Temporele analyse van de nucleaire-naar-cytoplasmatische translocatie van een Herpes Simplex Virus 1 eiwit door immunefluorescentie confocale microscopie

Immunology and Infection

Your institution must subscribe to JoVE's Immunology and Infection section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

ICP0 ondergaat nucleaire-naar-cytoplasmatische translocatie tijdens HSV-1 infectie. Het moleculaire mechanisme van deze gebeurtenis is niet bekend. Hier beschrijven we het gebruik van de confocal microscoop als een hulpmiddel om te kwantificeren ICP0 beweging in HSV-1 infectie, die de basis legt voor het kwantitatief ICP0 translocatie in toekomstige mechanistische studies te analyseren.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Samrat, S. K., Gu, H. Temporal Analysis of the Nuclear-to-cytoplasmic Translocation of a Herpes Simplex Virus 1 Protein by Immunofluorescent Confocal Microscopy. J. Vis. Exp. (141), e58504, doi:10.3791/58504 (2018).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Geïnfecteerde cel eiwitten 0 (ICP0) van herpes simplexvirus (HSV-1) 1 is een onmiddellijke vroege eiwit met een RING-type E3 ubiquitin ligase. Het is verantwoordelijk voor de afbraak van de remmen van host beperkende factoren en de activering van latere virale gen. ICP0 bevat een reeks canonieke nucleaire localisatie (NLS). Het komt de kern onmiddellijk na DOVO synthese en voert haar anti-host defense functies voornamelijk in de kern. Echter verderop in infectie, is ICP0 aangetroffen uitsluitend in het cytoplasma, het voorkomen van een nucleaire-naar-cytoplasmatische translocatie tijdens HSV-1 infectie. Vermoedelijk kan ICP0 translocatie ICP0 te moduleren van haar functies aanroept volgens haar subcellular locaties op verschillende infectie fasen. Om het af te bakenen de biologische functie en regelgevende mechanisme van ICP0 nucleaire-naar-cytoplasmatische translocatie, bewerkt we een immunefluorescentie microscopie methode voor het controleren van de ICP0 handel tijdens HSV-1 infectie. Dit protocol omvat immunefluorescentie kleuring, confocal microscoop beeldapparatuur en nucleaire vs. cytoplasmatische distributie analyse. Het doel van dit protocol is te passen de steady-state confocal opnamen in een tijdsverloop in een kwantitatieve documentatie ICP0 verkeer gedurende de lytische infectie. Wij stellen voor dat deze methode kan worden gegeneraliseerd om nucleaire vs. cytoplasmatische lokalisatie van andere virale of cellulaire eiwitten kwantitatief te analyseren zonder tussenkomst van levende imaging technologie.

Introduction

Herpes simplexvirus (HSV-1) 1 zorgt ervoor dat een breed scala van milde tot ernstige herpetic ziekten zoals herpes labialis, genitale herpes, stromale keratitis en encefalitis. Eenmaal besmet, wordt het virus een levenslang latente infectie in ganglia neuronen. Soms kan het virus worden gereactiveerd door diverse redenen zoals koorts, stress en immuun onderdrukking1, leiden tot recidiverende herpes infectie. Geïnfecteerde cel eiwitten 0 (ICP0) is een belangrijke virale regelgever cruciaal voor zowel lytische en latente infectie van de HSV-1. Het transactivates stroomafwaarts virus genen via het tegengaan van de host intrinsieke/aangeboren antivirale verdedigingen2,3. ICP0 heeft een E3 ubiquitin ligase activiteit, die gericht is op verschillende factoren van de cel voor proteasoom-afhankelijke degradatie3. Het interageert ook met verschillende trajecten van de cel om hun activiteiten te reguleren en vervolgens ter compensatie van de host antivirale beperkingen3. ICP0 is bekend om te zoeken op verschillende subcellular compartimenten naarmate de infectie3,4,5 vordert. Het eiwit heeft een lysine/arginine-rijke nucleaire localisatie signaal (NLS) gelegen op residuen 500 naar 5066. Bij DOVO synthese op vroege infectie van de HSV-1, is ICP0 direct geïmporteerd in de kern. Het wordt eerst gedetecteerd bij een dynamiek van nucleaire structuur genoemd nucleaire domein 10 (ND10)7. De E3 ubiquitin ligase activiteit van ICP0 activeert de afbraak van ND10 organisator eiwitten, promyelocytic leukemie (PML) eiwitten en gespikkelde eiwit 100 kDa (Sp100)8,9,10. Na het verlies van eiwitten van de organisator, ND10 nucleaire organen zijn verspreid en ICP0 wordt verspreid om te vullen de hele kern4,11.

Interessant, na het begin van virale DNA replicatie verdwijnt ICP0 uit de kern. Het is uitsluitend gevonden in het cytoplasma, suggereert de aanwezigheid van een nucleaire-naar-cytoplasmatische translocatie laat in HSV-1 infectie4,12. De eis van de DNA-replicatie impliceert de mogelijke betrokkenheid van een late virale expressie gebrachte eiwitten bij het vergemakkelijken van de cytoplasmatische translocatie van HSV-1 ICP04,12. Blijkbaar ICP0 handel tussen verschillende compartimenten tijdens infectie machtigt ICP0 te differentiëren van de interacties aan verschillende cellulaire routes in een ruimtelijke-temporele mode, en daarom coördinaat zijn meerdere functies te fine tunen het evenwicht tussen de lytische en latente HSV-1 infectie13. Om beter te begrijpen ICP0 multifunctionaliteit en de coördinatie van de functionele domeinen ICP0 gedurende de lytische infectie, ontleed we zorgvuldig de moleculaire basis van de dynamische ICP0 translocatie12. Om uit te voeren het mechanistisch onderzoek eerder gemelde12, hebben we een immunefluorescentie kleuringstechniek om te visualiseren subcellular localisatie van de ICP0 op verschillende infectie status onder confocal microscoop toegepast. We hebben ook een kwantitatieve protocol om te analyseren de nucleaire vs. cytoplasmatische verdeling van ICP0 met behulp van de confocal software ontwikkeld. De bevolking van HSV-1 besmette cellen was tabelvorm tijdens de fasen van de infectie en de trends van de ICP0 beweging werden geanalyseerd, onder verschillende biochemische behandelingen12. Hier beschrijven we het gedetailleerde protocol dat documenten ICP0 translocatie in HSV-1 infectie. Wij stellen voor dat deze methode kan worden vastgesteld als een algemene methode om te studeren van de nucleaire vs. cytoplasmatische translocatie voor andere virale of cellulaire eiwitten, die als alternatief dienen kan voor levende imaging wanneer de levende imaging techniek niet van toepassing is vanwege is problemen zoals het labelen van de methode, signaal intensiteit of eiwit overvloed.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. cel zaaien en virusinfectie

  1. 20 – 24 uur voordat de virusbesmetting, seed 5 x 10,4 van menselijke embryonale Long (HEL) fibroblast cellen of andere cellen worden onderzocht op een dia 4-well 11 mm gespreid in groeimedium (Dulbecco van bewerkt Eagle Medium (DMEM) aangevuld met 10% foetale runderen serum (FBS)). Incubeer de cellen bij 37 ° C met 5% kooldioxide (CO2).
    Opmerking: Elk goed moet hebben 70-80% cel confluentie ten tijde van infectie.
  2. Verwijder het groeimedium op de volgende dag, en de cellen met virussen in Medium-199 op een reeks van 4-10 pfu/cel infecteren. Incubeer virus-geïnfecteerde cellen gedurende 1 uur bij 37 ° C. Houd de dia schudden tijdens de incubatieperiode.
  3. Na de incubatie 1 h Medium-199 verwijderen en aan te vullen met groeimedium.
    Opmerking: Medicijnen die met verschillende infectie fasen interfereren kunnen worden toegevoegd vóór de virale absorptie of bij deze stap.
  4. Incubeer de virus-geïnfecteerde cellen bij 37 ° C met 5% CO2 voor verschillende lengtes van de periode van de infectie.

2. fixatie en Permeabilization

  1. Tegelijkertijd goede infectie snel wassen van de geïnfecteerde cellen met fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) 3 keer en toevoegen van 200 μL van 4% paraformaldehyde vers bereid in PBS. Incubeer de cellen met paraformaldehyde gedurende 8-10 minuten bij kamertemperatuur te lossen van de cellen in elk putje.
  2. Paraformaldehyde gecombineerd en was de putjes met 200 μL van PBS voor 3 keer. Volledig gecombineerd PBS na de 3rd wassen.
  3. Voeg 100 μl van 0,2% niet-ionogene oppervlakteactieve stof aan elk putje te permeabilize van de cellen voor 5-10 min.
  4. De niet-ionogene oppervlakteactieve stof gecombineerd en was de putjes met 200 μL van PBS voor 3 keer.

3. immunefluorescentie kleuring

  1. Volledig gecombineerd PBS en voeg 200 l blokkeerbuffer (1% bovien serumalbumine (BSA) en 5% paard serum in PBS) in elk putje en bij kamertemperatuur gedurende 1 uur, of bij 4 ° C na een nacht bebroeden.
  2. Voeg experimenteel bepaalde concentratie van primair antilichaam (konijn anti-ICP0 polyclonal antilichaam12) in de blokkeerbuffer en na een nacht bebroeden primair antilichaam bij kamertemperatuur gedurende 2 uur of bij 4 ° C.
  3. Wassen met een blokkeerbuffer 3 keer met 10 min incubatie. Toevoegen van Alexa 594-geconjugeerde geit anti-konijn secundair antilichaam (1:400 verdund in blokkeerbuffer) en de dia's bij kamertemperatuur gedurende 1 uur uit te broeden. Daarna wassen de dia's 3 keer met een blokkeerbuffer met 10 min interval.
  4. Tot slot wassen de dia een keer met PBS residuele BSA en paard serum te verwijderen.
  5. Voeg één druppel antifade montage medium met 4', 6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) te monteren van de dia en verzegel het met een dekglaasje aan met doorzichtige nagellak.

4. confocal Imaging

  1. Met een confocal microscoop, vastgesteldop de golflengte 590 – 650 nm voor Alexa 594 en 410-520 nm voor DAPI. Selecteer afbeeldingsformaat bij 1024 x 1024 en lijn gemiddelde van 8 te verwerven van hoge resolutiebeelden.
  2. Elk putje op de dia 4-well onder confocal microscoop te analyseren. Verwerven representatieve cel beelden onder de 100 X doelstelling, zoals aangegeven in Figuur 1 en Figuur 2.
  3. Voor het tellen van groot aantal cellen, beelden van opeenvolgende velden onder de 40 X doelstelling op te nemen.
    Opmerking: Het vereist 5 – 10 beelden te accumuleren van meer dan 200 geïnfecteerde cellen van elk punt van de tijd van elke infectie.
  4. In elk experiment, foto's nemen met constante confocal parameters voor alle monsters moeten worden vergeleken.

5. het analyseren van nucleaire vs. cytoplasmatische distributie

  1. Open project met de confocal toepassingssoftware. Selecteer een afbeelding waaruit cellen moeten worden tabelvorm voor nucleaire vs. cytoplasmatische distributie van ICP0.
  2. Klik op het tabblad "Hoeveelheid" uit het bovenste menu en selecteer "sorteren ROIs" uit het menu Extra.
  3. Een longitudinale lijn aanzuigen en de cel die moet worden geanalyseerd door het selecteren van de "Grens" van hoogste menu.
    Opmerking: Histogram wordt weergegeven waaruit de intensiteit van de fluorescentie langs de lijn voor zowel de ICP0 als de DAPI. In het histogram, blauwe lijn vertegenwoordigt DAPI pixels en markeert de grens van de kern dat de rode lijn ICP0 pixels vertegenwoordigt.
  4. Gebaseerd op achtergrondkleuring, instellen van een constante drempel voor ICP0 intensiteit te analyseren ICP0 subcellular distributie in elk experiment.
    1. Zoals wordt geïllustreerd Figuur 2, als de rode signaal gemiddeld lager is dan de drempel in de nucleaire regio maar boven de limiet ligt buiten de blauwe grens, categoriseren van het rode signaal als voornamelijk gelegen in het cytoplasma.
    2. Als het rode signaal hoger dan de drempel in de kern en daarbuiten de grens van het blauwe signaal is, groepeert u het rode signaal als nucleus plus cytoplasmatische lokalisatie.
    3. Als het rood signaal boven de drempel in de kern is, maar gemiddeld lager dan het buiten de grenzen van het blauwe signaal is, groepeert u het rode signaal als nucleaire localisatie.
  5. Meer dan 200 geïnfecteerde cellen van elk monster tabulate tegelijkertijd verschillende infectie en plot in staafdiagram om te illustreren ICP0 verkeer volgens tijd (Figuur 3).

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Om te begrijpen van de basis voor moleculaire en biologische functies van de ICP0 handel tijdens HSV-1 infectie, gebruiken we een immunefluorescentie microscopie methode om te analyseren ICP0 subcellular distributie op verschillende infectie fasen. Figuur 1 toont de representatieve cellen met kenmerkende ICP0 localisatie naarmate de infectie vordert. Om te kwantificeren van de nucleaire-naar-cytoplasmatische translocatie van ICP0, analyseren we ICP0 distributie ten opzichte van de kern door het categoriseren van geïnfecteerde cellen in drie groepen: nucleaire localisatie, cytoplasmatische lokalisatie en nucleaire plus cytoplasmatische lokalisatie () Figuur 2). Om te begrijpen voor het ICP0 handel tijdens infectie vereiste elementen, volgen wij ICP0 bewegingen in wild type of mutant HSV-1 bij infectie van de verschillende fasen. Figuur 3 toont een voorbeeld van de tab resultaten voor subcellular verdeling van ICP0 op verschillende tijdstip van infectie.

Figure 1
Figuur 1: dynamische handel in ICP0 tijdens HSV-1 infectie. HEL cellen geteeld op 4-well dia's waren besmet met prototype HSV-1 (stam F) bij 10 pfu/cel. Op 1, 5 en 9 h post infectie (hpi), werden cellen vastgesteld, permeabel, gereageerd op konijn anti-ICP0 en muis anti-PML primaire antilichamen en vervolgens gereageerd op Alexa 594-geconjugeerde anti-konijn en Alexa 488-cojugated anti-muis secundaire antilichamen voor Imaging onder 100 X doelstellingen. Promyelocytic leukemie (PML) eiwit fungeert als een marker eiwit voor ND10 nucleaire organen, die op 5 en 9 hpi als gevolg van PML afbraak in de infectie verdwijnt. Schaal bar = 10 µm. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

Figure 2
Figuur 2: analyse van ICP0 subcellular distributie. Linker paneel: met een confocal microscoop, representatieve cellen werden vergroot de longitudinale lijn getrokken over de cel waarin de regio van belang (ROI) wilt weergeven. Rechter paneel: fluorescentie pixel intensiteiten in ROI werden gekwantificeerd voor zowel de ICP0 als de DAPI in afzonderlijke cellen en geïllustreerd als histogrammen door de confocal toepassingssoftware. Een willekeurige drempel (groene lijn) was ingesteld om na te denken de achtergrondkleuring. Schaal bar = 10 µm. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

Figure 3
Figuur 3: Percentage van subcellular distributie voor wild-type en C-terminal afgekapt ICP0. HEL cellen besmet waren door recombinante virussen met wild-type ICP0 (ICP0 WT) of C-terminal afgekapt ICP0 (ICP0 C-PST-bestanden) bij 4 pfu/cel. Op de aangegeven tijd punten, werden cellen gekleurd en geanalyseerd zoals hierboven beschreven. Meer dan 200 cellen werden tabelvorm voor ICP0 locatie. Percentage van cellen met nucleaire, cytoplasmatische of nucleaire + cytoplasmatische ICP0 waren die zijn getekend met een werkblad berekening software. Dit is een voorbeeldige experiment om te laten zien dat u deze methode gebruikt, we hebben geconstateerd dat ICP0 C-terminus een domein vereist voor ICP0 nucleaire-naar-cytoplasmatische translocatie. Klik hier voor een grotere versie van dit cijfer.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Dit protocol is gebruikt voor het bestuderen van de nucleaire-naar-cytoplasmatische translocatie van HSV-1 ICP0. ICP0 ondergaat subcellular handel tijdens HSV-1 infectie (Figuur 1). Waarschijnlijk, ICP0 communiceert met verschillende trajecten van de cel voor het uitvoeren van verschillende functies op verschillende locaties. Hierdoor ICP0 te fine-tunen van haar veelvoudige functies in de krachtmeting met menselijke gastheer13. Echter, hoe ICP0 coördineert de veelvoudige functies in een ruimtelijke-temporele wijze is niet goed onderzocht. Met het protocol van de fluorescent microscopie, hierboven beschreven, zijn we begonnen met het analyseren van de moleculaire basis van ICP0 nucleaire-naar-cytoplasmatische translocatie. Vanaf nu, we hebben geconstateerd dat de ICP0 C-terminal 35 aminozuren als een vereist element belangrijk voor deze translocatie. Bij het ontbreken van C-terminus, is ICP0 gefixeerd in de kern in de hele infectie (Figuur 3). We hebben ook geconstateerd dat een ICP0 E3 ligase-afhankelijke nucleaire retentie kracht vertragingen de nucleaire-naar-cytoplasmatische translocatie in U2OS cellen12. Bovendien hebben we ontdekt dat ICP0 C-terminus en de uitdrukking van late virale eiwitten samenwerken om te overwinnen de nucleaire retentie en cytoplasmatische translocatie12vergemakkelijken. Op dit moment zijn we met behulp van dit protocol aan het scherm voor de late virale eiwitten die betrokken zijn in de ICP0 nucleaire-naar-cytoplasmatische translocatie.

Het protocol werd aanvankelijk ontwikkeld om te bestuderen de dynamische handel in ICP0 in HSV-1 infectie. Zoals aangegeven in Figuur 1, vroeg in de infectie van de HSV-1, is ICP0 colocalized met ND10, waar verschillende belangrijke onderdelen van cellulaire beperkende factoren en ND10 onderdelen zoals PML en Sp1008, zijn gedegradeerd. Na de vernederende ND10 belangrijke bestanddelen, ICP0 diffundeert in de kern en laat infectie, ICP0 is translocated naar het cytoplasma. Omdat ICP0 DOVO synthese na infectie ondergaat, de eerste eiwit abundaties zeer laag is en vervolgens een robuuste virale synthese zal snel verbergen het verkeer van elke afzonderlijke moleculen, waardoor het moeilijk om te volgen met behulp van een enkel molecuul levende imaging technologie. Daarom kozen we bewust voor niet te gebruiken levende imaging. In plaats daarvan hebben wij aangenomen het bovenstaande protocol om te bestuderen van de lokalisatie van de steady-state ICP0 op verschillende infectie punten, die ons diende goed in het bijhouden van de temporele beweging van de ICP0 in een populatie van HSV-1 besmette cellen.

Voor een hoge verhouding van de signaal-naar-achtergrond in confocale analyse zijn twee essentiële stappen opmerkelijk in het natte-bench deel van dit protocol. Eerst, de 4-well gespreide dia's kunnen meerdere monsters worden behandeld op één enkele dia. Het bespaart enorm het gebruik van kostbare reagentia zoals virussen en antilichamen. Echter, omdat het volume gehouden in elk putje zo klein is, residuele buffer niet volledig gewist tijdens buffer wijzigingen kan interfereren met de latere reagens. Daarom, in elke buffer switch, een grondige aspiratie is nodig voordat de nieuwe buffer wordt toegevoegd. Ten tweede, op basis van onze ervaringen, de omvang van het crosslinking en membraan permeabiliteit van de cel is belangrijk voor de duidelijkheid van de fluorescentie signalen. We hebben een empirische aantal 10 min. voor zowel paraformaldehyde en nonionic oppervlakteactieve stof behandelingen instellen. We vonden destijds veel langer of korter dan 10 min. de verhouding van signaal-naar-achtergrond kan afnemen. Zoals aangegeven in Figuur 1 en Figuur 2, alsmede in een eerdere studie12, zijn beelden verkregen in onze experimenten glashelder. De prominente blauwe signaal dat duidelijk de nucleaire grens schetst is de sleutel tot het bepalen van de subcellular verdeling van ICP0. In de computationele deel van dit protocol is een cruciale stap het instellen van een constante drempel te elimineren van de achtergrond. Een succesvolle kleuring met hoge signaal-naar-achtergrond-ratio is de sleutel tot een lagere drempel lijn en beter signaal contrast. Houden een constante drempel voor alle monsters in hetzelfde experiment, echter is de basis voor het kwantitatieve documentatie van ICP0 (Figuur 2 en Figuur 3).

Het protocol kan ook dienen als een algemeen hulpmiddel om te studeren subcellular handel voor andere virale of cellulaire eiwitten wanneer een geschikte levende imaging methode ontbreekt. Cellen worden in levende imaging techniek gehouden op optimale fysiologische omgeving om14,15van de metabole status van de cel. Een basisvoorwaarde voor levende cellen imaging wil fluorescently label het doel-eiwit, dat kan worden bereikt door het smelten van het target-eiwit met een fluorescerende label16, of om te leveren van een fluorophore geconjugeerd molecule specifiek voor de proteïne van de target17 . In beide gevallen kunnen problemen stijgen als de fusie van fluorescerende tag eigenschap target-eiwitten verandert of fluorophore geconjugeerd molecule heeft moeite om over te steken van de celmembraan. Photobleaching die celschade in het proces veroorzaakt is een extra zorg in levende imaging18. Nieuwe strategieën om te overwinnen de beperking van levende imaging blijven daarom de grens van technologische ontwikkeling. Het protocol we hier beschreven biedt tijdelijke analyse van de steady-state confocal beelden, die als een alternatief instrument dienen kunnen als een goede live beeldvorming methode niet beschikbaar is. De methode is eenvoudig en betrouwbaar. Het biedt duidelijke detectie van eiwit subcellular localisatie met minimale achtergrond. Confocale softwarematig, kunnen we kwantitatief het percentage cellen met verschillende distributies van het target-eiwit in een celpopulatie analyseren en documenteren van het verkeer van doel eiwit in verschillende cel fasen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

De auteurs hebben niets te onthullen.

Acknowledgements

Wij danken de financiële steun van een toegekende aan Haidong Gu NIH-subsidie (RO1AI118992). Wij danken de microscopie, Imaging & Cytometry middelen (MICR) Core faciliteit aan de Wayne State University voor technische ondersteuning.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Cells and viruses
Human Embryonic Lung fibroblasts (HEL Cells) Dr. Thomas E. Shenk (Princeton University) HEL cells were grown in DMEM supplemented with 10% FBS
HSV-1 viral Stock (Strain F) Dr. Bernard Roizman Lab
Medium
Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM) Invitrogen  11965-092
Fetal Bovine Serum (FBS) Sigma F0926-500ml
Medium-199 (10x) Gibco 11825-015
Reagents
4- well 11 mm staggered slide Cel-Line/Thermofisher Scientific  30-149H-BLACK
16% Paraformaldehyde solution(w/v) Methanol free Thermo Scientific 28908
Triton X-100 Fisher reagents BP151-1C0
Bovine Serum Abumin (BSA) Calbiochem CAS 9048-46-8
Horse Serum Sigma H1270
Phosphate Buffered Saline (PBS) (137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, pH7.4) Dr. Haidong Gu lab
NaCl       Fisher Bioreagent BP358-212
KH2PO4             Fisher Bioreagent BP362-500
KCl              Fisher Scientific  BP366-500
Na2HPO4              Fisher Bioreagent BP332-500
Blocking buffer (PBS with 1% BSA and 5% Horse serum ) Dr. Haidong Gu lab
Rabiit Anti-ICP0 antibody Dr. Haidong Gu lab
PML (PG-M3)-Mouse monoclonal IgG santa Cruz Biotechnology SC-966
Alexa Fluor 594-goat anti-rabbit IgG invitrogen A11012
Alexa Fluor 488-goat anti-mouse IgG invitrogen A11001
Vectashield Mouting medium with DAPI Vector laboratories H-1200
Pasteur pipette Fisher Brand 13-678-20D
Nail Polish Sally Hansen
Equipment
Confocal Microscope Leica SP8
Confocal Software Leica LAS X Application suite
Excel software Microsoft Excel
HERAcell 150i CO2 incubator Thermo Scientific Order code 51026282

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Whitley, R., Kimberlin, D. W., Prober, C. G., et al. Pathogenesis and disease. Human Herpesviruses: Biology, Therapy, and Immunoprophylaxis. Arvin, A., et al. Cambridge University Press. Cambridge, UK. (2007).
  2. Roizman, B., Knipe, D. M., Whitley, R. J., et al. Herpes simplex viruses. Fields' Virology. Knipe, D. M. 6th Edition, Lippincott-Williams & Wilkins. USA. 1823-1897 (2013).
  3. Gu, H. Infected cell protein 0 functional domains and their coordination in herpes simplex virus replication. World Journal of Virology. 5, (1), 1-13 (2016).
  4. Lopez, P., Van Sant, C., Roizman, B. Requirements for the nuclear-cytoplasmic translocation of infected-cell protein 0 of herpes simplex virus 1. Journal of Virology. 75, (8), 3832-3840 (2001).
  5. Kawaguchi, Y., Van Sant, C., Roizman, B. Herpes simplex virus 1 alpha regulatory protein ICP0 interacts with and stabilizes the cell cycle regulator cyclin D3. Journal of Virology. 71, (10), 7328-7336 (1997).
  6. Mullen, M. A., Ciufo, D. M., Hayward, G. S. Mapping of intracellular localization domains and evidence for colocalization interactions between the IE110 and IE175 nuclear transactivator proteins of herpes simplex virus. Journal of Virology. 68, (5), 3250-3266 (1994).
  7. Maul, G. G., Everett, R. D. The nuclear location of PML, a cellular member of the C3HC4 zinc-binding domain protein family, is rearranged during herpes simplex virus infection by the C3HC4 viral protein ICP0. Journal of General Virology. 75, (6), 1223-1233 (1994).
  8. Chelbi-Alix, M. K., de The, H. Herpes virus induced proteasome-dependent degradation of the nuclear bodies-associated PML and Sp100 proteins. Oncogene. 18, (4), 935-941 (1999).
  9. Zheng, Y., Samrat, S. K., Gu, H. A Tale of Two PMLs: Elements Regulating a Differential Substrate Recognition by the ICP0 E3 Ubiquitin Ligase of Herpes Simplex Virus 1. Journal of Virology. 90, (23), 10875-10885 (2016).
  10. Lanfranca, M. P., Mostafa, H. H., Davido, D. J. HSV-1 ICP0: An E3 Ubiquitin Ligase That Counteracts Host Intrinsic and Innate Immunity. Cells. 3, (2), 438-454 (2014).
  11. Zheng, Y., Gu, H. Identification of three redundant segments responsible for herpes simplex virus 1 ICP0 to fuse with ND10 nuclear bodies. Journal of Virology. 89, (8), 4214-4226 (2015).
  12. Samrat, S. K., Ha, B. L., Zheng, Y., Gu, H. Characterization of Elements Regulating the Nuclear-to-Cytoplasmic Translocation of ICP0 in Late Herpes Simplex Virus 1 Infection. Journal of Virology. 92, (2), e01673-e01617 (2018).
  13. Gu, H. What role does cytoplasmic ICP0 play in HSV-1 infection? Future Virology. 13, (6), (2018).
  14. Ettinger, A., Wittmann, T. Fluorescence live cell imaging. Methods Cell Biology. 123, 77-94 (2014).
  15. Frigault, M. M., Lacoste, J., Swift, J. L., Brown, C. M. Live-cell microscopy - tips and tools. Journal of Cell Science. 122, (6), 753-767 (2009).
  16. Chudakov, D. M., Lukyanov, S., Lukyanov, K. A. Fluorescent proteins as a toolkit for in vivo imaging. Trends in Biotechnology. 23, (12), 605-613 (2005).
  17. Teng, K. W., et al. Labeling proteins inside living cells using external fluorophores for microscopy. Elife. 5, e20378 (2016).
  18. Stephens, D. J., Allan, V. J. Light microscopy techniques for live cell imaging. Science. 300, (5616), 82-86 (2003).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

    Usage Statistics