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Chemistry

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Bilton, H. A., Ahmad, Z., Janzen, N., Czorny, S., Valliant, J. F. Preparation and Evaluation of 99mTc-labeled Tridentate Chelates for Pre-targeting Using Bioorthogonal Chemistry. J. Vis. Exp. (120), e55188, doi:10.3791/55188 (2017).

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Abstract

Introduction

99m Tc를 전 세계적으로 올해 1, 2, 3 당 실시 만 50 이미징 절차에 진단 핵 의학에서 사용되는 지배적 인 방사성 동위 원소, 남아있다. 임상 적으로 사용되는 99m Tc를 제의 대부분은 관류 형 방사성 의약품이다. 99m Tc를가 표적화 구조물에 라이 게이션을 통해 특정 바이오 마커에 결합하도록 지시하는 능동적 표적 화합물의 제한된 수있다. 타겟 99m Tc를 방사성 의약품의 생성은 종종 관심의 바이오 마커에 결합하는 표적 분자의 능력 99m Tc를 리간드 복합체의 영향에 의해 방해하거나 동위 원소 반감기 고 분자량 생체 분자와 함께 사용하도록 충분히 길게하지 않다 이러한 항체. 이미지가 담배 마는 비 대상에서 삭제하는 생체 분자의 순서를 인수하기 전에 후자는 일반적으로 몇 일이 필요합니다 단말. 사전 타겟팅은 이러한 문제를 극복하기위한 대안적인 접근 방식을 제공합니다.

bioorthogonal 화학 결합 사전 타겟팅 모두 형광 무선 촬상 4, 5, 6, 7, 8에 대한 새로운 분자 이미징 프로브를 개발하는 효과적인 방법으로 밝혀졌다. 도 1에 도시 된 바와 같이, 1,2,4,5- 테트라 (Tz 일) 및 트랜스 -cyclooctene (TCO) 유도체의 역 전자 수요 딜스 - 알더 (IEDDA) 반응은 6 특히 효과적인 것으로 밝혀졌다. 이러한 구성 요소와 IEDDA 반응은 높은 선택성, 생체 사전 타겟팅 응용 프로그램 (9), (10)에 이상적 (2 ≈ 6,000 M -1의 -1 k)를 PBS에 빠른 반응 속도를 나타낼 수있다.

e_content "> 사용되는 가장 일반적인 방법은 TCO 파생 대상 벡터를 관리하고 충분한 지연 기간에 따라 포함하는 방사성 표지 테트라 투여한다. 방사성 표지 tetrazines을왔다 11 C, 18 F, 64 구리, 89 ZR, 111 년을 기준으로 13, 12, 11 내지 14, 15를보고 하였다. 반면, 생체 내에서 결합 단백질 및 열화를 방지하기 위해 CO 리간드의 사용을 필요로하는 HYNIC 형 리간드를 사용하여 제조 하였다 Tz 일 Tc를이 - 표식 99m, 단지 하나의 보고서가있다 16. 다른 방법으로, 우리는 + 코어 [3 99m Tc를 (CO)]을 안정 세자리 복합체를 형성 리간드 제품군을 사용하여 tetrazines를 표시 여기 99m Tc를 (I)의 합성을보고합니다.


그림 1 : 테트라 트랜스 -cyclooctene 사이의 bioorthogonal IEDDA 반응. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

준비 리간드의 가족은 극성과 금속 결합 영역과의 Tz (그림 2) 사이의 링커 그룹의 성격에 차이가 세자리 킬레이트를 포함한다. 목표는 고속 목표 대 비 표적 비율을 수득하기 위해, 테크네튬 테트라가 효과적으로 지역화 및 TCO 표지 된 생체 부위와 결합하지 않을 때 빠르게 클리어와 반응 할 수있는 구성 99m을 확인 하였다. 리간드를 테스트하기 위해, 비스포스포네이트의 TCO 파생 (TCO-BP)는 17을 사용 하였다. 우리는 TCO-BP 활성 골대사의 영역에 편재와 반응 할 수 있음을 미리 보여생체 (18)에서 방사성 표지 tetrazines. 이 단일 단계로 제조 될 수 있으며, 실험 지역화 주로 관절 (무릎, 어깨)에 발생하는 정상 마우스에서 수행 될 수 있기 때문에, 새로운 tetrazines 테스트하는 편리한 시약이다.

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Protocol

동물 실험은 동물 관리에 캐나다위원회 (CCAC) 지침에 따라 맥 매스터 대학의 동물 연구 윤리위원회의 승인을했다.

99m Tc를 가진 Tz 일 - 세자리 리간드 1. 방사성 표지

주의 : 다음 절차 방사성 화합물의 사용을 요구한다. 작업은 안전 및 폐기 규정을 준수하여 허가 된 실험실에서 수행해야합니다. 전자 레인지 반응은 특히 화학 합성을 위해 설계된 전자 레인지에 수행되어야한다.

  1. 의 합성 99m Tc를 (CO) 3 (H 2 O) 3] + 19 20
    1. 마이크로파 바이알에 결합 8 mg의 K 2 BH 3 CO 2, 15 mg의 나트륨 2 CO 3, 20 mg의 나트륨이 B 4 O 7 · 10H 2 O, 및 25 mg의 KOCO [CH (OH)]COOH를 2 · 4H 2 O 퍼지 아르곤 가스로 10 분 동안 바이알.
    2. 유리 병에 0.9 % 식염수 (~ 1100 MBq의, ~ 30 MCI) - TCO 4 99m의 4 ML을 추가합니다.
    3. 반응물의 완전한 혼합을 보장하기 위해 10 초 동안 교반 한 후 110 ° C에서 3.5 분 동안 극초단파에서 반응물을 가열 하였다.
    4. ~ 400 μL, 1 M HCl을 사용 3.5-4 상기 용액의 pH를 조정한다. 산도 용지를 사용하여 확인합니다.
  2. 테트라의 방사성 표지는 1-5 리간드
    1. 250 μL 메탄올 (21)의 각 리간드의 2 밀리그램 (화합물 1-5)을 녹인다.
    2. 250 μL를 추가 [99m Tc를 (CO) 3 (H 2 O) 3] + (~ 74 MBq의, ~ 2 MCI) 각 솔루션.
    3. 60 ° C에서 20 분 동안 마이크로 웨이브를 이용하여 반응 혼합물을 가열한다.
      참고 :이 단계는 모두 5 tetrazines에 대한 동일했다.
    4. 화합물 2-5의 경우, 용매를 다시 증발 dissol1 V / V의 DCM : TFA (1) 1 mL에 생성 된 제품을했습니다.
    5. 6 분 (2-4) 또는 10 분 (5)를위한 전자 레인지에 60 ° C에서 용해 반응 생성물 (2-5)를 가열한다.
    6. 실온으로 냉각시킨 후, 증발기를 이용하여 용매 (36 ° C, 8 mbar에서 3 분, 6,000 RPM) 증발 1 건조 화합물을 용해 : 1 ACN : H 2 O 또는 1 : 1 메탄올 : H 2 O를 HPLC 정제에 앞서.
    7. HPLC (C 18 역상)를 사용하여, 표지 된 테트라 리간드로부터 표지 생성물 분리를 포함하는 99m Tc를 표지 된 화합물 (1-5) 정제. 일반적으로 30:70 ACN의 용출 그라데이션 사용 : H 2 O를 (모두 0.1 % TFA와) 40:60 ACN에 : H 2 O 20 분 (18 분)와 C (18) 분석 4.6 × 100 밀리미터 열 이상. UV (254 nm의)과 감마 검출 모두를 사용합니다.
      1. 각 표지 된 생성물의 소량의 샘플을 받아 공동 INJ의 그것 HPLC 체류 시간과 비교반사된다 비 - 방사성 표준 재 분류 (20 % 0.125 mg의 메탄올 H 2 O). 재 분류 기준은 UV HPLC 트레이스에서 식별되고, γ-HPLC 트레이스에서 99m Tc를 표지 된 화합물을 동시에 용출된다. 이 공동 분사 화합물 Tc를이 표시된-99m의 신원을 확인하고, 비교 체류 시간에서의 피크를 나타낸다.
    8. 증발기 (36 ℃, 8 mbar에서 3 분, 6,000 RPM)를 사용하여 HPLC 분획으로부터 용매를 증발시켰다.
    9. 0.5 % BSA 및 0.01 % 트윈 80을 함유하는 7.4 kBq / PBS에서 μL의 농도로 정제하여 화합물을 제형.
    10. 표지 화합물이 안정 보장하기 위해 시험 관내 안정성 연구를 수행합니다. 안정성을 평가하기 위해 각 시점에서 HPLC의 혼합물을 소량 (3.7 MBq의)를 주입, 1, 4 및 6 시간 동안 37 ℃에서 인큐베이션 제형 화합물.

2. 사전 대상으로 바이오 유통 연구

    동물의 난> 준비
    1. 7-9주 세, 여성을 Balb / c 마우스를 사용하여 (N = 3), 꼬리 정맥 주사를 통해 TCO-BP는 식염수 (20 ㎎ / ㎏) (5 μg의 / μL)에 공식화 관리 할 수 ​​있습니다.
    2. 물리적 구속 장치에 마우스를 놓고 꼬리의 측면에있는 혈관을 확인하고 알코올 면봉으로 닦아. 꼬리의 끝에서 약 2cm에서 정맥에 얕은 각도 병렬에서 30 게이지 바늘을 삽입합니다. 천천히, 주사 바늘을 제거하고 출혈이 멈출 때까지 약간의 압력으로 주사 부위에 깨끗한 거즈 스폰지를 적용하는 플런저를 우울.
    3. TCO-BP의 1 시간 후 분사에서 관리 ~ 0.5 % BSA 100 μL로 제형 99m Tc를-테트라의 0.74 MBq의 (20 μCi를), 0.01 % 트윈 80 PBS에서, 꼬리 정맥 주사를 통해.
  1. 생물 분포 연구
    1. 원하는 시점 (t = 6 H)에서, 3 % 이소 플루 란 2 % 산소 혼합 가스를 사용하여 마우스를 마취시키다. 에 시연마취 된 마우스에 전자 핀치 철수는 마취의 수술 비행기 아래에 확인합니다.
    2. 주사기 헤파린 전처리를 사용하여 혈액을 심장 천자를 통해 (1 ml)에 수집합니다. 계속 마취의 코 콘에서 코와의 뒷면에 놓고 마우스 및 동물에 칼 모양의 프로세스를 찾습니다.
      1. 20 ° 각도로 약간 칼 모양의 과정에서 동물의 정중선의 왼쪽에, 25 G 바늘을 삽입합니다. 완전히 바늘을 삽입하고 천천히 심장에 손상이 된 경우 바늘 허브에 피를 볼 플런저에 다시 당깁니다. 필요한 경우 심장에 구멍을 위해, 플런저를 누른 상태에서 약간 바늘을 다시 조정. 천천히 주사기로 피를 그립니다.
    3. 마취 동안, 경부 탈구에 의해 동물을 안락사.
    4. 플라스틱 백에 각각의 동물을 배치하고 전신 활성 수준을 측정하는 용량 교정기 (99m Tc를 설정)을 사용한다.
    5. 에 다음과 같은 조직과 체액 수집 프리 - 무게혈액, 뼈 (무릎 및 어깨), 담낭, 신장, 간, (내용) 위 (내용) 소장, 대장과 (내용) 맹장, 갑상선 및 기관, 소변과 방광 : 에드 튜브를 계산 그리고 꼬리.
    6. 적절한 계산 튜브에 조직을 배치하기 전에 혈액을 제거하고 건조시킨다하는 PBS에서 (혈액, 담즙 방광과 방광 제외) 해당 조직을 씻어.
    7. 비닐 봉지에 동물의 시체를 놓고 용량 교정기를 사용하여 잔류 몸 전체의 활동을 측정합니다.
    8. 조직 샘플을 포함하는 각 튜브의 무게. 튜브의 초기 중량을 빼기 조직의 덩어리를 얻었다.
    9. 각 마우스에 대한 주입시의 시료 (100 μL)의 활동량을 측정하기위한 도즈 교정기 (99m Tc를 설정)을 사용한다.
      주 :이 시험 샘플 따라서 주입시 활성 수를 제공 주입 부피와 동일하다.
    10. 조직을 측정하는시기이전에 사용 된 시료의 liquot 5 μL. 다중 검출기 감마 카운터 (99m Tc를 설정)를 사용하여 5 μL의 시료에 대한 분 (CPM) 당 개수를 구하는 계산.
    11. 변환 계수 (CPM μCi를 -1)를 얻었다 식 1을 사용하여 활성 및 CPM 관계를 계산 2.2.9 및 2.2.10에서 얻어진 두 개의 값을 사용한다.
      (1) 식 (1)
    12. 각 조직 또는 유체의 샘플에서 방사능의 양을 측정하기 위해, 감마 카운터를 사용한다.
    13. 총 주입 선량에 대해 측정시, 각 조직 또는 유체 활동의 양을 계산하는 수학 식 1을 사용한다. 이 값은 장기 중량 정규화 및 조직의 그램 당 %에 주입 용량 (즉, %의 ID / g)로보고됩니다.
    14. absen에서 99m Tc를 테트라 표지 리간드를 이용한 대조군 실험을 수행하는 단계 2.2.13에 따라 2.1.2TCO-BP의 가전. 희생 마우스 (N = 3), 0.5, 1, 4, 6 시간 포스트 분사로하는 조직 또는 전술 한 바와 같은 액체를 얻었다.

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Representative Results

리간드는 시판되는 테트라 22 23 생성물의 결합에 의해 다음 간단한 환원성 아 민화 전략 (도 2)를 통해 다른 링커 및 킬레이트 제를 사용하여 합성 하였다. 방사성 표지는 모든 화합물에 대한 방법과 동일한 방법을 사용하여 수행 재현성이었다. 83 % (1) 45 % (2) 31 % 공정은 테크네튬 방사성 표지 화합물 1-5는 높은 방사 화학적 수율 적당한 수득 하였다 99m 그러자, 리간드, 반응 시간 및 온도의 양 pH를 변화시켜 최적화시켰다 (3) 42 % (4), 및 54 % (5). 증발기를 이용하여 미 반응 리간드 증발로부터 HPLC 정제 후, 화합물은 PBS를 주입하기 전에 0.5 % BSA 및 0.01 % 트윈 80을 함유하는 제형 하였다. 상기 p-의 구체적인 활동 urified 99m Tc를 표지 테트라은 ~ 1.48 MBq의 / μg의했다. 선행 연구에서 생체 내 연구에 99m Tc를 표지 테트라 리간드의 안정성을 평가하기 위해 수행되었다. 예로서, 화합물 4에 대해도 3에서와 같이 안정성이 6 시간 (R의 t = 14 분)에 걸쳐 가시적 인 열화 1, 4 및 6 시간에서 HPLC에 의해 모니터링 하였다.

그림 2
그림 2 : 화합물은 1-5 표시 (아래)와 같은 다른 링커 (Y) 및 킬레이트 (X)를 사용하여 제조 하였다. 모든 화합물은 단계 (ⅱ)이 필요하지 않은 하나의 예외와 함께 [99m Tc를 (CO) 3 (H 2 O) (3)]과 동일한 반응 조건을 이용하여 + (위쪽)으로 방사성 표지 하였다.

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도 3 : 1, 4 및 6 시간 동안 37 ° C에서 배양 4 PBS 4. γ-HPLC 트레이스 화합물을 이용하여 안정성 시험 결과.

생체 내 시험을 위해, 건강을 Balb / c 마우스를 사용 하였다. 간단히, 각각의 화합물에 대해, 마우스 그룹 (N = 3)을 1 시간 후에 99m Tc를 표지 된 화합물을 투여함으로써 수행 하였다 TCO-BP (100 μL, 20 밀리그램 / kg)를 주입 하였다. 99m Tc를 단지 6 시간 후 분사에서, 동물을 죽이고 각종 조직이나 체액에서의 활성 농도를 측정 하였다. 얻어진 데이터는 g 조직 (%의 ID / g) 당 퍼센트 선량 주입으로보고도 4에 도시되어있다. 다섯 99m Tc를 표지의 Tz 화합물 각각에 대한 혈액 뼈 (무릎이나 어깨)의 대표 비율은 표 1에 표시됩니다. 이러한 데이터는 카스티 표시일찍 화합물 3은 오프 대상 조직의 현지화에 관한에서 99m Tc를 표지 화합물 중 상당한 변화가 있었다 혈액에서, 그 간극 결합 타겟팅 최적의 제공. 생쥐 TCO-BP의 부재 99m 테크네튬 테트라 리간드 주사 하였다 CD1 생쥐를 이용하여 음성 대조군 연구 (N = 3)을 실시 하였다. 마우스를 0.5, 1, 4, 6 H와 % ID에 희생 / g의 모든 조직 및 체액에 대해 결정 하였다. 화합물 2의 데이터가 그림 5에 제시되어 테스트 모든 화합물의 경우, 상당한 흡수는 뼈 또는도 4에 도시되지 않은 다른 조직 (심장, 폐, 비장, 골격근)에서 볼 수 없었다.

그림 4
99m Tc를 표지 테트라 유도체 1-5 그림 4. 바이오 분포 결과 (바랭이 바테드). 선택된 조직으로부터 얻었다 표시된 데이터 및 유체는 방사성 표지 된 유도체의 6 시간 후 주사를 촬영하고, 평균 %는 SEM ± 조직 또는 유체 (%의 ID / g)의 그램 당 용량을 주입으로 활동, 조직 또는 유체 무게로 표준화했다. 뼈 대상은 •으로 표시됩니다. 주 : 1 % 미만이었다 한 평균의 % ID / g를 도시되지 않은 모든 나머지 조직. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

그림 5
그림 TCO-BP의 사전 주입없이 99m Tc를 표지 테트라 (2)를 사용하여 제어 연구 5. 바이오 분배 결과. 표시된 데이터는 0.5, 1, 4에서 3 쥐에서 가져온 선택된 조직과 체액에서 얻은, 2의 6 시간 후 주입 하였다. 활동 조직에 표준화 된 또는유체 중량 ± SEM 조직 또는 유체 (%의 ID / g)의 그램 당 평균 퍼센트 주입 도즈있다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.

화합물
비율 1 4 (5)
어깨 : 혈액 3.5 : 1 3.5 : 1 21 : 1 7.8 : 1 0.8 : 1
무릎 : 혈액 6.9 : 1 5.6 : 1 26 : 1 12 : 1 1.3 : 1

표 1. 뼈 조직 : 생체 분포 연구에서 결정된 혈압 비율.

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Discussion

다양한 극성의 테트라 링크 세자리 킬레이트의 컬렉션을 준비하고, 생체 내에서 TCO 유도체와 IEDDA 반응에서 자신의 99m Tc를 단지의 유틸리티를 평가 하였다. 효과적이고 재현 99m Tc를 라벨링 방법은 리간드 농도가 라벨링 단계 (화합물 2-5) T- 부틸 기의 탈 보호 하였다 10-3 M.이었다 다섯 테트라 - 킬레이트 위해 개발되었다. 리간드의 농도는 높은 방사 화학적 수율을 향상시키고, 테트라 (21)의 열화를 최소화 반응 시간을 감소시키기 위해 사용되었다. 생성물을 분리하고 모두 갖는> 99 %의 방사 화학적 순도 1.48 MBq의 / μg의 ~ 높은 특정 활성을, 표지 된 리간드와 31-83%에서부터 방사 화학적 수율을 초래 HPLC에 의한 방사 불순물로부터 분리 하였다. 모든 화합물은 PBS 0을 함유하는 안정한 것으로 나타났다.최대 6 시간 (그림 3)에 대한 5 %의 BSA와 0.01 % 트윈 80.

TCO-BP 같은 비스포스포네이트 화합물은, 마우스의 무릎과 어깨 관절을 포함하는 활성 골대사 또는 상해의 지역에 지역화. TCO-BP 따라서 생체 내에서 동위 원소를 전달하기위한 새로운 방사성 tetrazines의 효과를 평가하기위한 간단한 수단을 제공한다. 다섯 99m Tc를-tetrazines의 생체 분포의 평가는 성공적으로 생체 내에서 뼈에 사전 타겟팅을 보여주는, 무릎 및 어깨 관절 (그림 4) 6 시간 후 주사를 흡수을 보였다. 이전의 연구는 혼자 주어진 99m Tc를-테트라 구조 (2) (그림 5)하지 않는 반면 방사성 표지 TCO-BP는 뼈 (18)에 축적 것을 확인했다. 이것은 하나의 뼈 흡수가 IEDDA 반응 때문이라고 결론을 내릴 수 있습니다.

더 친 유성 구조 12 (1); 7.6 ± 2.7 (2))와 어깨 (4.6 ± 1.4 (1); 4.8 ± 1.9 (2)). 높은 방사능 농도는 TCO-BP (도 5)가없는 상태에서 친 유성 99m 테크네튬 테트라 화합물 (2)의 분포와 일치 담낭, 간, 창자에서 관찰되었다. 예컨대 골격근, 비장 등의 다른 비 표적 조직 및 기관은 상당한 흡수를 나타내지 않았다 (<1 %) 생체 분포 연구는 TCO-BP의 부재에서 99m 테크네튬 tetrazines 수행 하였다 (도 5) 그래서 이러한 기관은 사전 타겟팅 실험 수행되지 않았다. 또한, 혼자 99m Tc를-tetrazines와 바이오 배포 실험은 6 시간 후 분사에 비 표적 조직에서 잘 정리를 한 것으로 밝혀졌습니다. 따라서, 생동위 원소 중 하나 반감기 이내의 시점은, 다른 테트라 방사성 리간드를 비교하는 시점으로 선택 하였다.

PEG의 5 링커 베어링 더 극성 99m Tc를-테트라 화합물 (3)는 매우 높은 무릎과 어깨 흡수 (각각 16.2 ± 4.8 및 20.7 ± 4.9)을 보여 주었다. 간과 장에서 관찰 낮은 활동도 있었다. 해당 PEG (10) 유도체는 화합물 1과 2에서 가장 극성 유도체 (5)에 비해 간에서 뼈 감소 흡수에 결합 보여 인해 신속한 통관을 가능성이 다른 구조에 비해 바인딩 낮은 뼈를 보였다.

높은 골 흡수와 골 : 특히 화합물 (3) 혈액의 비율 (표 1) 및도 4는 사전 타겟팅 및 IEDDA 반응 LOC하는데 사용될 수 있다는 것을 입증ALIZE의 99m 생체 내에서 화합물을 Tc를이 표지. 여기에보고 된 방법은 Tc를 (I)의 리간드 -tetrazine 차세대 포함하는 임의의 방사성 테트라을 평가하는 데 사용될 수있다. 이는이 연구에서 사용 된 리간드의 클래스의 구조를 용이하게 크게 리간드 합성 방법 (21)을 변경하지 않고, 금속 착체 및 테트라 사이 도너 그룹 및 링커의 성질을 변화시킴으로써 변화 될 수 있다는 것을 주목해야한다. 리드 분자 식별되면 가능성 고상 정제 방법을 포함 인스턴트 키트 방법은 임상 변환을 지원하기 위해 개발 될 수있다.

여기에보고위원회 (I) 복합체 항체 등 다양한 TCO 유래 표적 분자의 다양한 배열을 사용하여 새 99m Tc를 방사성 의약품을 준비 할 수있는 기회를 만들 수 있습니다. 항체, typic 않을 것, 테크네튬 표시 tetrazines의 창조 이전에 우수한 타겟팅 특성에도 불구하고아군 때문에 더 이상 동위 원소의 반감기 (~ 6 시간)보다 자신의 느린 클리어런스 (일)의 99m Tc를 함께 사용한다. 여기에보고 된 화학 물질의 추가적인 애플리케이션은 리간드의 동일한 클래스가 베타 핵종 186 Re 및 188을 다시 방출하여 제조 될 수 있다는 것이다. TCO-BP의 특성을 추구하는 종양 결합위원회 (I)의 제제 등 구조적 재 (I) 유사 뼈 전이를 치료하는데 사용될 수있다.

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
Argon gas Alphagaz --- ---
Na2CO3 EMD Millipore 106395 ---
Na2B4O7·10H2O Anachemia S9640 ---
KNaC4H4O6·4H2O Anachemia 217255 ---
Technelite 99mTc generator Lantheus medical imaging --- Source of 99mTcO4-
0.9% Saline Lantheus medical imaging --- To elute generator
1 M HCl Lab Chem --- ---
MeOH Caledon --- ---
ACN Caledon --- HPLC grade
Millipore H2O Thermo Fisher Scientific Barnstead Nanopure ---
DCM Caledon --- ---
TFA Caledon --- ---
PBS Thermo Fisher Scientific 10010023 pH 7.4 1x
BSA Sigma Aldrich A7906 ---
Tween80 Sigma Aldrich P8047 ---
Isoflurane CDMV 108737 Supplier: Fresenius Kabi Animal Health
HPLC Waters 1525 Binary Pump, 2998 Photodiodde Array Detector, E-SAT/IN, Bioscan Flowcount PMT detector (item # 15590) ---
HPLC column for analysis and purification of compounds 2-4 Phenomenex 00G-4435-E0 Gemini® 5 µm C18 110 Å, LC Column 250 x 4.6 mm
HPLC column for analysis and purification of compounds 1 and 5 Waters  186003115 XBridge BEH C18 Column, 130 Å, 5 µm, 4.6 mm x 100 mm
Microwave Reactor  Biotage  Initiator 8 ---
Biotage V10 Evaporator Biotage  Serial # V1041 ---
Dose calibrator Capintec, Inc.  CRC-25R ---
Gamma counter Perkin Elmer Wizard 1470 Automatic Gamma Counter ---
Animal room scale  Mettler Toledo XP105 Delta Range ---
Microwave vials  Biotage  355629 0.5-2 mL 

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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