Derin Ven Trombozu Staz farelerde yüksek frekans Ultrasonografi tarafından izlenen tarafından indüklenen

Immunology and Infection

Your institution must subscribe to JoVE's Immunology and Infection section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Mevcut Protokolü Venöz tromboz Staz modelini kullanarak elde etmek için gereken adımları açıklar. Buna ek olarak, biz trombüsü oluşumu ve çözünürlük zamanla ölçmek için non-invaziv bir yöntem kullanarak.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Rys, R. N., Blostein, M. D., Lemarié, C. A. Deep Vein Thrombosis Induced by Stasis in Mice Monitored by High Frequency Ultrasonography. J. Vis. Exp. (134), e57392, doi:10.3791/57392 (2018).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Venöz tromboz nüfusun % 1-2 1 500 yıllık insidansı ile etkileyen yaygın bir durumdur. Venöz tromboz, pulmoner emboli veya sonuçlar sonrası trombotik sendromu, kronik bacak ağrı, şişlik ve ülserasyon ile karakterize veya önemli kronik kaynaklanan Kronik Pulmoner Hipertansiyon ölüme açabilir solunum uzlaşma. Bu en yaygın kardiyovasküler hastalık akut miyokard infarktüsü ve iskemik inme sonrası ve kanser, sistemik hastalığı, cerrahi ve büyük travma gibi diğer bozuklukları seyri karmaşık hale getirebilir gibi tüm tıp disiplinleri için klinik bir mücadeledir.

Deneysel modeller bu mekanizmaların çalışması gereklidir. Staz modeli tutarlı trombüsü boyutu ve trombüsü ölçülebilir miktarda neden olmaktadır. Ancak, sistematik olarak ligate yan dalları inferior vena kava trombüsü boyutları değişkenlik ve herhangi bir hatalı veri yorum önlemek için gereklidir. Ultrasonografi kullanarak trombüsü boyutunu ölçmek için non-invaziv bir yöntem geliştirdik. Bu tekniği kullanarak, biz trombüsü geliştirme ve çözünürlük zaman içinde aynı hayvan değerlendirebilir. Bu yaklaşım Venöz tromboz değiştirme, azaltma ve araştırma hayvanlarda arıtma prensibi ile tutarlı miktar için gerekli fare sayısını sınırlar. Ultrasonografi ile elde trombüsü ağırlık ve histolojik trombüsü boyut ilişkili ile ölçüm analizi göstermiştir. Bu nedenle, çalışmada Derin Ven Trombozu inferior vena kava Staz modelini kullanarak farelerde ikna etmek ve yüksek frekans ultrason kullanarak izlemek anlatılmaktadır.

Introduction

Derin Venöz trombozu (DVT) ve pulmoner emboli oluşur, Venöz tromboemboli (VTE), miyokard enfarktüsü ve inme sonra kardiyovasküler ölüm üçüncü önde gelen nedenidir. Nüfusun % 1-2 1 5001yıllık insidansı ile etkileyen yaygın bir durumdur. Download VTE için yol açabilir: 1) ölümün ötesine pulmoner emboli; 2) sonrası trombotik sendromu, kronik bacak ağrı, şişlik ve ülserasyon ile karakterize; ya da 3) önemli Kronik solunum uzlaşma içinde kaynaklanan Kronik Pulmoner Hipertansiyon. Download VTE çok faktöriyel bir hastalıktır ve yüz yıl önce açıklandığı Staz kan akımı, gemi duvarları ve/veya pıhtılaşma Birleşik koagülasyon ve fibrinolitik sistem arasındaki dengeyi bir bozulma nedeniyle zarar neden olabilir Virchow tarafından ve Virchow'ın Üçlü bilinir.

Çoğu zaman insan DVT örnekleri elde edebilmek mümkün değildir çünkü, araştırmacılar DVT deneysel hayvan modelleri geliştirdi. Sıçan2, fare3, tavşan4, domuz5, köpek6ve insan dışı primat7 de dahil olmak üzere çeşitli hayvanlar kullanılmıştır. Fare genetiği değiştirilmiş ve DVT eğitim için en sık kullanılan hayvan vardır. Ancak, Bütün hayvanlar gibi farelerde spontan DVT gözlenen değil. Böylece, fiziksel veya kimyasal değişiklikler damar duvarının trombozu farelerde oluşturmak için kullanılır. Biz daha önce biatriyal Trombus fareler8,9,10inferior vena kava (IVC) ikna etmek için ferrik klorid modeli kullandık. Bu model güvenilir birkaç dakika içinde tıkayıcı olu_umu üreten avantajı ve anti-koagulant ve anti-trombosit uyuşturucu rol sırasında akut DVT araştırmak için kullanılır. Ancak, bu terminal bir işlemdir. Böylece, akut ve kronik DVT çalışmaya, staz modeli daha uygundur. Bu modelde, trombüsü oluşumu IVC Virchow'ın Üçlü DVT gelişimi için faktörlerin kan akımı tam kesintiye indüklenen. Bu model DVT oluşumu ve FeCl3 model11' e göre bir avantajdır çözünürlük çalışma için kullanılabilir.

Trombüsü oluşumu ve çözünürlük bir mikro-görüntüleme yüksek frekanslı ultrason sistemi12kullanarak zaman içinde takip etmek non-invaziv bir yöntem geliştirdik. Biz daha önce ultrason tarafından Venöz tromboz ölçümü olumlu patolojik olarak elde edilen olu_umu ile ilişkili olan göstermiştir. Biz iki sonraki çalışmalarda ölçümleri ultrason ilişkili trombüsü ağırlık ve histochemistry9,10tarafından sayısal trombüsü alanı ile elde edilen doğruladı. Daha da önemlisi, yüksek frekans ultrason fareler12derin Venöz tromboz oluşumunu izlemek için kullanılan göstermiştir. Trombüsü çözünürlük non-invaziv bir şekilde ölçmek için de kullanılabilir.

Burada, staz kaynaklı trombozu fare modeli ve nasıl trombüsü formasyonu olmayan invaziv yüksek frekans ultrason kullanarak zaman içinde izlenebilir kullanarak trombüsü oluşumu izin iletişim kuralı anlatacağım.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Tüm yordamları kurumsal hayvan bakımı Komitesi, McGill Üniversitesi Montréal, QC, Kanada tarafından kabul edildi. Gerekli tüm ekipman tabloda listelenen ben.

1. antikorundan (C57BL/6J) IVC Staz Protokolü

  1. Ameliyat hazırlığı
    Not: Bu bir hayatta kalma ameliyat olduğunu ve bu nedenle, uygun aseptik tekniği her zaman takip edilmesi gerekiyor. Bu tüm malzemeler el altında olduğundan emin yapma, temizlik ve önce arasında kullanım aletleri sterilize ve tüm steril malzeme için çalışma yüzeyinde steril bölge belirleme içerir.
    1. Tüm cerrahi aletler ve malzemeler otoklav tarafından sterilize. Cam boncuk sterilizasyon araç ipuçları arasında birden fazla işlem aynı anda yapılır eğer hayvanlar, sterilize etmek yeterlidir.
    2. 8-10 hafta eski C57Bl/6 erkek fareler % 100 oksijen ve % 2.5 isoflurane karışımı ile anestezi.
      Not: oksijen ve gerektiği gibi isoflurane akışını ayarlayın.
    3. Anesthetization hayvan Forseps ile ayak parmakları arasında arka pençe pinching tarafından onaylayın. Hayır yanıt--dan tutam hayvan anestezi gösterir.
    4. Yavaş salınımlı analjezik (buprenorfin) subkutan enjeksiyon yoluyla yönetmek. Fareler analjezik 1 kg vücut ağırlığı (1 mg/kg) başına 1 mg doz ver.
    5. Her iki gözün kornea hiçbir kuruma süresi boyunca yordamı sağlamak için hayvan göz merhem yerleştirin.
    6. 0.2 - 0.5 mL izotonik sıvı vücut ağırlığının 10 g başına subkutan yönetmek.
    7. Cerrahi bant kullanarak ameliyat masasına yerde hayvan düzeltmek. Hayvanın karın ortaya çıkarmak için sırtüstü pozisyonda yerleştirin. Hipotermi önlemek için bir Isıtma yastığı ameliyatı.
    8. Saç fare karından 1-2 dk. karın bölgesi gazlı bez ile temiz ve distile su, temizleme işlemi için krem epilasyon uygulaması gerekirse çıkarın.
    9. Alternatif olarak, saç küçük bir elektrikli ustura ile tıraş karından çıkarın.
    10. Karin Baxedin (klorheksidin glukonat BP çözüm) ile herhangi bir insizyon vermeden önce sterilize. Etanol ile hafifçe gazlı bez alkol buharlaşma tarafından neden olduğu aşırı ısı kaybını önlemek için geçerlidir.
  2. Maruz kalma Inferior Vena kava (IVC)
    1. Cerrahi makas kullanırken, karın boşluğu açmak için laparatomi gerçekleştirin.
      1. Alt karın, Forseps ile cilt kaldırın ve bir dikey kesi linea her iki tarafına paralel yapmak alba. Sola veya sağa linea ilk kesi yapmak alba, operatörün el kullanımı bağlı olarak. Belgili tanımlık kesme uzak orta hat ultrason daha sonra Imaging'de yardımcı olmak için yapılır.
      2. Karın üstündeki ikinci, yatay bir kesi yapmak.
        Not: karın içine nüfuz kas olmalı "tented" ve herhangi bir zarar için karın organları önlemek için Cerrahi makas ile nüfuz.
      3. Hayvanın karın kas tabakası üzerinde dikey ve Yatay kesikler yineleyin. Karın altında organlara zarar içine penetrasyon sırasında kas çadır emin olun.
        Dikkat: cilt ve kas bağırsaklar ve diğer iç organlara onları delmek değil insizyon yaparken kaldır.
    2. Cilt ve kas karın boşluğu ortaya çıkarmak için belgili tanımlık kesme uzak katlayın.
    3. Yara açılış kenarlarına izotonik solüsyonu ile ıslatılmış gazlı bez uygulayın ve bağırsak yansıtmak. Karın bağırsak dışa yardımcı olmak için her iki taraf için basınç uygulayın. Nazik hareketleri bir pamuk uç aplikatör ile bağırsak taşımak için kullanın. Gazlı bez izotonik çözümde ıslatın ve externalized bağırsak yerleştirin.
      1. Gazlı bez doku yerleşimde önce önceden nemlendirilmiş.
    4. Kenara çekilin Periton herhangi bir yağ ve böbrek ve İliak damarları arasında IVC bulaşmasına neden.
    5. Açık yan dalları ilk bir kimlik olun. Bir yan dal olarak daha küçük görünür, ancak böbrek ve iliyak arasında IVC uzak dalları önemli damar damarlar. Damarlara büyük fareler arasında değişiklik gösterebilir. Fareler yan dalları mevcut IVC bir veya her iki tarafta olabilir.
  3. Tüp ligasyonu yan dalı
    Not: yan dallar varsa, aşağıdaki yordamı her biri için gelir. Yok, adım 4'e devam edin: ilk dikiş yerleştirme IVC altında. IVC ligasyonu yer-ecek var olmak hemen yan dallar varlığı ne olursa olsun sol renal ven distal.
    1. Künt diseksiyon yan dal her tarafında gerçekleştirmek. Künt diseksiyon art arda ile çevresindeki damarları zarar vermeden fasya ile kırmak için hafif basınç, künt forseps açma işlemidir.
      Uyarı: Delme veya zarar ven kaçının.
    2. Şube kaldırın ve 6-0 ipek sütür ven altında bir bölümünü geçmek. Her zaman kaldırma veya gemiler taşırken dikkat. Gemilerin çevresinde yağ kapmak en iyisi, aksi takdirde gemi zarar riski.
    3. Dikiş forseps kullanarak, bir cerrahi ligasyonu standart cerrahi düğüm bağlama tekniği kullanarak yan dal çevresinde bulunurlar. Tam ligasyonu % 100 tıkanıklığı damarın sağlamak için yapılır. En az üç uygulamakla atar ligasyonu güvenli olduğundan emin olmak için kullanın.
    4. 1.3 için kalan herhangi bir yan dalları arasındaki adımları yineleyin.
  4. IVC üzerinden abdominal aort diseksiyon
    1. Hemen distal IVC çevresinde künt diseksiyon sol renal ven gerçekleştirin. Abdominal aort IVC fasya ile bağlı olduğu, bu nedenle ilk künt diseksiyon IVC ve abdominal aort gerçekleştirin.
      Dikkat: Delme veya zarar ven kaçının. Rüptürü veya her iki gemi delik değil. Bu yordam, gemi hasar için yüksek risk taşıyan en önemli parçasıdır.
    2. Açık bir pencere aort ile IVC arasında yapılana kadar künt diseksiyon ile hafif basınç uygulamaya devam.
  5. Dikiş yerleştirme ve IVC ligasyonu
    1. 6-0 ipek sütür IVC ve abdominal aort altında bir bölümünü geçmek.
    2. IVC ve aort arasında oluşturulan pencereden dikişi bulun. Forseps dikişi çekin ve abdominal aort ile IVC arasında iş parçacığı için kullanın. Dikiş aracılığıyla dikkatle, çekme/abdominal aort ve IVC ponksiyon değil için iş parçacığı.
    3. Cerrahi ligasyonu IVC çevresinde toplam tıkanıklığı damarın sağlanması dikiş Forseps ile olun. Yine, tüp ligasyonu hemen sol renal ven üzerinden distal olun.
    4. Tüp ligasyonu güvenliğini sağlamak için üç dikiş atar olun.
      Not: İki alternatif bir seçenek olarak ayıran önce aort ve IVC altında dikiş geçmek mümkündür. Alternatif olarak, 7-0 Prolene sütür yan şube ve IVC ligasyonu için kullanılabilir.
  6. Yaranın kapanması ve ameliyat sonrası bakım
    1. Abdominal aort kesintisiz bırakıldı ve tüm yan dalları bakmaksızın doğrulayın. IVC dilate görünür distal ligasyonu siteden ve kan akışı görünür olacaktır.
    2. Tüm Periton yağ ve bağırsak karın boşluğunda yerleştirin.
    3. Yaranın dikiş forseps ve 6-0 ipek sütür kullanarak kapatın. Çalışan dikiş (basit sürekli) kullanın ve dikiş çok sıkı olmayacak. Ne zaman hayvan uyanır ve onun kafes taşır sıkı dikiş rüptürü.
      1. Alternatif olarak, PDS, Ethilon, Vicryl, Dexon veya paslanmaz çelik klipleri yara kapatma için kullanabilir.
    4. Dikiş önce uygun dikiş tekniği bağlama kullanarak karın kas tabakası.
    5. Dikiş tekniği cilt için yineleyin ve yara kapatma yeterli olduğunu doğrulayın.
      Not: aynı dikiş iğne ve iplik birden çok hayvanlar için kullanılıyorsa, ikisinde % 70 etanol her kullanımdan önce sterilize.
    6. Hayvan anestezik gaz kaldırmak ve en az 30 dakika 34 ° C kuluçka makinesine koyun.
    7. Yine, 0.2 - 0.5 mL izotonik sıvı vücut ağırlığının 10 g başına subkutan yönetmek. Sıvı takip eden günlerde pre-operative vücut ağırlığı korumak için gerekirse verilebilir.
    8. Hayvan Kurtarma kadar başarılı ameliyat olun ve hayvan genel sağlık değerlendirmek için izleyin.
      Uyarı: Hafif Kambur duruş bu gibi invaziv bir işlem için bekliyoruz, ama hayvan 30 dakika sonrası işlemi normalde erken davranacaktır.
    9. Hayvan kendi kafesin içine yerleştirin ve tamamen iyileşti kadar diğer hayvanlarla koymayın.
    10. Analjezik günlük en çok 48 s postop için yeniden yönetmek.
    11. Gıda kafesin zemininde kurtarma hayvan süre yerleştirin. Diğer özel bakım genellikle gerekli değildir.
    12. Kızarıklık, şişlik, ya da basma ve herhangi bir diğer işaret-in hastalık yara sitesine inceleyin.
    13. Gerekirse, dikişler 7-10 gün sonra kaldırın.
    14. Ötenazi gerçekleştirdikten hemen ameliyat başarısız olursa (Örneğin, önemli gemi hasar ve/veya kan kaybı) veya hayvan ile ameliyat sonrası bakım geliştirmek değil. Ötenazi genellikle 48 h postop gerçekleştirilir. Daha uzun deneyler için 7-0 Prolene yan dallar ve IVC ve 5-0 Vicryl sütür karın boşluğu kapatmak için ligate kullanmak.
      1. Ötenazi anesthetization bir indüksiyon daha önce açıklandığı gibi dışında % 5 isoflurane hayvan yerine getirilir. Bu boğulma anestezi iken % 100 CO2 tarafından takip ediyor.
      2. Ötenazi boğulma (kalp atışı ve nefes kaybı) tarafından onay sonra tam ötenazi sağlamak için servikal çıkığı gerçekleştirin.

2. yüksek frekans ultrason Protokolü

Not: Bu bayan Davis Enstitüsü kemirgen fenotipleme çekirdek SOP yüksek frekans ultrason görüntüleme için gelen adapte iletişim kuralıdır. Bu iletişim kuralı 24 h post operatif taşıdı ama hayvan de ameliyat için yanıt olarak daha önce yapılabilir. Protokol sağlıklı fareler üzerinde herhangi bir zamanda yapılabilir ve genellikle öncesi ve ameliyat sonrası karşılaştırmak için yapılır.

  1. Hayvan hazırlanması
    1. Hayvan bir indüksiyon odasında yerleştirin ve % 100 oksijen ve % 2.5 isoflurane karışımı ile hayvan anestezi.
    2. Kalp hızı ve sıcaklık monitörünüzü açınız. Hayvan işlem sırasında sıcak tutmak için tablonun üst pozisyon ısı lamba.
    3. Hayvan indüksiyon odasından kaldırın ve kornea kuruma önlemek için göz yağ uygulayın. Hayvan analiz platformu üzerinde konumlandırın ve hayvanın ağız/burun anestezik tüp yapıştırmayın.
    4. Sıcak ultrason 37 ° C-jel ve jel hayvanın karın bölgesinde yer. Ultrason jeli pompalar su jel şişe sarılı rulo ile sıcak su ısıtma sistemi kullanılarak ısıttı.
    5. Kalp hızı ölçümleri, (gerekirse) için elektrot jel üzerinde analiz platformun elektrotlar 4 koymak ve belgili tanımlık paws platformu/elektrotlar için hayvanın cerrahi bant ile düzeltmek. Hayvan sırtüstü pozisyonunda IVC görüntüleme için yerleştirin. Görüntüleme sistemi ultrason sıcak ve elektrotlar hayvan izleme içeren bir çözümleme platform içerir.
    6. Sıcaklık ölçüleri, elektrot jel termometre üzerinde koymak ve hayvan rektum yerleştirin.
    7. Isı lamba ve isoflurane o hayvanı rahat, 30-70 bpm arasında bir solunum vardır ve 37 ° C'de tutulur emin olmak gerektiği gibi ayarlayın
    8. Gerekirse, hayvanın karın tıraş veya saç dökücü krem saç kaldırma. 1-2 dakika boyunca uygulayın ve temiz gazlı bez ve distile su ile silin.
      Not: Çok fazla saç görüntü kalitesini etkileyebilir.
    9. Gazlı bez altında veya herhangi bir aşırı ultrason jeli yakalamak için hayvan tarafına yerleştirin.
  2. Düşsel IVC ve Trombus olgusu
    1. Görüntüleme yazılımını açın ve yeni bir çalışma başlar.
    2. Görüntüleme için uygun bir scanhead seçin. Burada kullanılan scanhead için karın organları olduğunu (frekans: 35 MHz, odak uzaklığı: 12.8 mm).
    3. Hayvan ilgili herhangi bir ilgili bilgileri kaydeder. Bu hayvan içerebilir kimliği, seks, ağırlık, Doğum tarihi, soy, vb.
    4. Ultrason jeli hayvan dokunuyor kadar scanhead indirin.
    5. 2-B görüntüleme hayvan başlamak için scanhead sonda başlatın. Bu modda, görüntüleri iki boyutlu, değişen grinin olarak sunulmaktadır.
    6. IVC ve abdominal aort scanhead z uçağın üzerinden de hareket ederken fare platform x - ve y-uçak, boyunca taşıyarak bulun.
      Not: kan damarları onların duvarlar beyaz ve kan içinde neredeyse-ecek gözükmek ile siyah. Abdominal aort yoğun atmak ve daha kalın duvarlar var, süre IVC ince duvarlar ve sıkıştırma genişletin/kolayca üzerinde görüntü ekran scanhead hareket ettiğinde ve aşağı. Tüp ligasyonu sitesi damarı genişlemiş ve damar duvar bir noktasına gelecek kadar belirgin olacaktır. İçinde oluşan herhangi bir trombüsü ultrason görüntüleme altında katı olacak ve damar duvar gibi kolayca sıkıştırır değil. Damar-ecek basmak sadece ligasyonu nerede yok trombüsü oluşturulur.
    7. IVC ve ligasyonu site bulma üzerine, onları en doğru görüntü elde etmek için ultrason, odak noktası üzerinde ortalayın.
      1. Görüntü net görmek, jel ayarlamak ve herhangi bir hava kabarcıkları pamuk uç aplikatör ile kaldırmak için çok karanlık ise.
      2. Gerekirse, scanhead 45 ° sola veya sağa doğru eğin ve damar açıkça görmek için hayvan platformu yeniden ayarlayabilirsiniz. Scanhead ile girişim ise bu yapılır. Bu senaryoda, damar bir yan-dikişi önlemek için bir açıyla yansıması gerekir.
        Not: Görüntü paraziti en sık deri hayvan, zavallı yaranın dikiş yerleştirme veya ultrason jel kabarcıkları karanlık yamalar neden olur.
    8. Yazılımı kullanarak, istenen herhangi bir yapı fotoğraf çekmek ve herhangi bir ölçüm araçları kullanarak ölçüleri yapın. Ortak ölçümler kesiti trombüsü veya ligasyonu sayfanın genişliğini içerir.
    9. Kan akışı ölçümleri yapmak için nabız dalga Doppler görüntüleme modunu değiştirmek. Bu mod, vasküler kan akımı görüntüleme ve diğer değişkenler arasındaki akış hızı ölçümü sağlar.
    10. Hayvan arka sonu düşürmek için analiz platformu eğ.
    11. Hayvan posterior ucundan yaklaşık 30 ° açılı jel başvuracağım scanhead açısı/konumunu değiştirin.
    12. Hayvan platformu ve scanhead yeniden konumlandırın. IVC ve ligasyonu gerekirse yerini değiştirin.
    13. Kan akışı ölçümleri Staz onaylamak ve istenen herhangi bir fotoğraf çekmek için ligasyonu site yapmak. Ortalama hız, en yüksek hız veya medyan hız kan akımı ortak ölçümler.
    14. Herhangi bir ölçüm veya çekilen görüntüleri kaydedin.
  3. Temizlik ve hayvan kurtarma
    1. Pozisyon ilk ve hayvan platformu ilk konumuna de yeniden konumlandırmak için scanhead kaldırın.
    2. Gazlı bez hayvanla kapalı aşırı jel kaldırın. Yaranın dikiş değil yırtıldı yavaşça yapmak bu.
    3. Termometre hayvanın rektum kaldır ve hayvan platform kapalı alır.
    4. Hayvan onun kafes ve 34 ° C kuluçka makinesi yerleştirin.
    5. Hayvan Kurtarma kadar izlemek. Çok küçük ve non-invaziv bir yöntemdir. Hayvan hızla uyanacaksın. Şu günlerde bölümü 1,6 Bu protokol uyarınca hayvan izleme devam edin.
    6. Gazlı bez ve dezenfektan hayvan platformuyla temiz.
    7. Silme temiz gazlı bez ve distile su ile scanhead.
      Uyarı: Çok yavaşça scanhead temiz ve sadece distile su ile.
    8. 2 sonraki hayvan için yineleyin.
      1. Tüm konular ile yapılırsa, tüm resimler ve kayıtları kaydedildiğini doğrulayın. O zaman tüm ekipman ve yazılım kapatın.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Staz Venöz tromboz modeli

Staz modelindeki fareler anestezi ve inferior vena kava (IVC) ortaya çıkarmak için bir kesi yapılır. Sol veya sağ tarafına fare orta hat laparatomi ultrason sonda ile müdahale olmaz bir şekilde yerine belgili tanımlık kesme yapılır. Karın kasları ve cilt kat vardır geri IVC (şekil 1) ortaya çıkarmak için. İlk olarak, yan dallar bir 6-0 ipek sütür ile (Şekil 2) tane. Sonra IVC tarafından künt diseksiyon aort ayrılır ve ipek IVC (şekil 3A-C) yer alıyor. IVC 6-0 ipek sütür ile bakmaksızın. Tüp ligasyonu sitenin altındaki IVC dilatasyon kan akımı (şekil 3D) başarılı kesinti bir göstergesidir. Son olarak, Periton boşluğu ve cilt geri sürekli bir şekilde (şekil 3E) eserler.

Ultrasonografi kullanarak trombüsü oluşumu izleme

Daha önce gördüğümüz gibi klinik ayarları Venöz tromboz değerlendirmek için yaygın olarak kullanılır, yüksek frekans ultrason deneysel bir fare modeli zamanla trombüsü oluşumu ve çözünürlük ölçmek için kullanılabilir. Biz bir yüksek frekans mikro-görüntüleme sistemi12kullandık. Önce tüp ligasyonu, boyuna görünümünde IVC tespit edilebilir. Sonra ligasyonu damarın yordamı başarısı görüntülenmeyecektir. PW-Doppler modu kan akım hızı (34.8 mm/s) önce belirlemek için kullanılan ve (5.6 mm/sn) sonra ligasyonu. Olu_umu akan daha yoğun olduğu için kan, ultrasonografi, 24 saat sonra ligasyonu (şekil 4A) kullanarak IVC içinde kurulan trombüsü teşekkür ederiz. Ultrasonografi miktar Renkli Doppler kullanarak damarları kan akışında hız sağlar. Şekil 4B' de gösterildiği ven ligasyonu önce akışında ölçmek ve trombüsü oluşturulduğunda akışını kesintisinden sonra ligasyonu için teşekkür ederiz. Az 24 saat bizim laboratuvar göstermek 4.85 ± 0.22 mm2 ortalama trombüsü boyutunu verilerden ve 5,05 ± 0,47 mm2 ' de 48 saat (± SEM demek).

Figure 1
Şekil 1. Staz modeli: inferior vena kava ortaya çıkarmak için yordam. (A) karın fare saç saç dökücü krem kullanarak kaldırılır. (B) bir ilk kesi karın ve bir ikinci ventral bir (C) sol sol tarafında sağa doğru yapılır. (D) bir ıslak steril bakışları bağırsak exteriorize ve inferior vena kava (IVC) ve yan dal (SB) ortaya çıkarmak için kullanılır. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 2
Şekil 2. Staz modeli: yordam yan dal ligate. (A) Fuar IVC ve sütür ipek SB. (C) ligasyonu, SB. LRV altında yerleşimini SB. (B): sol renal ven. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 3
Şekil 3. Staz modeli: yordam inferior vena kava ligate. (A-B) Künt diseksiyon IVC aort ayırmak için. (C) dikiş ipek IVC altında yerleşimi. (D) IVC ligasyonu. IVC dilatasyon görülmektedir. (E karın kasları ve cilt ayrı olarak kapatılır. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Figure 4
Şekil 4. Ultrason Imaging'i kullanma trombüsü oluşumu izleme. Hemen sonra ve IVC ligasyonu sonraki 24 saat önce (a) temsilcisi ultrason görüntüleri. (B) temsilcileri görüntüleri kan akış hızı Renkli Doppler tarafından tasvir renk işleme kullanarak. Renk kodlu kan akışı aralığından Kırmızı Sarı için düşük akış yüksek tasvir için ölçek. Ve birleştirilmiş hayvanlarda akışı yokluğu renk yokluğunda tarafından tasvir edilir. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Staz modelini kullanarak başarılı Venöz trombüsü oluşumu için birkaç önemli adım vardır. Ven Trombozu indüksiyon daha inferior vena kava ve aort damarı çevreleyen yağ birikimi nedeniyle eski farelerde zordur. İdeal olarak, bu yordamı geçiren fareler 8 - 10 hafta çocuk olmalıdır. Büyük değil ikna etmek IVC endotel hasarı künt diseksiyon ve bağ sırasında için özen gösterilmelidir. Buna ek olarak, bu ameliyattan sonra en az 30 dakika 34 ° C kuluçka makinesine hayvan tutmak için ve yalnızca tam kurtarma sonra diğer hayvan şirkete iade etmek önemlidir. Ameliyat doğru yapıldığında, hayvanlar ameliyat sonrası bakım sırasında oldukça iyi davranır. Onlar ciddi hiçbir yan etkisi topallık, taraflidir veya idrar kaçırma gibi sergi. Onlar hemen ameliyat sonrası sınırlı hareket ve biraz Kambur duruş sergileyebilirler ama bu kez ağrı kesici etkilidir ve düzgün ameliyatı olarak görülmemektedir.

Staz modeli ile tekrarlanabilir boyut ölçüleri bir fareden başka bir büyük bir trombüsü üretir. Olduğu gibi insanlar, Venöz sistem anatomisi fareler arasında değişir ve IVC şube kesinti sayısında stenoz ve Staz modelleri DVT13,14ele almıştır. Brandt ve ark. gösterdi yan dalları yer yaşındayken akış kısıtlama tarafından indüklenen trombüsü oluşumu engellendi < IVC ligasyonu sitesinin 1.5 mm. Ancak, akış kısıtlama farelerde tarafından indüklenen DVT oluşumu yan dal ligasyonu13,15,16tarafından etkilenen değil. C57Bl6 fare zorlanma IVC yan dallarında değişkenliği IVC14tam ligasyonu tarafından indüklenen trombüsü oluşumu üzerinde önemli bir etkisi vardır Ayrıca bildirildi. Değil yan birleştirilmesi (ligasyon) ve birleştirilmiş yan dalları ile kontrollere göre istatistiksel olarak daha küçük pıhtı boyutuna dalları bulundu. Bizim çalışma de o ligasyonu yan dallar üretilen tutarlı trombüsü oluşumu ve boyutu öneririz. Ancak, en sık anatomik varyasyon C57Bl/6 2 arka varlığı (% 98'i fareler)14dalları olduğunu. Arka dalları kesintiye uğratmasını trombüsü boyutu üzerinde büyük bir etkisi vardır gösterilmiştir. Mevcut metodoloji kullanarak düşük sıcaklık koter kalemi14kesintiye arka dalları etkisini ele vermedi. Ancak, biz bu ligasyonu IVC ve yan gösterdi dalları tutarlı trombüsü oluşumu C57Bl/6 sonuçlandı. Son olarak, biz daha önce gösterdiği gibi yüksek frekans ultrason sistemi trombüsü boyutu hassas ölçüm sağlar ve trombüsü oluşumu ve çözünürlük12,13 uzun vadeli ve çevirim araştırmaları için kullanılabilir ,15.

Staz modelinin bir büyük dezavantaj trombüsü ve damar duvar maksimal etkisi intravenöz yönetilen ajanların azaltır kan akımı tam engeldir. Ne zaman bir farmakolojik Ajan etkisini test etmek isteyen bu önemli bir konu haline gelir. Bir özel uyuşturucu etkisi test edilmesi gerekiyorsa, bir stenoz modeli13 veya17elektrolitik modeli kullanarak tercih ederim. Her iki modelde DVT profilaksisi ve tedavisi için yeni Anti-koagulant ajanların test izin olu_umu sürekli kan akımı, huzurunda üretmek.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Yazarlar ifşa gerek yok.

Acknowledgements

Bu eser kalp ve inme Vakfı Kanada bir hibe ve Morris ve Bella Fainman Aile Vakfı tarafından desteklenmiştir. Yazarlar Veronique Michaud VEVO770 ultrason görüntüleme sistemi ile onun teknik yardım için teşekkür etmek istiyorum.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
6-0 perma-hand silk suture Ethicon 706G
Surgical Scissors Fine Science Tools 20830-00
Suture tying forceps Fine Science Tools 20830-00
blunt forceps (straight and curved) Fine Science Tools 20830-00
Needle Driver Fine Science Tools 13002-10
Moria Spring Scissors Fine Science Tools 15396-00
1ml syringes BD Biosciences
26G needles Becton Dickinson & Co.
VEVO 770 High Resolution Imaging System Visualsonics No longer sold
SR Buprenorphine ZooPharm Given to LDI by Vet
Surgery Microscope Leica Leica M651
Systan eye oinment Alcon 288/28062-0
2x2 sterile Gauze CDMV #104148
Cotton Tip Applicators from JGH
Transpore hypoallergenic surgical tape CDMV #7411
Ultrasound gel (Aquasonic-100) Dufort & Lavigne #AKEN4061
Incubator From JGH
Isoflurane Dispomed
Anesthetic chamber,hoses, and adminstration equipment Dispomed
Hair remover Nair
Water heated hard pad Braintree Scientific, Inc. #HHP-2
Gaymar heater water pump TP500 MATVET Inc. #R-500305
Infra-red heating lamp electrimat inc. #1R175R-PAR
Mouse rectal temperature prope emkaTECHNOLOGIES
Sterile water From JGH

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Fowkes, F. J., Price, J. F., Fowkes, F. G. Incidence of diagnosed deep vein thrombosis in the general population: systematic review. Eur J Vasc Endovasc Surg. 25, (1), 1-5 (2003).
  2. McGuinness, C. L., et al. Recruitment of labelled monocytes by experimental venous thrombi. Thromb Haemost. 85, (6), 1018-1024 (2001).
  3. Singh, I., et al. Failure of thrombus to resolve in urokinase-type plasminogen activator gene-knockout mice: rescue by normal bone marrow-derived cells. Circulation. 107, (6), 869-875 (2003).
  4. Itoh, K., Ieko, M., Hiraguchi, E., Kitayama, H., Tsukamoto, E. In vivo kinetics of 99mTc labeled recombinant tissue plasminogen activator in rabbits. Ann Nucl Med. 8, (3), 193-199 (1994).
  5. Kang, C., Bonneau, M., Brouland, J. P., Bal dit Sollier, C., Drouet, L. In vivo pig models of venous thrombosis mimicking human disease. Thromb Haemost. 89, (2), 256-263 (2003).
  6. Knight, L. C., Baidoo, K. E., Romano, J. E., Gabriel, J. L., Maurer, A. H. Imaging pulmonary emboli and deep venous thrombi with 99mTc-bitistatin, a platelet-binding polypeptide from viper venom. J Nucl Med. 41, (6), 1056-1064 (2000).
  7. Wakefield, T. W., et al. Venous thrombosis prophylaxis by inflammatory inhibition without anticoagulation therapy. J Vasc Surg. 31, (2), 309-324 (2000).
  8. Robins, R. S., et al. Vascular Gas6 contributes to thrombogenesis and promotes tissue factor up-regulation after vessel injury in mice. Blood. 121, (4), 692-699 (2013).
  9. Aghourian, M. N., Lemarie, C. A., Bertin, F. R., Blostein, M. D. Prostaglandin E synthase is upregulated by Gas6 during cancer-induced venous thrombosis. Blood. 127, (6), 769-777 (2016).
  10. Laurance, S., et al. Gas6 (Growth Arrest-Specific 6) Promotes Inflammatory (CCR2hiCX3CR1lo) Monocyte Recruitment in Venous Thrombosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. (2017).
  11. Diaz, J. A., et al. Critical review of mouse models of venous thrombosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32, (3), 556-562 (2012).
  12. Aghourian, M. N., Lemarie, C. A., Blostein, M. D. In vivo monitoring of venous thrombosis in mice. J Thromb Haemost. 10, (3), 447-452 (2012).
  13. Brandt, M., et al. Deep vein thrombus formation induced by flow reduction in mice is determined by venous side branches. Clin Hemorheol Microcirc. 56, (2), 145-152 (2014).
  14. Diaz, J. A., Farris, D. M., Wrobleski, S. K., Myers, D. D., Wakefield, T. W. Inferior vena cava branch variations in C57BL/6 mice have an impact on thrombus size in an IVC ligation (stasis) model. J Thromb Haemost. 13, (4), 660-664 (2015).
  15. Luther, N., et al. Innate Effector-Memory T Cell Activation Regulates Post-Thrombotic Vein Wall Inflammation and Thrombus Resolution. Circ Res. (2016).
  16. Subramaniam, S., et al. Distinct contributions of complement factors to platelet activation and fibrin formation in venous thrombus development. Blood. 129, (16), 2291-2302 (2017).
  17. Diaz, J. A., et al. Thrombogenesis with continuous blood flow in the inferior vena cava. A novel mouse model. Thromb Haemost. 104, (2), 366-375 (2010).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics