml 0,5% Marcaine in de wondranden met een steriele 30 G naald te voorkomen dat plaatselijke pijn geassocieerd met de hoofdhuid incisie voorkomen.
  20. Keer terug het dier tot huisvesting en levering post-operatieve antibiotica (0,48 mg / ml co-trimoxazol, of 0,5 mg / ml Levofloxacin) in het drinkwater gedurende 5 dagen.

2. White Matter Stroke Inductie - posterior Hoekige Benadering

  1. Voer de stappen 1,1-1,12 als in de mediale schuine benadering protocol, behalve aanpassen van de injectie arm van de stereotactische setup tot 45 graden georiënteerd anterior naar posterior.
  2. Vooraf de pipet om de eerste A / P en M / L coördinaten in tabel 2.
  3. Compleet resterende stappen 1,14-1,20 als in de laterale schuine benadering protocol.

3. Retrograde neuronale Labeling

  1. Bereid een steriele 10pl aliquot van L-Nio bij 54,8 mg / ml in 0,9% normale zoutoplossing.
  2. Bereid een steriele hoeveelheid van 20% Fluororuby (of 20% gebiotinyleerde dextraan amine of 2% Fluorogold) in 0,9% normale zoutoplossing.
  3. Verdun samen 1: 1 voor eindconcentraties van 27,4 mg / ml L-Nio en 10% Fluororuby.
  4. Voer de slag protocol zoals hierboven beschreven in stappen 1,3-1,23.
  5. Visualiseer de native fluorescerende tracer in het weefsel sectie door perfusie fixatie, cryosectioning en microscopie zoals eerder beschreven 8.

4. Weefsel bewerken voor Immunofluorescentie

  1. Bij een geschikte post-slaginterval variërend van 3 uur tot 14 dagen na een beroerte, euthanaseren muizen via isofluraan overdosis of lokale IACUC goedgekeurde procedure.
  2. Open de borstholte met behulp van schuine schaar en plaats een 23 G vlinder naald in de linker hartkamer.
  3. Plaats een kleine snede in de rechterboezem met behulp van fijne schaar om een ​​uitstroom spoor voor de perfusiefluïdum mogelijk te maken.
  4. Transcardially perfuseren met 30-40 ml koude met fosfaat gebufferde zoutoplossing gevolgd door 30-40 ml koude 4% paraformaldehyde met een snelheid van 10 ml / min bij kamertemperatuur.
  5. Onthoofden de muis en verwijder de hersenen met behulp van steriele schaar om de schedel naar achteren te openen en dan verwijder voorzichtig de bovenliggende schedel met een spatel, zet de hersenen in koud 4% PFA gedurende 24 uur, en vervolgens over te dragen aan 30% sucrose in PBS gedurende 48 uur .
  6. Bereid veertig micron zwevende gedeelten met een cryostaat en voeren verwerking antilichaam zoals eerder beschreven 6-8. In deze studie, gebruikt u de volgende antilichamen: konijn anti-neurofilament 200 (1: 500 verdunning); konijn anti-vimentine (1: 500); geit anti-GFAP (1: 500); konijn anti-Iba-1 (1: 1000).

5. Weefsel bewerken voor eiwit of RNA Analyse

  1. Bij een geschikte post-slaginterval variërend van 3 uur tot 14 dagen na een beroerte, euthanaseren via isofluraan overdosis of lokale IACUC goedgekeurde procedure.
  2. onthoofden demuis en verwijder de hersenen met behulp van steriele schaar om de schedel naar achteren te openen en dan verwijder voorzichtig de bovenliggende schedel met een spatel.
  3. Plaats een steriele spatel 4 mm aan de voorzijde van de hersenen naar de olfactorische knobbel en optische zenuwen verbreken. Til de hersenen uit de calvarium en plaats in ijskoude dissectie buffer (1x Hank's Balanced Salt Solution, 25 mM HEPES-KOH, pH 7,4, 35 mM glucose, 4 mM natriumbicarbonaat en 0,01 mg / ml cyclohexamide).
  4. Met behulp van een brain blok en steriele nieuwe scheermesjes, voor te bereiden 2-3 mm platen met de beroerte en plaats in koud dissectie buffer.
  5. Onder een microscoop ontleden, identificeren van de witte stof onderliggende motorische cortex in de geïnjecteerde halfrond. Bij langere intervallen na een beroerte, kan de regio visueel worden geïdentificeerd door focale necrose en myeline bleekheid.
    Opmerking: Bij eerdere post-stroke tussenpozen injectie van L-Nio gemengd met 1 pi 10% Fast Green visuele identificatie van de slag kan toelaten (
  6. Onder begeleiding van een dissectie microscoop en met behulp van een frisse scalpel zorgvuldig ontleden de regio van witte stof die de slag, die door beide Fast Green etikettering of verlies weefsel. Verwijder bovenliggende cortex en onderliggend striatum wens.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Met behulp van het model gepresenteerd, kan de witte stof onderliggende voorpoot sensomotorische cortex betrouwbaar kan worden gericht. Dit chemisch geïnduceerde focale beroertemodel produceert axonale en myeline verlies astrocytose en microgliose (figuur 1), zoals typisch waargenomen in menselijke lacunaire infarcten. Via drie injecties, wordt een klinisch bruikbaar model vastgesteld met vroege stoornissen op motorische taken voorpoot 7 en een kleine maar significante deel van hersenweefsel ervaringen ischemie dat immunohistochemische, immunofluorescentie en biochemische technieken haalbaar en betrouwbaar ten kwantitatief. Op vroege tijdstippen (uren) na een beroerte inductie, kunnen veranderingen in axonale moleculaire organisatie worden gedetecteerd (figuur 2). Op 7 dagen is de slag zijn rijpe om een omschreven gebied van axonaal verlies (figuur 1a) voltooit. In onze handen, deze methode levert een brandpunt witte stof laesie approximadellijk 800 urn in horizontale doorsnede en zich ongeveer 1 mm langs de anterior-posterior as van het corpus callosum. Met 7 dagen, de gemiddelde totale grootte infarct is ongeveer 0.200 mm 3 en zal een elliptische vorm hebben. We hebben ongeveer 10% variabiliteit waargenomen bij streekgrootte zowel tussen dieren en tussen secties, afhankelijk van waar in de ellips de sectie optreedt. Verdere groei in de omvang van het infarct is zelden meer dan 7 dagen.

De toevoeging van een gelijktijdige injectie van dextran amine resulteert in significante neuronale labeling in laag 5 en laag 6 neuronale cellichamen die axonen uitgevoerd, dat via de regio slag (figuur 3) hebben. Bovenliggende corticale neuronen die niet door de sham aspecten van de procedure (passage van fijne naald) beschadigd ondergaan distale axonale beschadiging en kunnen worden geïdentificeerd door het opnemen van een tracer met de L-Nio preparaat. Deze aanpak was gebruik d om dynamische veranderingen in de axon eerste segment te tonen na een beroerte 8.

Terwijl de kleine afmeting van het gebied van weefsel waarop de slag beperkt het gebruik van andere gebruikelijke technieken zoals 2,3,5-trifenyltetrazoliumchloride (TTC) kleuring, kan de witte stof slag regio geïdentificeerd in vers weefsel. De toevoeging van een gemeenschappelijk kleurstof zoals Fast Green produceert een identificeerbare weefselgebied dat onder een stereomicroscoop worden ontleed (figuur 4). Zodra ontleed dit weefsel kan worden gebruikt voor eiwitanalyse met western blot en immunoprecipitatie of RNA isolatie en analyse (Figuur 4C). Door het gebruik van verschillende transgene muis lijnen, kan een verscheidenheid aan innovatieve benaderingen worden gebruikt om de neurobiologie na focale witte stof beroerte met inbegrip van lot van de cel mapping studies en laser capture microdissectie (Figuur 4C) te bestuderen.

tent "fo: keep-together.within-page =" 1 "> Figuur 1
Figuur 1:. Focal White Matter Stroke met behulp van zowel Medial en Posterior Hoekige Approaches Immunofluorescente labeling voor neurofilaments (A, rood) toont de mate van axonaal verlies zeven dagen na een beroerte met behulp van de mediale aanpak. Met het achterste schuine benadering wordt de witte stof slag lesie gericht boven de laterale ventrikel (B, C) ​​en toont intense microglia (B) en astrocyten reactiviteit (C). Twee astrocyt intermediaire filament markers, vimentine (rood) en glia fibrillair zuur eiwit (GFAP, groen), beide bekend veran witte massa (vezelige) astrocyten na beroerte (C). Schaal bars = 500 pm. Klik hier om een grotere ver te bekijkending van dit cijfer.

figuur 2
Figuur 2:. White Matter Stroke Alters Axonale microdomein Organisatie Binnen 3 uur van de witte stof beroerte inductie, axonale microdomein organisatie op het knooppunt, gekenmerkt door beta-IV spectrin (rood) en aan de paranode, gekenmerkt door-contactine geassocieerd eiwit (caspr, groen), verstoord (pijlen B). Contralaterale witte stof axonen tonen regelmatige knooppunten, paranodal en juxtaparanodal organisatie (A en C), terwijl de ipsilaterale witte stof toont knooppunten en paranodal rek dat is een typisch voorbeeld van axonen met verloren axoglial contact (B en D). Schaal bar = 5 micrometer.

figuur 3
Figuur 3: Retrograde neuronale Labeling witte stof met Stroke Identificeert individuele neuronen met axonale schade. Co-injectie van fluorescent dextran amine (rood) bij de slag inductie maakt de identificatie van individuele neuronen met axonen gewond door een beroerte. Het grootste deel van de etikettering voorkomt in axonen binnen Layer 5 en 6 neuronen in de primaire sensomotorische cortex bovenop de slag. Beeld vertegenwoordigt 7 dagen na een beroerte. Schaal bar = 500 pm. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figuur 4
Figuur 4:. Microdissectie witte stof Stroke laesies voor gebruik in Biochemische en Transcriptionele Assays Co-injectie van Fast Green bij de inductie slag maakt vroege identificatie van de gewonde gebied bij 24 uur (A, bovenste paneel). Immunoblotting specifieke axonale eiwitten kan worden uitgevoerd tot een vermindering van de regio beroerte alleen (A, onderste paneel) tonen. Op langere tijd punten, kan de regio van witte stof beroerte (linker paneel) focaal worden ontleed zonder specifieke etikettering (B). Rechts bovenste paneel toont regio witte stof na het verwijderen van ontleed regio terwijl de lagere rechter paneel toont de ontleed regio witte stof die de beroerte (B). PCR voor oligodendrocyt-specifieke genen gebruikmakend van RNA geïsoleerd uit uitgesneden gebieden van de witte stof (C). IL = ipsilaterale; CL = contralaterale; c = controle; s = beroerte.

Injectie Anterior / posterior Medial / Laterale Dorsale / ventrale
0.22 0.22 -2,10
2 0.70 0.15 -2,16
3 1.21 0.15 -2,18

Tabel 1: stereotactische coördinaten voor Laterale Hoekige Approach (in mm).

Injectie Anterior / posterior Medial / Laterale Dorsale / ventrale
-0,75 -0,96 -2,10
2 -1,00 -0,96 -2,05
3 -1,25 -0,96 -2,00

Tabel 2: stereotactische coördinaten voor posterior Hoekige Approach (in mm).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Een aantal eerdere modellen van subcorticale beroerte zijn beschreven, waaronder focale injecties van endotheline-1 in de interne capsule, subcorticale witte stof en striatum bij de rat en de muis 12-14 6,15. Recentere modellen van kleine focale beroerte hebben gebruikt cholesterol microembolieën injectie in de halsslagader 16 en fototrombotisch occlusie van een enkele doordringende arteriole 17. Elk van deze modellen heeft zowel voor- als nadelen 5. De hier beschreven model levert een laesie die een aantal kenmerken die menselijke lacunair infarct waaronder axonale afwijkingen en verlies myeline degradatie, een focale necrotische kern en een klinische deficit minimaal en toont vrij snel herstel afhankelijk van leeftijd 7 nabootsen heeft. Targeting murine witte stof kunnen vele van genetische manipulaties die mechanistische studies ondersteunen.

de kritischestappen van het protocol zijn onder andere gebruik te maken van accurate stereotactische coördinaten. Omdat muizen witte stof is klein en varieert van stam tot stam kan herziening van de stereotactische coördinaten noodzakelijk zijn, afhankelijk van de leeftijd en de stam van muizen gebruikt. Controle van het injectievolume is ook belangrijk omdat dit rechtstreeks gecorreleerd aan de omvang van het infarct. Grotere injecties groter zal slagen die inbreuk maken op bovenliggende cortex en de onderliggende striatum te produceren.

Focal injectie van ET-1 met behulp van de hier beschreven benadering is gemeld, maar endotheline-1 werd aangetoond dat het directe paracriene effecten op oligodendrocyt differentiatie en rijping 10,18 verwarren de studie van post-stroke witte stof biologie. In tegenstelling, de L-Nio benadering doelen endotheelcellen alleen terwijl produceren dezelfde laesie en elimineert eventuele verstorende paracriene effecten op de bij schade celantwoord. L-Nio is niet direct cytotoxische en de Selected dosis werd bepaald door voorafgaande dosisverhoging experimenten (gegevens niet getoond). Het achterste hoek aanpak is ontwikkeld om nauwkeuriger undercut axonen van primaire motorische cortex produceren van de maximale gedrags tekorten die kunnen worden toegeschreven aan witte stof schade. De mediale schuine aanpak ook schade aan motorische cortex axonen, maar strekt zich meer lateraal en het gaat om axonen onderliggende primaire sensorische cortex.

De slag laesie breidt vrij snel over de eerste 24 uur. Na zeven dagen, de grootte van het infarct maximaal is en er is waargenomen significante groei laesie na die tijd. Extra cellulaire gebeurtenissen en axonale degeneratie optreedt na deze beginfase maar de infarctgrootte zoals gemeten door de necrotische kern zal niet significant veranderen in de afwezigheid van interventie.

Co-injectie van neuroanatomische tracers bij de slag identificeert neuronen ervaren ischemische axonale verwonding. Met behulp van de medial of posterior schuine benadering, de neuronale cellichamen met beschadigde axonen projecties blijven ongedeerd. Hierdoor ontstaat een bruikbaar model om het effect van ischemische axotomy centrale zenuwstelsel neuronen te bestuderen. We hebben in de eerste plaats retrograde tracers waaronder dextran amine en Fluorogold, die zowel tonen uitstekende opname door beroerte beschadigde axonen benut. Door gebruik te maken van de grote verscheidenheid van transgene en knock-out muis lijnen, kunnen gebruikers van dit protocol de specifieke rol van neuronale genen die betrokken zijn in de witte stof beroerte letsel respons en herstel te onderzoeken.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Geen

Acknowledgements

SN en MDD kregen steun van NIH K08 NS083740 en de UCLA Department of Neurology. AJG erkent steun van de Dr. Miriam en Sheldon Adelson G. Medical Research Foundation en de Larry L. Hillblom Foundation. KLN zeer erkentelijk voor de steun van de American Heart Association 14BFSC17760005 ASA-Bugher Stroke Center. ILL, EGS en STC werden ondersteund door NIH R01 NS071481. JDH erkent steun van NIH K08 NS083740.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
L-N5-(1-Iminoethyl)ornithine, Dihydrochloride Calbiochem 400600-20MG
Isoflurane Phoenix Pharmaceutical, Inc. NDC 57319-559-06
Capillary tubes World Precision Instruments 50-821-807
Picospritzer Parker Instrumentation Picospritzer II
Stereotactic setup Kent Scientific KSC51725
Pipette puller KOPF Model 720
Stereomicroscope SZ51 Olympus 88-124
Fine scissors Fine Scientific Tools 14084-08
Forceps Harvard Apparatus PY2 72-8547
Curved Forceps Harvard Apparatus PY2 72-8598
Blunt dissection tool Fine Scientific Tools 10066-15
Drill Dremel 8220-1/28
Drill bits Fine Scientific Tools 19007-05
Vetbond 3M 1469SB 
Marcaine HOSPIRA NDC 0409-1610-50
Trimethoprim-Sulfamethaxole STI Pharmacy NDC 54879-007-16
Fluororuby Fluorochrome Inc 30 mg
Paraformaldehyde Fisher O4042-500
Sucrose Fisher BP220-10
Cryostat Leica CM3050 S 14047033518
Glass slides Fisher 12-544-7
Fast Green  Sigma F7252-5G
Dissection microscope Nikon SMZ1500
23 G butterfly needle Fisher 14-840-35
10x Hank's Balanced Salt Solution Life Technologies 14065056
1 M HEPES-KOH, pH 7.4 Affymetrix 16924
D-Glucose Sigma G8270
Sodium bicarbonate Sigma S5761
Cyclohexamide Sigma 01810

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Go, A. S., et al. Heart disease and stroke statistics--2014 update: a report from the American Heart Association. Circulation. 129, 28-292 (2014).
  2. Saini, M., et al. Silent stroke: not listened to rather than silent. Stroke. 43, 3102-3104 (2012).
  3. Koton, S., et al. Burden and outcome of prevalent ischemic brain disease in a national acute stroke registry. Stroke. 44, 3293-3297 (2013).
  4. Jiwa, N. S., Garrard, P., Hainsworth, A. H. Experimental models of vascular dementia and vascular cognitive impairment: a systematic review. J Neurochem. 115, 814-828 (2010).
  5. Sozmen, E. G., Hinman, J. D., Carmichael, S. T. Models that matter: white matter stroke models. Neurotherapeutics. 9, 349-358 (2012).
  6. Sozmen, E. G., Kolekar, A., Havton, L. A., Carmichael, S. T. A white matter stroke model in the mouse: axonal damage, progenitor responses and MRI correlates. J Neurosci Methods. 180, 261-272 (2009).
  7. Rosenzweig, S., Carmichael, S. T. Age-dependent exacerbation of white matter stroke outcomes: a role for oxidative damage and inflammatory mediators. Stroke. 44, 2579-2586 (2013).
  8. Hinman, J. D., Rasband, M. N., Carmichael, S. T. Remodeling of the axon initial segment after focal cortical and white matter stroke. Stroke. 44, 182-189 (2013).
  9. McCall, T. B., Feelisch, M., Palmer, R. M., Moncada, S. Identification of N-iminoethyl-L-ornithine as an irreversible inhibitor of nitric oxide synthase in phagocytic cells. Brit j pharmacol. 102, 234-238 (1991).
  10. Gadea, A., Aguirre, A., Haydar, T. F., Gallo, V. Endothelin-1 regulates oligodendrocyte development. J Neurosci. 29, 10047-10062 (2009).
  11. Dean, D. A. Preparation (pulling) of needles for gene delivery by microinjection. CSH prot. (2006).
  12. Hughes, P. M., et al. Focal lesions in the rat central nervous system induced by endothelin-1. J. Neuropathol. Exp. Neurol. 62, 1276-1286 (2003).
  13. Whitehead, S. N., Hachinski, V. C., Cechetto, D. F. Interaction between a rat model of cerebral ischemia and beta-amyloid toxicity: inflammatory responses. Stroke. 36, 107-112 (2005).
  14. Frost, S. B., Barbay, S., Mumert, M. L., Stowe, A. M., Nudo, R. J. An animal model of capsular infarct: endothelin-1 injections in the rat. Behav Brain Res. 169, 206-211 (2006).
  15. Horie, N., et al. Mouse model of focal cerebral ischemia using endothelin-1. J Neurosci Methods. 173, 286-290 (2008).
  16. Wang, M., et al. Cognitive deficits and delayed neuronal loss in a mouse model of multiple microinfarcts. Neuroscience. 32, 17948-17960 (2012).
  17. Shih, A. Y., et al. The smallest stroke: occlusion of one penetrating vessel leads to infarction and a cognitive deficit. Nat Neurosci. 16, 55-63 (2013).
  18. Jung, K. J., et al. The role of endothelin receptor A during myelination of developing oligodendrocytes. J Korean Med Sci. 26, 92-99 (2011).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics