Ayıklama ve Tayvanlı yeşil Propolis Analizi

JoVE Journal
Biochemistry

Your institution must subscribe to JoVE's Biochemistry section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

Biz etanol elde etmek ve antibakteriyel etkinliği sergileyen Tayvanlı yeşil propolis karakterize bir çözücü kullanmak için bir iletişim kuralı mevcut.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations | Reprints and Permissions

Chen, C. T., Chien, Y. H., Yu, Y. H., Chen, Y. W. Extraction and Analysis of Taiwanese Green Propolis. J. Vis. Exp. (143), e58743, doi:10.3791/58743 (2019).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

Tayvanlı yeşil propolis prenylated Flavonoidler zengin ve geniş bir antioksidan, antibakteriyel, gibi biyolojik etkinlikler ve antikanser olanlar sergiler. Propolins, yani C, D, F ve g Tayvanlı yeşil propolis, biyoaktif bileşiklerdir Tayvanlı yeşil propolis propolins konsantrasyonu sezon ve coğrafi konuma bağlı olarak değişir. Böylece, Tayvanlı yeşil propolis kalitesini belirlemek için bir standart ve tekrarlanabilir yordamı oluşturmak için önemlidir. Burada, etanol bazlı çıkarma, yüksek performanslı sıvı kromatografi ve antibakteriyel etkinliği analiz Tayvanlı yeşil propolis kalite karakterize etmek için kullanan bir iletişim kuralı mevcut. Bu yöntem % 95 ve % 99.5 etanol çekimi Tayvanlı yeşil propolis, böylece antibakteriyel özelliklere sahip propolins yüksek konsantrasyonları verimli üzerinden en fazla kuru madde verimi elde gösterir. Bu bulgularına göre mevcut Protokolü güvenilir ve Tayvanlı yeşil propolis kalitesini belirlemek için yinelenebilir sayılır.

Introduction

Propolis, arı türleri Apis melliferatarafından üretilen doğal bir reçine karışımdır. Propolis yaygın halk ilaçları içinde eski çağlardan beri kullanılmaktadır. Bir çalışmada son zamanlarda o propolis mikrobiyal enfeksiyonlar ve iltihap1önlemek için yararlı olduğunu bildirdi. Çok sayıda çalışma propolis ana biyoaktif bileşikler flavonoidler, fenolik asit esterleri, prenylated polduğunu göstermiştir-kumarik asit ve diterpenic asit2,3. Bugüne kadar yüksek performanslı sıvı kromatografi (HPLC)4,5,6,7ile 10 prenylated flavanone türevleri Tayvanlı yeşil propolis üzerinden tespit edilmiştir. Bunlar arasında en bol propolins C, D, F ve G5,7vardır. Tayvanlı yeşil propolis önemli biyolojik etkileri propolins8yüksek içeriği ile ilişkili.

Konsantrasyonlarda propolis biyoaktif bileşiklerin büyük sezon ve propolis alındığı coğrafi konuma bağlı olarak çeşitlilik gösterir. Avrupa propolis esas olarak flavonoid aglycone ve fenolik asitleri9içerir. Propolis Brezilya büyük biyoaktif bileşikler vardır prenylated p-kumarik asit, artepillin C10gibi. Bir çalışma sezonun Tayvanlı yeşil propolis11toplam propolin içeriğinde belirlenmesi için kritik bir faktör olduğunu gösterdi. Tayvanlı yeşil propolis propolin içeriğinde yaz (Mayıs - Temmuz) ve en düşük kış11' en yüksek. Propolis antibakteriyel özelliği yaygın olarak biyolojik aktivitesi bir göstergesi olarak kabul edilmiştir. Genel olarak, çeşitli bölgelerden toplanan propolis örnekleri benzer bir antibakteriyel özelliği sergiledik; Örneğin, genel olarak hemen hemen tüm gram pozitif bakterilere karşı etkilidir ve gram-negatif bakteri10,12,13karşı sınırlı bir antibakteriyel etkisi sergiler. Propolis flavonoidler arasındaki sinerjik etkileşim bir antibakteriyel etkisi14için gösterdi. Benzer şekilde, Tayvanlı yeşil propolis gram-pozitif bakteri15karşı antimikrobiyal etkisi olduğu bildirildi. Ayrıca, bir çalışma da propolins Tayvanlı yeşil propolis8etkileşimlerin bir antimikrobiyal etkisi tespit edilmiştir.

Propolis biyoaktif bileşikler karakterizasyonu zor çünkü onun kimyasal bileşimi özgün kaynak göre değişebilir. Bu nedenle, Tayvanlı yeşil propolis kalitesini belirlemek için mümkün ve yinelenebilir bir yöntem kurmak gereklidir. Ancak, standart bir prosedür Tayvanlı yeşil propolis çıkarma ve sonraki fonksiyonel analiz için kurulmuştur. Çeşitli organik ve inorganik maddeleri uygulamak birkaç yöntem için propolis ayıklama16,17,18,19,20önerilmiştir. Propolis lipofilik bir karışımı olduğu için çalışmalar organik ayıklama inorganik ayıklama8,18,19iyi olduğunu gösterdi. Tayvanlı yeşil propolis ve antibakteriyel özellikleri toplam propolin konsantrasyon Tayvanlı yeşil propolis kalitesini anahtar göstergeleri. Böylece, bu çalışmada etanol elde etmek ve Tayvanlı yeşil propolis antibakteriyel özellikleri karakterize bir çözücü kullanmak için bir protokol sunmaktır.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. hazırlık bileşiklerin etanol elde

  1. Arı kovanı Temmuz Mayıs Tayvan dan toplanmıştır, donmuş Tayvanlı yeşil propolis 10 g tartmak ve baharat değirmeni kullanarak eziyet. Bütün Tayvanlı yeşil propolis parçaları olmadan herhangi bir büyük parçacıklar ince bir toz zemine olduğundan emin olun.
  2. 100 mL etanol (% 60, % 70, %80, % 95 ve % 99.5) ve su şişe ayırmak ve her yere propolis konsantrasyonu 10 g ile karıştırmak için çeşitli konsantrasyonları ekleyin.
  3. 25 ° C'de kuluçkaya ve 48 h için 250 rpm'de şişeye sallamak.
  4. Filtre kağıdı ile 25 mikron gözenek boyutu ile etanol özleri filtre.
  5. Filtrates kendi özgün birime (100 mL) ile % 95 etanol volumetric flask kullanarak yeniden oluşturmak.
  6. Etanol özler-20 ° C'de depolayın
    Not: Protokol burada duraklatılmış.

2. HPLC için etanol özleri hazırlanması

  1. 10 mL etanol özler tarafından 15 dakika 40 ° C'de vakum buharlaşma konsantre ol.
  2. Kuru madde 24 h 45 ° C'de pişirin.
  3. Kuru madde 10 mL % 95 etanol ile yeniden oluşturma.
  4. 0,45 µm gözenek boyutu ile steril enjektör filtre kullanarak filtre 1 mL etanol ayıklar.
  5. Steril enjektör filtre ile bir 0,22 µm gözenek boyutu kullanarak etanol özler refilter. Filtrate toplanır ve doğrudan HPLC kullanılarak analiz edilebilir.

3. Propolin HPLC kullanarak içerik analizi

  1. Propolins standart eğrileri kurulması
    1. 88.8:11.2 (v/v) metanol: su solüsyonu mobil faz 1 L hazırlayın.
    2. Propolin seri dilutions standart (C, D, F ve G) konsantrasyonları hazırlamak (15,625 mg/mL, 31.25 mg/mL, 62,5 mg/mL ve 125 mg/mL, sırasıyla) mobil faz çözüm bir çözücü kullanarak.
    3. Propolin standart konsantrasyonları yüksek konsantrasyonu düşük konsantrasyon başlayarak sırayla ters fazlı sütuna 20 µL enjekte.
    4. 30 ° C ve 1 mL/dk akış hızı, HPLC sütun ayarlayın.
    5. Dalga boyu UV dedektörü için 280 ayarla nm ve kaydedici saat 20 dk.
    6. Analiz standartları en az 3 x.
    7. Ölçüm yanıt (y ekseni) konsantrasyonu (x ekseni) karşı komplo hesaplama kullanarak levha yazılım ve denklemi ve R-kare değeri ile standart bir eğri oluşturmak.
  2. Analizi etanol ayıklamak s
    1. Ters fazlı sütun içine adım 2.5 elde edilen etanol özler 20 µL enjekte.
    2. 30 ° C ve 1 mL/dk akış hızı, HPLC sütun ayarlayın.
    3. Dalga boyu UV dedektörü için 280 ayarla nm ve kaydedici saat 20 dk.
    4. Analiz standartları en az 3 x.
    5. Propolin her propolin için en yüksek alan kullanan adıma 3.1.7 elde edilen standart eğri için denklemi kullanarak etanol özü konsantrasyonu hesaplayın.

4. minimum inhibitör konsantrasyonu ve en az bakteri yok edici konsantrasyon Analizi

Not: Microdilution yöntemi etanol elde propolins Tayvanlı yeşil propolis üzerinden antibakteriyel etkinlik değerlendirmek için kullanılır.

  1. Test organizmalar hazırlanması
    1. Bakteri suşları, Staphylococcus aureus ve Escherichia coli, çözülme ve sonra onları tryptic soya suyu ve besin et suyu, sırasıyla, 24 h 37 ° C'de kültür.
    2. S. aureus tryptic soya suyu ve E. coli için iki kuşak besin suyu kullanarak kullanarak geçiş ve sonra bir agar plaka üzerinde tek tek kolonileri sayarak koloni oluşturan birimleri hesaplamak.
  2. Etanol hazırlanması için ayıklar antibakteriyel etkinliği testi
    1. Adım 1.5 vakum buharlaşma 40 ° C'de 15 dakika elde edilen etanol özleri konsantre.
    2. Dimetil sülfoksit (DMSO) ile Kuru madde sulandırmak ve özü 12,8 mg/ml konsantrasyonu ayarlayın.
    3. Bir seri seyreltme yapın (konsantrasyonları: 5, 10, 20, 40, 80, 160, 320 ve 640 µg/mL) etanol özleri suyu kullanarak.
  3. Minimum inhibitör konsantrasyon testleri
    1. 10 µL seyreltilmiş etanol özler 0.156 640.0 µg/mL arasında değişen bir 96-şey tabak ekleyin.
    2. Suyu kullanarak, 100 µL için ses seviyesini ve tüm dilutions % 5 DMSO korumak.
    3. Bakteri kültürü (1 x 106/mL) 100 µL 96-şey plaka aşılamak.
    4. 48 h 37 ° C'de etanol çeşitli konsantrasyonları içeren kültür inoculum ayıklar.
    5. Bakteriyel büyüme bulanıklık ve optik yoğunluk (Mikroplaka Okuyucu) 590 kullanarak göre analiz nm minimum inhibitör konsantrasyonu (MIC) belirlemek için.
  4. En az bakteri konsantrasyonu Testleri
    1. Hiçbir büyüme bir agar plaka üzerine sergilenen mikrofon testi her kuyudan sıvı kültürünün 10 µL aşılamak.
    2. 24 h 37 ° C'de kuluçkaya.
    3. Bakterisidal etkinlik görünür hiçbir bakteriyel büyüme ortaya en düşük konsantrasyon tanımlayarak belirlemek. Hücre büyümesini tamamen ortadan kaldırır konsantrasyonu minimum bakteri konsantrasyonu (MBC) olarak kabul edilir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Etanol çıkarılması için olumlu temsilcisi veri Tablo 1' de sunulmaktadır. Tayvanlı yeşil propolis üzerinden kuru madde verimi olumlu etanol konsantrasyon ile ilişkili idi. %95 ve % 99.5 etanol özleri Tayvanlı yeşil propolis verim yüksek kuru madde vardı. Su ekstraksiyon solvent kullanıldığında en düşük kuru madde verimi Tayvanlı yeşil propolis üzerinden oluştu. Bu sonuçları, etanol gibi organik bir çözücü Tayvanlı yeşil propolis çıkarma için en iyi gerçekleştireceğini gösterir. Standart propolins C, D, F ve G sinyali tespit edildi ve HPLC (Şekil 1a) kullanarak sayılabilir. Etanol özler propolins sinyal bireysel propolin standartları ve HPLC (Şekil 1b) kullanarak karakterize edildi. Normalde, propolins (C, D, F ve G) Tayvanlı yeşil propolis toplama olumlu etanol toplama çıkarma (Tablo 1) sırasında ile ilişkilidir. Tayvanlı yeşil propolis propolins en yüksek verimi % 95 ve % 99.5 etanol özleri üretildi.

Etanol özler antibakteriyel etkisi için olumlu temsilcisi veriler Tablo 2' de sunulmaktadır. Etanol özler antibakteriyel etkinliği S. aureus ve E. coli karşı inceledi. Ortalama mikrofon ve MBC etanol özler S. aureus için 10-20 µg/mL 20 µg/mL, idi (Tablo 2). Su özler antibakteriyel etkilerine karşı S. aureus (Tablo 2) yoktu. E. coli antibakteriyel etkisi ya da ile etanol gözlendi veya su (Tablo 2) ayıklar.

Figure 1
Şekil 1: propolins Tayvanlı yeşil propolis tanımlaması. Bu paneller propolins ve (b) (bir) standartları propolins ölçümü Tayvanlı yeşil propolis HPLC kullanarak göster. Bu rakam Chen ve ark. değiştirildi 8. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

Solvent * Verim (%) Propolin (C + D + F + G)
(mg/mL)
%99,5 alkol 66.75 ± 0.5bir** 36.73 ± 0,80bir
% 95 alkol 66.25 ± 0,50bir 37.55 ± 1.29bir
% 80 alkol 64.75 ± 0,96b 34.25 ± 0.71b
% 70 alkol 63.25 ± 0,96c 31.53 ± 0.31c
%60 alkol başlangıç 59,00 ± 1,41d 29.34 ± 1,59d
Su 7.00 ± 0,82e ND ***

Tablo 1: Kuru madde verimi (%) ve propolin içeriği (mg/mL) çeşitli çözücüler kullanılarak ayıklanır Tayvanlı yeşil propolis. * propolis 10 g 100 mL çözücü kullanarak ayıklandı ve özleri sonunda 100 mL için yeniden düzenlendi. ** Ortalama ± standart sapma (SD) değerlerdir. a-e Hiçbir ortak üst simge var anlamına gelir bir sütun içinde önemli ölçüde farklı (P < 0,05). ND algılanan = değil. Bu tablo Chen ve ark. değiştirildi 8.

Özü Staphylococcus aureus Escherichia coli
Mikrofon (µg/mL) MBC (µg/mL) Mikrofon (µg/mL)
%99,5 alkol 10 20 > 640
% 95 alkol 10 20 > 640
% 80 alkol 20 20 > 640
% 70 alkol 10 20 > 640
%60 alkol 20 20 > 640
Su ND ND ND

Tablo 2: mikrofon ve MBC (µg/mL) karşı çeşitli özler S. aureus ve E. coli. Bu tablo Chen ve ark. değiştirildi 8.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Bir çalışmada maserasyon, etanol, çeşitli konsantrasyonları kullanarak Brezilyalı propolis ayıklama17için kullanılabilir rapor; Ancak, süreç zaman alan17oldu. Fenol içeriği gibi biyoaktif bileşikler Brezilyalı propolis17ayıklamak için en az 10 gün sürdü. Alternatif olarak, etanol ayıklama 37 ° C, 50 ° C veya 70 ° C 30 dk için Isıtma ile birlikte Brezilya propolis19,21,22ayıklamak için teklif edildi. Bu Brezilya propolis biyoaktif bileşikler differentially etanol19yüzde bağlı olarak çıkarılan belirlendi. Propolis biyoaktif bileşikler ayıklama verimliliğini Brezilyalı propolis ve Tayvanlı yeşil propolis farklı kimyasal bileşim nedeniyle farklı olabilir. Burada, biz Tayvanlı yeşil propolis ayıklamak için güvenilir ve yinelenebilir bir protokol sağlar. Tayvanlı yeşil propolis biyoaktif bileşikler 2 gün içinde bir çözücü etanol kullanarak hasat. Benzer bir bulgu da burada sunulan ve propolins (C, D, F ve G) Tayvanlı yeşil propolis üzerinden 3 gün ayıklama23ile birlikte % 95 etanol kullanarak elde belirlenen protokolü destekler. Başka bir çalışmada bu % 95 etanol gösterdi 21 h ile birlikte ayıklama Tayvanlı yeşil propolis24propolins hasat etmeyi başardı. Ancak, propolins tam konsantrasyon 21 h etanol çıkarma sonra doğrulanması gerekir. Araştırmacılar Isıtma işlemi Brezilyalı propolis19,21,22ayıklama verimliliği artırır önerdi. Tayvanlı yeşil propolis üzerinden propolins Isıtma tarafından çıkarılan araştırılmalı.

Tayvanlı yeşil propolis etanol özler antibakteriyel etkileri gram-pozitif patojenlere karşı vardır. Propolis hidrofobik olduğundan, çalışmalar etanol gibi organik bir çözücü propolis ayıklama8,16,17,18,19için uygun bir çözücü olduğunu göstermiştir, 20. Çalışmalar de bir artan etanol konsantrasyonu daha fazla ayıklanan biyoaktif bileşikler8,17,18,20' ye yol göstermiştir. Mevcut protokolünde en fazla kuru madde verimi Tayvanlı yeşil propolis %95 ve % 99.5 etanol gözlenir, propolins ve antibakteriyel etkinliği en yoğun yanı sıra ayıklar.

Mevcut protokolü kullanarak etanol Tayvanlı yeşil propolis çıkarma için tasarlanmıştır ve kalite değerlendirme propolins içeriği temel alınarak yapılır. Ancak, Tayvanlı yeşil propolis bazı etanol çözünmez biyoaktif bileşikler düzgün mevcut protokolü kullanılarak izole olamaz.

Yöntemi mevcut yöntemleri ile ilgili olarak en önemli yönü bu yöntem diğer çalışmalar17,23' önerilen yöntemleri göre zaman kazandırır var. Ayrıca, Tayvanlı yeşil propolis %95 ve % 99.5 etanol özleri propolins ve antibakteriyel etkinliği yüksek konsantrasyon sergiledi.

Bu yaklaşım diğer bilinmeyen etanol çözünür biyoaktif bileşikler Tayvanlı yeşil propolis karakterize için doğrudan uygulama alanı vardır. Ayrıca, etanol özler propolins içeren diğer bioactivities belirlemek için kullanılabilir.

Anahtar deneysel yordamlardan birini (iletişim kuralı adım 1.1) taşlama sırasında Tayvanlı yeşil propolis tekdüzelik garanti etmektedir. Uygunsuz Tayvanlı yeşil propolis taşlama düşük kuru madde verimi ve propolin içeriği yol açabilir. Baharat değirmeni, doku değirmeni veya homogenizer, gibi uygun bir bileme aparatı kullanın ve propolis taşlama sonra kalan herhangi bir büyük parçacıklar olmadan ince toz olur dikkat çekmek için önemlidir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

Yazarlar bildirmek için bir şey yok.

Acknowledgments

Bu el yazması Wallace akademik düzenleyerek düzenlendi.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
ethanol Sigma-Aldrich E7023
Whatman no. 4 filter paper Sigma-Aldrich WHA1004125
methanol Sigma-Aldrich 34860
reverse phase RP-18 column Phenomenex Inc. 00G-0234-E0
Staphylococcus aureus ATCC BCRC 10780
Escherichia coli ATCC BCRC 10675
tryptic soy broth Sigma-Aldrich 22092
nutrient broth Sigma-Aldrich 70122
dimethyl sulfoxide Sigma-Aldrich D2650
spice grinder Waring WSG60K
microplate Reader Molecular Devices EMAX PLUS
HPLC system Agilent 1200 Series
vacuum evaporation BÜCHI Rotavapor R-215

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Zabaiou, N., et al. Biological properties of propolis extracts: Something new from an ancient product. Chemistry and Physics of Lipids. 207, (Pt B), 214-222 (2017).
  2. Bankova, V. B., De Castro, S. L., Marcucci, M. C. Propolis: Recent advances in chemistry and plant origin. Apidologie. 31, (1), 3-15 (2000).
  3. Park, Y. K., Alencar, S. M., Aguiar, C. L. Botanical origin and chemical composition of Brazilian propolis. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 50, (9), 2502-2506 (2002).
  4. Chen, C. N., Wu, C. L., Shy, H. S., Lin, J. K. Cytotoxic prenylflavanones from Taiwanese propolis. Journal of Natural Products. 66, (4), 503-506 (2003).
  5. Chen, C. N., Weng, M. S., Wu, C. L., Lin, J. K. Comparison of radical scavenging activity, cytotoxic effects and apoptosis induction in human melanoma cells by Taiwanese propolis from different sources. Evidence-Based Complementary and Alternative. 1, (2), 175-185 (2004).
  6. Chen, C. N., Wu, C. L., Lin, J. K. Apoptosis of human melanoma cells induced by the novel compounds propolin A and propolin B from Taiwanese propolis. Cancer Letters. 24, (1-2), 218-231 (2007).
  7. Huang, W. J., et al. Propolin G, a prenylflavanone, isolated from Taiwanese propolis, induces caspase-dependent apoptosis in brain cancer cells. Journal of Agricultural and Food Chemistry. 55, (18), 7366-7376 (2007).
  8. Chen, Y. W., Ye, S. R., Ting, C., Yu, Y. H. Antibacterial activity of propolins from Taiwanese green propolis. Journal of Food and Drug Analysis. 26, (2), 761-768 (2018).
  9. Hegazi, A. G., Abd El Hady, F. K., Abd Allah, F. A. M. Chemical composition and antimicrobial activity of European propolis. Zeitschrift für Naturforschung. 55, (1-2), 70-75 (2000).
  10. Sforcin, J. M., Fernandes, A., Lopes, C. A. M., Bankova, V., Funari, S. R. C. Seasonal effect on Brazilian propolis antibacterial activity. Journal of Ethnopharmacology. 73, (1-2), 243-249 (2000).
  11. Chen, Y. W., et al. Characterization of Taiwanese propolis collected from different locations and seasons. Journal of the Science of Food and Agriculture. 88, (3), 412-419 (2008).
  12. Grange, J. M., Davey, R. W. Antibacterial properties of propolis (bee glue). Journal of the Royal Society of Medicine. 83, (3), 159-160 (1990).
  13. Kujumgiev, A., et al. Antibacterial, antifungal and antiviral activity of propolis from different geographic origins. Journal of Ethnopharmacology. 64, (3), 235-240 (1999).
  14. Krol, W., Scheller, S., Shani, J., Pietsz, G., Czuba, Z. Synergistic effect of ethanol extract of propolis and antibiotics in the growth of Staphylococcus aureus. Drug Research. 43, (5), 607-609 (1993).
  15. Lu, L. C., Chen, Y. W., Chou, C. C. Antibacterial and DPPH free radical-scavenging activities of the ethanol extract of propolis collected in Taiwan. Journal of Food and Drug Analysis. 11, (4), 277-282 (2003).
  16. Tosi, B., Donini, A., Romagnoli, C., Bruni, A. Antimicrobial activity of some commercial extracts of propolis prepared with different solvents. Phytotherapy Research. 10, (4), 335-336 (1996).
  17. Cunha, I. B. S., et al. Factors that influence the yield and composition of Brazilian propolis extracts. Journal of the Brazilian Chemical Society. 15, (6), 964-970 (2004).
  18. Woo, S. O., Hong, I. P., Han, S. M. Extraction properties of propolis with ethanol concentration. Journal of Apicultural Research. 30, (3), 211-216 (2015).
  19. Park, Y. K., Ikegaki, M. Preparation of water and ethanolic extracts of propolis and evaluation of the preparations. Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry. 62, (11), 2230-2232 (1998).
  20. Ramanauskienė, K., Inkėnienė, A. M. Propolis oil extract: quality analysis and evaluation of its antimicrobial activity. Natural Product Research. 25, (15), 1463-1468 (2011).
  21. Machado, B. A., et al. Chemical composition and biological activity of extracts obtained by supercritical extraction and ethanolic extraction of brown, green and red propolis derived from different geographic regions in brazil. PLoS One. 11, (1), e0145954 (2016).
  22. Monroy, Y. M., et al. Brazilian green propolis extracts obtained by conventional processes and by processes at high pressure with supercritical carbon dioxide, ethanol and water. The Journal of Supercritical Fluids. 130, 189-197 (2017).
  23. Popova, M., Chen, C. N., Chen, P. Y., Huang, C. Y., Bankova, V. A validated spectrophotometric method for quantification of prenylated flavanones in pacific propolis from Taiwan. Phytochemical Analysis. 21, (2), 186-191 (2010).
  24. Chen, L. H., et al. Taiwanese green propolis ethanol extract delays the progression of type 2 diabetes mellitus in rats treated with streptozotocin/high-fat diet. Nutrients. 10, (4), e503 (2018).

Comments

0 Comments


    Post a Question / Comment / Request

    You must be signed in to post a comment. Please sign in or create an account.

    Usage Statistics