메뚜기 벨 Sensilla Basiconica에 대 한 단일 Sensillum 녹음

이 절차의 전반적인 목표는 곤충 손바닥 Sensilla Basiconica에서 단일 센실럼 기록을 만들기 위한 상세하고 매우 효과적인 프로토콜을 도입하는 것입니다. 숙달되면 해부 화학수용 분야의 핵심 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다. palp sensilla에 있는 특정한 냄새 물질 수용체의 허용에 의하여.

이것의 주요 장점은 손바닥의 메뚜기의 레코더 Sensilla Basiconia를 사용한다는 것입니다. 텅스텐 전극을 준비하려면 먼저 새 텅스텐 와이어를 마이크로 매니퓰레이터에 연결하고 40 배 배율로 관찰하십시오. 이제 주사기를 사용하여 10% 아질산나트륨을 도포하는 동안 10볼트를 와이어에 전달하여 와이어를 날카롭게 합니다.

그런 다음 전력을 5볼트로 줄이고 1분 이상 날카로운 와이어를 4mm의 아질산나트륨 용액에 반복적으로 담그십시오. 사용할 때 팁은 메뚜기 손바닥 후각 감각의 표피를 관통할 수 있을 만큼 충분히 미세해야 합니다. 다음으로 자극 용액을 준비합니다.

각 화학 자극 물질을 미네랄 오일에 희석하십시오. 미네랄 오일에 1-Nonanol 및 Nonanoic acid를 10% 희석합니다. 그런 다음 미네랄 오일에서 E-2-Hexenal 및 Hexanal의 일련의 10 배 연속 희석을 만듭니다.

다음으로 자극이 담긴 파스퇴르 튜브를 준비합니다. 여과지 스트립을 튜브에 삽입하고 희석된 자극 용액 10마이크로리터를 여과지 스트립에 추가합니다. 그런 다음 1밀리리터 피펫 팁으로 튜브를 꽂습니다.

녹음에서 유리 슬라이드, 플라스틱 조각, 커버 슬립 및 양면 테이프 및 고무 테이프로 메뚜기 상악 손바닥 홀더를 만듭니다. 양면 테이프를 사용하여 플라스틱 조각을 슬라이드 모서리에 부착한 다음 다른 테이프 조각을 사용하여 커버 슬립을 플라스틱 조각에 부착합니다. 그런 다음 커버 유리에 작은 빨간색 고무 테이프를 부착하여 미끄럼 방지 표면을 만듭니다.

그런 다음 테이프를 사용하여 플랫폼의 내부 가장자리와 평행하게 1.5mm 텅스텐 와이어를 연결하고 와이어의 양쪽 끝을 플랫폼에 고정합니다. 이것으로 홀더가 완성됩니다. 신선한 밀 묘목과 60 % 습도, 섭씨 28-30도, 18 시간 광주기로 메뚜기를 기릅니다.

안테나를 수집하려면 1일에서 3일 된 다섯 번째 instar 메뚜기 애벌레를 선택하십시오. 녹음을 방해하지 않도록 가는 가위를 사용하여 안테나를 제거하십시오. 메뚜기를 고정하려면 수직으로 1/2로 자른 1.5mm 튜브를 사용하십시오.

배쪽 부위와 메뚜기의 머리를 노출시킵니다. 그런 다음 메뚜기와 튜브를 양면 접착 테이프로 유리 슬라이드에 고정합니다. 그런 다음 오른쪽 상악 손바닥을 당겨 플랫폼에 놓습니다.

텅스텐 와이어를 손바닥의 네 번째 부분에 놓습니다. 이제 텅스텐 와이어를 상악 손바닥에서 약 2mm 떨어진 파란색 태프트 퍼티로 둘러쌉니다. 센티미터 메뚜기 상악 palp holder로 플랫폼을 가장 적절하게 설정하고 텅스텐 와이어를 사용하여 4 개의 세그먼트 또는 palp를 구성하는 것이 중요합니다.

이제 100% 배율로 준비물을 보고 손바닥을 기록 전극에 수직으로 배치합니다. 다음으로, 마이크로 매니퓰레이터를 사용하여 텅스텐 기준 전극을 메뚜기 눈에 삽입합니다. 그런 다음 기록 전극을 상악 손바닥 가까이로 이동합니다.

다음으로 냄새 전달 장치를 상악 손바닥에서 약 1cm 떨어진 곳에 배치합니다. 이제 녹음 소프트웨어를 열고 녹음 매개변수를 설정합니다. 기록 스케일의 경우 500마이크로볼트를 사용합니다.

필터의 높은 컷오프의 경우 300헤르츠를 사용하십시오. 낮은 컷오프를 200헤르츠로 설정하고 사전 트리거를 10초로 설정합니다. 이제 현미경을 고배율로 전환하고 기록 전극을 상악 손바닥의 기저부 센실럼 바닥에 삽입합니다.

그런 다음 좋은 자발적 스파이크를 얻기 위해 기록 전극을 섬세하게 조정합니다. 기록 전극이 감각의 기저부로 침투하는 것이 매우 중요하며, 일단 감각으로 들어가면 감각으로 준비되는 것이 매우 중요합니다. 이제 자극 컨트롤러를 열어 초당 20mm의 속도로 연속적인 기류를 전달합니다.

다음으로, 자극 시간을 1초로 설정하고 자극 펄스가 시작되기 10초 전부터 10초 동안 신호를 기록합니다. 이제 데이터를 수집합니다. 메뚜기 상악 손바닥에 있는 두 가지 sensilla 아형은 화학 자극제인 1-Nonanol 및 Nonanoic acid에 대한 반응 역학에 따라 구별할 수 있었습니다.

식품 공급원에서 자연적으로 발생하는 냄새 물질인 Hexanal 및 E-2-Hexanal은 메뚜기 손바닥 개방 반응을 유발할 수 있습니다. 이에 대한 응답으로 E-2-Hexanal pb1 뉴런은 더 긴 활동 전위를 가지고 있습니다. 자극 전 5초 동안 스파이킹의 평균 변화를 자극 후 5초에 비교하면 1-Nonanol에 대한 반응이 pb1 뉴런의 Nonanoic acid 보다 훨씬 높다는 것을 알 수 있습니다.

그리고 그 반대의 경우는 pb2 뉴런에 해당됩니다. E-2-Hexenal 및 Hexanal에 대한 이러한 뉴런의 반응도 용량에 따라 다릅니다. 두 가지 뉴런 유형은 E-2-Hexenal에 대한 용량 반응 패턴이 다르지만 헥사날에 대한 반응은 대부분 동일합니다.

이 비디오를 시청한 후에는 메뚜기 손바닥 Sensilla Basonica에서 매우 효과적인 단일 센실라 녹음을 수행하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 일단 숙달되면 제대로 수행되면 기술을 수행 할 수 있습니다. 이 절차를 시도할 때는 기록 전극이 센실럼 기저부에 삽입될 때부터 손바닥의 튜브를 삽입하는 것이 중요합니다.

이 발달 후에 곤충 생리학의 분야에 있는 연구를 위한 길을 닦았다 및 입 부분에 있는 비세포 후각의 세포질 기계장치에 대