تقييم العيوب عرقلة مفرق المسالك البولية عن طريق حقن صبغة أزرق الميثيلين

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

حقن صبغة أزرق الميثيلين في الحوض الكلوي يسهل تقييم المسالك البولية مفرق عرقلة العيوب أثناء تطوير المسالك البولية الجنينية الماوس. ويرد هنا، بروتوكولا لحقن صبغة أزرق الميثيلين في الحوض الكلوي.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Yun, K. Assessing Urinary Tract Junction Obstruction Defects by Methylene Blue Dye Injection. J. Vis. Exp. (128), e56247, doi:10.3791/56247 (2017).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

المسالك البولية مفرق عرقلة العيوب هي التشوهات الخلقية حمل هيدرونيفروسيس وهيدروريتير. يمكن تقييم المسالك البولية موريني مفرق عرقلة العيوب من خلال تتبع تدفق صبغة أزرق الميثيلين داخل الجهاز البولي. يتم حقن صبغة أزرق الميثيلين في الحوض الكلوي للكلى الجنينية قبل الولادة، ورصد تدفق صبغ من الحوض الكلوي الكلي عن طريق الحالب وفي التجويف المثانة بعد الضغط الهيدروستاتي. تراكم صبغ سيكون واضحا في التجويف المثانة المسالك البولية الفترة المحيطة بالولادة الطبيعية، ولكن ستكون مقيدة بين الحوض الكلوي ونقطة نهاية الحالب غير طبيعي، في حالة حدوث عوائق المسالك البولية. ويسهل هذا الأسلوب تأكيدا للمسالك البولية مفرق العراقيل والتصور هيدرونيفروسيس وهيدروريتير. ويصف هذه المخطوطة بروتوكول لحقن صبغة أزرق الميثيلين في الحوض الكلوي لتأكيد العراقيل مفرق المسالك البولية.

Introduction

الجهاز البولي يتكون من زوج من الكلي والحالب والمثانة ومجرى البول مشتركة. والوظيفة الرئيسية للجهاز البولي المحافظة على التوازن الجسم بإدارة توازن الماء والكهرباء للدم. الكلي تصفية الدم لتركيزات اﻻلكتروﻻيت التحكم وحمض قاعدة التوازن، وإنتاج البول تفرز فائض المياه والنفايات بما في ذلك الذوائب ونواتج الأيض. ثم يتم نقل البول من خلال الحالب من الحوض الكلوي الكلي إلى بلاديرين بطريقة أحادية الاتجاه حيث يتم تخزينها والقضاء عليها في نهاية المطاف عن طريق الاحليل1.

الحالب أنابيب مستقيمة مصدرها القناة ونمائية. بعد الناشئين من لاصق ونمائية يوم الجنينية 10.5 (E10.5) في الماوس، ساق الحالب الغضروفي ويفرق في بنية متعددة الطبقات تسمى أوروثيليوم وكتيمه بين الماوس E12.5 و E16.5. كما تختلف الخلايا الوسيطة التي تحيط بساق الحالب إلى ثلاث طبقات مكونة من الخلايا اللحمية الداخلية وخلايا العضلات الملساء سميكة الوسيطة الليفية أدفينتيتيال الخارجي. موجات تمعجية الحالب الشروع في الحوض الكلوي تنتشر من خلال طبقة العضلات الملساء لجدار الحالب إلى المثانة لنقل البول2،3، الذي يتم إنتاجه في بداية E16.5 في الماوس1.

التشوهات الخلقية في الكلي والمسالك البولية (كاكوت) من بين الأمراض الوراثية الأكثر شيوعاً، في حوالي 1 في المائة من الأجنة البشرية1،4، وتتألف من مجموعة متنوعة من تعمل بما في ذلك هيدرونيفروسيس وهيدروريتير. ويؤدي التراكم غير طبيعي للبول في الكلي والحالب تشكيل هيدرونيفروتيك hydroureter والكلى. أحد الأسباب لتشكيل هيدرونيفروسيس و/أو هيدروريتير من انسداد المسالك البولية. انسداد مفرق أوريتيروبيلفيك (أوبجو) بسبب تدفق البول الشاذة بسبب انسداد الحالب الدانية بين الحوض الكلوي، مما أدى إلى هيدرونيفروسيس وتضييق hydroureter الدانية مع أنجولاتيون أو المستمرة للطي5، 6. وباﻹضافة إلى ذلك، إدراج الحالب القاصي حمل خارج الرحم في جدار المثانة أو المسالك التناسلية يسمى عرقلة مفرق أوريتيروفيسيكال (أوفجو). يمكن أيضا لحمل أوفجو هيدرونيفروسيس وهيدروميجوريتير7،تشكيل8. هو عيب مفرق (أوفج) أوريتيروفيسيكال إضافية الجزر فيسيكوريتيريك (فور). فور يتسم بالتدفق إلى الوراء البول من المثانة نحو الكلي في أوفج. بالمقارنة مع أوفجو، الأجنة قبل الولادة مع فور لا واضح إظهار الكلي منتفخة هيدرونيفروتيك أو هيدروريتير الشديد النمط الظاهري9.

في مختبر الماوس، يمكن دراسة تدفق البول بحقن صبغة، مثل الميثيلين الأزرق، في الحوض الكلوي9. الحل إينجيكتيدميثيليني الأزرق وسوف تتبع مسار البول من الحوض الكلوي عن طريق الحالب والمثانة. Hydronephrosis يمكن أن تعترف بزيادة الصبغة في الكلي. ويمكن الكشف عن آبجو كانسداد تدفق الصبغة في الحالب الدانية مع الحوض الكلوي منتفخة5. أي تمدد الحالب المؤشرة قطرها اتسعت يوضح مثال على هيدروريتير. أخيرا، يشير إلى أوفجو مع هيدرونيفروتيك منتفخة الكلي تراكم صبغ في جدار المثانة أو في موقع المسالك التناسلية والمتوسعة7،هيدروميجوريتير10. للكشف عن فور، يتم حقن الحل صبغ في المثانة ورصد تدفق تراجعية لاحقة في الكلي9.

ويرد هنا، بروتوكولا لحقن صبغة أزرق الميثيلين إلى الحوض الكلوي الجنين قبل الولادة. هذا البروتوكول يسمح لتعقب تدفق البول من الحوض الكلوي من خلال الحالب والمثانة والتحقق من المسالك البولية مفرق العراقيل المحتملة مثل آبجو أو أوفجو.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

الفئران (فلكس Wnt5a/فلكس الفئران (Wnt5a tm1.1Tpy) وخط Dll1Cre، ونموذج الماوس أوفجو) 7 تدار وفقا للمبادئ التوجيهية للمعاهد الوطنية للصحة لرعاية واستخدام الحيوانات المختبرية ودراسة في إطار بروتوكول أقرته لجنة الاستخدام ورعاية الحيوان NCI-فريدريك.

1-"إعداد حل صبغة أزرق الميثيلين"

  1. قياس مسحوق أزرق الميثيلين 0.1 غ.
  2. حل أزرق الميثيلين في المحلول الملحي العادي 10 مل أو 1 × الفوسفات مخزنة المالحة (PBS) تماما بواسطة فورتيكسينج.
  3. تصفية الحل الميثيلين الأزرق 10 ملغ/مل مع عامل تصفية المحاقن (حجم المسام غشاء 0.45µm) للقضاء على انسداد أثناء حقن.
  4. تجميع فروة الرأس عقيمة الوريد مجموعة (27GX3/4 ″) مع 3 مل حقنه المتاح وملء المحاقن مع 3 مل تصفية حل أزرق الميثيلين.
    ملاحظة: لمنع الضغط الهيدروليكي وتدفق صبغ اللاحقة، ضع طرف إبرة أعلاه حقنه مليئة الأزرق الميثيلين الحل.

2. تشريح الأجنة "قبل الولادة"

  1. نظيفة تشريح المقص والملقط مع الإيثانول 70%-
  2. لجمع الأجنة قبل الولادة في E18.5 أو E19.5، euthanize الفئران الحوامل استخدام استنشاق أول أكسيد الكربون 2 أولاً ثم قم بإجراء خلع عنق الرحم وفقا للمبادئ التوجيهية للمعاهد الوطنية للصحة-
    ملاحظة: الماوس الإناث الحوامل وعادة ما تلد البدء في E18.5، إلا أن الكليتين أكبر أسهل للتعامل معها. ولذلك، الكلي في E19.5 أقرب للولادة أسهل لإجراء هذا التحليل على. ومع ذلك، من الجراء مع المسالك البولية ثنائية العراقيل يموت بعد الولادة. وينبغي تبعاً لخصائص الفئران التجريبية، تحديد يوم أو وقت جمع مناسب تجريبيا.
  3. رذاذ الإيثانول 70% على سطح البطن البطني ثم قم بفتح التجويف البطني بطنيا باستخدام مقص وملقط تشريح.
  4. رفع الرحم كامل وفصل من الجسم بالقطع مع تشريح مقص على نصائح قرون الرحم.
  5. شطف الرحم كامل مع برنامج تلفزيوني 1 x في طبق بيتري.
  6. الرحم سيجمينتالي مع تشريح مقص قطع وإزالة المشيمة أوروبية مع تشريح الملقط للكشف عن الأجنة في الأكياس صفار.
  7. إزالة كيس الصفار أولاً ومن ثم إزالة الغشاء السلوى بتشريح الملقط لتحرير الأجنة قبل الولادة-
  8. قطع رأس جنين بتشريح المقص. تمحو الدم الزائد مع منصات شاش معقم. دبوس الجنين إلى أسفل مع سطحه البطني حتى على مجهر تشريح مجهزة بكاميرا رقمية للتصوير. جمع ذيله للتنميط إذا لزم الأمر-
    ملاحظة: إجراء حقن الأجنة واحد في وقت واحد.
  9. بعناية فتح التجويف البطني للجنين بالملقط بتمزق الجلد. ثم، بعناية إزالة الزائدة والأنسجة مثل الكبد والمعدة والأمعاء بالملقط بقصها أو الانسحاب منها لفضح الكليتين والحالب والمثانة التي تقع في دورسالي ( الشكل 1A). امتصاص الدم الزائد من تشريح الجنين مع منصات شاش معقم إذا لزم الأمر-
    ملاحظة: الدم الزائد يتداخل مع تحديد الحوض الكلوي لحقن صبغة.

3. حقن صبغة "أزرق الميثيلين" إلى الحوض الكلوي ورصد تدفق صبغ

  1. إزالة الفقاعات في الإبر والأنابيب بطرد أزرق الميثيلين الحل من طرف الإبرة بالضغط الهيدروليكي. رفع المحاقن التي تحتوي على الحل صبغ فوق مستوى الحافة إبرة لبدء تدفق، وثم انخفاض المحاقن لوقف التدفق.
  2. أدخل الإبرة في الحوض الكلوي قرب الحالب الدانية، مع الحرص على عدم الإخلال بأنها وضعت مرة واحدة. إجراء حقن صبغة في الكلي لتحديد به انسداد المسالك البولية.
    ملاحظة: إجراء صبغ حقن في أي الكلي غير طبيعي 7 الأولى باتباع نفس الطريقة لتحديد به انسداد المسالك البولية.
  3. رفع المحاقن يصل حوالي 20 سم لتوفير الضغط الهيدروليكي واسمحوا ميليلتر 15-60 ميليلتر من تدفق الحل الصبغ. معدل التدفق ستكون حوالي 3 ميليلتر/s إذا أثير المحاقن لهذا الارتفاع فوق الجنين.
  4. رصد
  5. اللون الأزرق لصبغ ابتداء من أول في الحوض الكلوي، ثم في طول الحالب، وأخيراً في التجويف المثانة.
    ملاحظة: يستغرق حوالي 5 s لمشاهدة لون صبغة ضعيفة تنشأ داخل التجويف المثانة إذا كان يتم بشكل صحيح إدراج الحالب في المثانة. تسمح الصبغة تتراكم في موقع المحظورة حوالي 15 ثانية إذا ظهر أي لون الصبغة في تجويف المثانة.
  6. مكان المحاقن وصولاً إلى وقف تدفق صبغ وإزالة الإبرة من الكلي.
  7. تأخذ الصور الكلي والحالب والمثانة تتبع مع الحل صبغ استخدام الكاميرا والتصوير البرنامج متصلاً ستيريوميكروسكوبي.
  8. جعل سجل hydronephrosis الكلي، هيدروريتير، والموقف النهائي للحل صبغ في دفتر ملاحظات معمل.
  9. حقن
  10. أداء الكلي كونترالاتيرال كما هو موضح في المقاطع 3.1) إلى 3.5) والسماح بتدفق صبغ حوالي 20 s في المجموع-
    ملاحظة: سيتم ملء التجويف المثانة مع الحل الصبغ، المبين بلون أزرق قوي، إذا كان الحالب يتم إدراجها بشكل صحيح في تجويف المثانة. بعد تقييم لعرقلة مفرق المسالك البولية، يمكن أن تكون ثابتة الحالب والمثانة من أجل تمزيقها.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

تقع الظهرية لمعظم الأعضاء الداخلية مثل الكبد والأمعاء والكلى والجهاز البولي السفلي. بعد إزالة هذه الأجهزة الداخلية الأخرى، هي زوج من الكلي والحالب ومثانة مفردة مرئية (الشكل 1A). عند تشريح ناجحة، سوف يتدفق صبغ حقن الحوض الكلوي من الكلي إلى المثانة عن طريق الحالب. الحوض الكلوي هو الجزء الشبيهة بالقمع الدانية متسعة من الحالب في الكلي. ولذلك، نقطة حقن صبغة بالقرب من الحالب الدانية مرئية متصلة مع الكلي كما هو مبين بالأسهم السوداء (الشكل 1B-ج 1). بعد الحقن بمحلول صبغة أزرق الميثيلين إلى الكلي واحد، تنبثق الصبغ الحوض الكلوي عن طريق الحالب وإلى المثانة الناتج بلون أزرق مرئية في التجويف الحالب والمثانة، إذا لا توجد عوائق المسالك البولية (1B الشكل ). الحل صبغ عادة ما يختفي في الحالب عادي بسرعة حتى قبل التصوير، ولون الصبغة في الحالب لأنه ضعف الحالب العادي أنبوب رفيع. ومع ذلك، يمكن ملاحظة تدفق الصبغة في الحالب مع مجهر تشريح. يظهر لون أزرق قوي في التجويف المثانة نتيجة لتدفق أطول من حوالي 20 ثانية في المجموع بعد الحقن من كلا الكليتين مع الحل صبغ (الشكل 1). تراكم صبغ في المثانة بعد حقن كونترالاتيرال يشير إلى أن الجهاز البولي الثاني ليس لديه أي عرقلة مفرق المسالك البولية.

ومن المعقول لحقن الكلي غير طبيعي من الواضح أولاً للتأكد من أي عوائق مفرق المسالك البولية. يمكن التعرف على الكليتين هيدرونيفروتيك غير طبيعي بحجم أكبر أو سطح شفافة رقيقة مع توسيع الحوض الكلوي. ويرد الكلي هيدرونيفروتيك منتفخة مثال وهيدروريتير طبيعي متوسعة في الشكل 2 ألف. عادة ما ينتج hydroureter متوسعة تصور أقوى لأنه يحتفظ بحجمه الموسع حل صبغ أكثر بكثير مما الحالب العادي، رقيقة. في حالة تلف الكليتين أو الحالب أثناء التشريح، فحص المسالك البولية مفرق العراقيل من المستحيل للصبغ سوف تسرب أبيرانتلي في الموقع معطوب. على سبيل المثال، هيدروريتير غير طبيعي في الشكل 2 أ أصيبت بأضرار في منتصفه، و، ولذلك الموقف النهائي للحل صبغ غير واضح ولا يمكن التحقق من أوفجو على الرغم من عدم وجود الصبغة في تجويف المثانة (الشكل 2A). ومع ذلك، قد هذا الجهاز البولي الفترة المحيطة بالولادة مع hydroureter المتوسعة والكلى هيدرونيفروتيك منتفخة أوفجو كما هو توسيع الحالب على طوله وهو واضح منتفخة في الكلي. البولي كونترالاتيرال يظهر العادي كما أنه الحالب رقيقة والصبغة بعد ذلك يدخل التجويف المثانة (الشكل 2).

Figure 1
رقم 1. أمثلة لحقن صبغة أزرق الميثيلين إلى نظام المسالك البولية عادية. (أ) صورة نموذجية للبولي من جنينا الفترة المحيطة بالولادة (E19.5) بعد إزالة الأنسجة الزائدة. وتعتبر هاتين الكليتين والحالب اثنين من مثانة مع الأعضاء التناسلية، الخصيتين هنا (ب) مثال لحقن صبغة في الكلي طبيعي. ويمكن رؤية نقطة حقن في الحوض الكلوي الكلي (السهم الأسود). لون صبغة ضعيفة مرئياً في الحالب والمثانة التجويف بعد السماح بالصبغة بالتدفق لتراكم صبغ (ج) س. 5 في التجويف المثانة بعد الحقن من كلا الكليتين العادي. اللون يصبح قويا من تراكم صبغ الحل في التجويف المثانة بعد السماح لصبغ تدفق ل 20 ثانية. الحوض الكلوي مرئياً أيضا مع لون صبغ ضعف في الكلي. باء: المثانة، ك: الكلي، الخصية t:، الحالب u:. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Figure 2
رقم 2. أمثلة من الميثيلين الأزرق صبغ حقن في البولي مع hydroureter الانفرادية. (أ) مثال لحقن صبغة في البولي مع هيدروريتير وكلي هيدرونيفروتيك من ألجرو الإناث المواليد مع تدفق صبغة من 15 ثانية. هيدرونيفروتيك الكلي أكبر بوضوح من الكلي كونترالاتيرال. المتوسعة الحالب المقابلة ولون الصبغة يمكن التعرف عليها بشدة ولكن معطوب هيدروريتير وضوح كما لاحظت تسرب صبغة الحل في تجويف الجسم. (ب) حقن صبغة في الكلي كونترالاتيرال من البولي مع hydroureter الانفرادية مع صبغ تدفق 20 س. Injected صبغ الحل إلى الكلي العادي يتراكم في التجويف المثانة لتأكيد أن الشذوذ الانفرادية. باء: المثانة، هونج كونج: الكلي هيدرونيفروتيك، وهو: هيدروريتير ك: الكلي، يو: الحالب، Ut: القرن الرحم. الرجاء انقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم-

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

الماوس الكلي الوظيفية بدءاً E16.5 واختبار حقن صبغة من الممكن نظرياً من هذه النقطة الزمنية. ومع ذلك، الكلي صغير جداً بالحقن مع الحل صبغ وتعمل مثل هيدرونيفروسيس وهيدروريتير لا تراعي وضوح حيث تعمل هذه تأثير ثانوية من البول التي تراكمت بسبب النقل البول غير طبيعي. وتتضح هذه تعمل، من العراقيل مثل آبجو أو أوفجو، في E18.5 منتفخة الكليتين والحالب. الكلي أكبر من الأجنة في E19.5 أو المواليد الجراء أسهل للتعامل مع تلك الأجنة في E18.5 أو الأصغر سنا. ومع ذلك، من الجراء مع المسالك البولية ثنائية العراقيل يموت بعد الولادة. لذلك، إجراء تجارب للتحقق من صحة كاكوت تعمل بشكل مناسب اختيار الأجنة قبل الولادة أو الجراء اعتماداً على خصائص الماوس التجريبية.

تشريح بعناية الحفاظ على نظام المسالك البولية سليمة قبل إجراء حقن الصبغة لفحص العيوب المحتملة. هذا أساسا مهما للكليتين هيدرونيفروتيك غير طبيعي والحالب، ومنتفخة جداً والتالفة بسهولة أثناء إزالة أنسجة إضافية للكشف الكلي والمسالك البولية. إتلاف هذه الأجهزة أثناء تشريح سيحول دون تحديد العيوب الحقيقية كاملة. على سبيل المثال، يبين الشكل 2 تمدد متميزة الحالب، ولكن فشل تسرب الصبغة لإظهار النقطة الطرفية من hydroureter القاصي.

دائماً يجب التأكد من إزالة فقاعات الهواء من الأنبوب والإبرة قبل الحقن، كما أن هذه الفقاعات سوف عرقلة التدفق السليم صبغ. بعد تشريح ناجحة، الخطوة الحاسمة لفحص المسالك البولية العرقلة إدخال تلميح إبرة في الحوض الكلوي. إدخال الإبرة في النصف العلوي من الكلي، قرب الحالب الدانية، من المفيد توجيه نصيحة إبرة في الحوض الكلوي. وينبغي أن النقطة طرف الإبرة نحو الحالب الدانية. حيث توجد الأوعية الدموية الكلوية القريبة الدانية الحالب، قد تدفق الصبغة على طول الأوعية الدموية الكلوية إلا غيض إبرة تشير نحو الحالب الدانية. وفي هذه الحالة، ينبغي أن تعدل نصيحة إبرة في الحوض الكلوي نحو الحالب الدانية. علاوة على ذلك، قد تمر الإبرة من خلال الكلي إذا كان إدراج عميقة جداً، مما تسبب في الصبغ تسرب من الكلي وإلى تجويف الجسم. الحرص على إدخال تلميح إبرة في الحوض الكلوي ورصد طرف الإبرة داخل الحوض الكلوي يمكن أن يساعد في تجنب هذا الفشل. في بعض الأحيان، الإبرة سوف تصبح سدت أنسجة الكلي أثناء الحقن إذا لم يتم إدراجها في الحوض الكلوي. وفي هذه الحالة، إزالة الأنسجة من الإبرة وإعادة تدفق صبغ قبل إعادة تشغيل الضغط الهيدروليكي وإعادة توجيه نصيحة إبرة تجاه الحوض الكلوي. وبالإضافة إلى ذلك، قد تكون تعمل المرتبطة كاكوت أحادية أو ثنائية. ولذلك، ضمان أن يتم الحقن بشكل منفصل لنظم اليسار واليمين البولي. على النحو الأمثل، إجراء الحقن أولاً مع الكلي غير طبيعي ومن الواضح أن للتحقق من ما إذا كان أوفجو جانب واحد.

الصورة مباشرة بعد الاختبار حقن نظراً للصبغة يمر من الحوض الكلوي عبر الحالب بسرعة. من الصعب أن ترى اللون أثناء التصوير من الحالب عادي لأنه الحالب عادي أنبوب رفيع، على الرغم من أن يمكن رصد تدفق صبغ تحت مجهر تشريح. كبديل للأزرق الميثيلين، يمكن أيضا أن تستخدم الأخضر سريع في برنامج تلفزيوني 1 x 1% وسوف تظهر لون أخضر داكن9. بالإضافة إلى حقن صبغة، أقسام نسيجية من الكلي والحالب عقب ح & ه تلطيخ سيؤكد العيوب في الكلي والحالب. أيضا، تصوير المقاطع مع مراسل محددة الحالب طريقة إضافية للتأكد من أوفجو7. ومع ذلك، ينبغي أن تكون هذه الفروع سليمة وتقطيع المسلسل ضروري لتجنب المغلوطة. بالمقارنة مع التحليلات التقليدية المستندة إلى قسم نظم البولية، هذا البروتوكول حقن صبغة بطريقة فورية لمراقبة سلامة الكلي والحالب البراءات وتصور العوائق مثل أوبجو أو أوفجو.

يوفر هذا البروتوكول بسيطة وواضحة الأسلوب توكويكلي تصور هيكل المسالك البولية في أواخر المرحلة الماوس التنمية، مما يسمح تحليل التنمية المسالك البولية. يمكن استخدام الأسلوب الموصوفة هنا لتقييم الطفرات التي تسبب عيوب المسالك البولية الإنمائية، كوسيلة لتحديد التغيرات في تنمية النضج أو الحالب المسالك البولية.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

ليس له علاقة بالكشف عن صاحب البلاغ.

Acknowledgments

أود أن أشكر الدكتور ألن سين بيرانتونى (CDBL/NCI/المعاهد الوطنية للصحة) لدعم تقديم هذه المخطوطة. أود أيضا أن أشكر الدكتور مايكل هول (CDBL/NCI/المعاهد الوطنية للصحة) و Nirmala شارما (CDBL/NCI/المعاهد الوطنية للصحة) لتحرير هذه المخطوطة. أنا ممتن لأي ثانغ (سايك) لتربية ماوس ممتازة له. وأيد هذا العمل المعاهد الوطنية للصحة، المعهد الوطني للسرطان، ومركز "أبحاث السرطان".

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Methylene blue Sigma-Aldrich M9140
Quality Biological Inc. NORMAL SALINE - 500ML Fisherscientific 50-983-204
3 mL disposable syringe with BD Luer-Lok tip BD 309657
Acrodisc Syringe Filters with Supor Membrane Pall corporation 4614
Exel Scalp Vein (Butterfly) Sets; 27G x 3/4" 12"  EXELINT 26709
Delicate Operating Scissors Roboz Surgical Instrument Co. RS-6702
Micro Dissecting Forceps Roboz Surgical Instrument Co. RS-5135
Dumont Tweezers; Pattern #5 Roboz Surgical Instrument Co. RS-5045
BD PrecisionGlide Needles 30 G x 1/2" BD 305106

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Rasouly, H. M., Lu, W. Lower urinary tract development and disease. Wiley Interdiscip Rev Syst Biol Med. 5, 307-342 (2013).
  2. Kispert, A. T-Box Genes in the Kidney and Urinary Tract. Curr Top Dev Biol. 122, 245-278 (2017).
  3. Bohnenpoll, T., Kispert, A. Ureter growth and differentiation. Semin Cell Dev Biol. 36, 21-30 (2014).
  4. Nicolaou, N., Renkema, K. Y., Bongers, E. M., Giles, R. H., Knoers, N. V. Genetic, environmental, and epigenetic factors involved in CAKUT. Nat Rev Nephrol. 11, 720-731 (2015).
  5. Tripathi, P., Wang, Y., Casey, A. M., Chen, F. Absence of canonical Smad signaling in ureteral and bladder mesenchyme causes ureteropelvic junction obstruction. J Am Soc Nephrol. 23, 618-628 (2012).
  6. Aoki, Y., et al. Id2 haploinsufficiency in mice leads to congenital hydronephrosis resembling that in humans. Genes Cells. 9, 1287-1296 (2004).
  7. Yun, K., Perantoni, A. O. Hydronephrosis in the Wnt5a-ablated kidney is caused by an abnormal ureter-bladder connection. Differentiation. 94, 1-7 (2017).
  8. Uetani, N., Bouchard, M. Plumbing in the embryo: developmental defects of the urinary tracts. Clin Genet. 75, 307-317 (2009).
  9. Murawski, I. J., Watt, C. L., Gupta, I. R. Assessing urinary tract defects in mice: methods to detect the presence of vesicoureteric reflux and urinary tract obstruction. Methods Mol Biol. 886, 351-362 (2012).
  10. Weiss, A. C., et al. Nephric duct insertion requires EphA4/EphA7 signaling from the pericloacal mesenchyme. Development. 141, 3420-3430 (2014).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics