Transplante de pele murinos

Biology

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Summary

Transplante alogênico de pele é um modelo padrão para ensaio de anfitrião respostas das células T aos antígenos MHC-díspares doador. Este vídeo-artigo fornece um tutorial visual de cada etapa envolvida na realização de um transplante de BALB/c--> C57BL / 6 da pele.

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Garrod, K. R., D. Cahalan, M. Murine Skin Transplantation. J. Vis. Exp. (11), e634, doi:10.3791/634 (2008).

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Abstract

Como um dos modelos mais rigorosos e menos tecnicamente desafiador, transplante cutâneo é um método padrão para ensaio de anfitrião respostas das células T aos antígenos MHC-díspares doador. O objetivo deste vídeo-artigo é proporcionar ao espectador com uma demonstração passo a passo-visual do transplante de pele usando o modelo de mouse. O protocolo é dividido em cinco componentes principais: 1) a colheita da pele do doador; 2) preparar receptor para transplante; 3) transplante de pele; 4) remoção de curativo e rejeição do enxerto de monitoramento; 5) dicas úteis. Uma vez proficiente, o procedimento em si deve ter <10 minutos para executar.

Protocol

Antes do início do experimento:

  • Obter a aprovação IACUC
  • Esterilizar instrumentos cirúrgicos e Q-dicas

I. tecido do doador Colheita

  1. Euthanize camundongo doador (de acordo com SOP instituição)
  2. Trás os cabelos molhados da base da orelha com álcool
  3. Colheita da pele de doadores cortando orelha fora na base
  4. Tecido lugar na placa sobre o gelo
  5. Ouvido Split: pinch lados ventral e dorsal do tecido na base da orelha com dente-de-rato fórceps; puxe suavemente o tecido, tecido de flutuação dorsal, superfície interna para baixo, na PBS sobre o gelo; descartar flap ventral colágenas

II. Prepare Recipiente para Transplante

  1. Rato anestesiar usando procedimento aprovado
  2. Administrar analgésico para pós-operatório o alívio da dor (ou seja, 0,05-0,1 mg / g ip Bupernex)
  3. Rato lugar na posição lateral
  4. Executar pitada dedo para garantir animal é suficientemente sedado
  5. Cabelos molhados com álcool e shave tórax
  6. Limpe área limpa com algodão embebido em álcool

III. Transplante de pele

  1. ~ Fazer incisão de 1 cm: pele tenda com ratos dente-forceps e cortar ~ 0,25-0,5 cm abaixo forceps
  2. Remover a pele de doadores de PBS, coloque em cima de cama de enxerto (com a superfície interna da pele da orelha enfrentando leito do enxerto) e remova o excesso com PBS estéril Q-Tip
  3. Cuidadosamente aparar a pele do doador, para que o excesso de transplante está terminantemente dentro leito do enxerto (certificando-se que as bordas do enxerto não são enroladas por baixo e que o enxerto não ressaca na pele destinatário tronco)
  4. Enrole destinatário no curativo estéril (com o segmento de gaze não-adesivo colocado sobre o enxerto de pele)
  5. Garantir que bandagem não está muito apertado (avaliar a respiração animal) e que as armas são livremente móveis
  6. Bandage seguro com um único fio de seda 2-0
  7. Coloque o animal em gaiola limpa (com lâmpada de aquecimento até animal tem suficientemente recuperado da anestesia)
  8. Monitorar destinatário 1-2/day para sinais de sofrimento e administrar analgésicos, conforme necessário para o alívio da dor

IV. Remoção de bandagem (6-7 dias após o transplante)

  1. Rato anestesiar usando procedimento aprovado
  2. Corte e retire fio de seda
  3. Com uma tesoura sem corte final, corte cuidadosamente através de bandagem (tomando cuidado para não perturbar enxerto) e remova cuidadosamente
  4. Retorno do mouse para gaiola limpa
  5. Verifique enxerto ~ 8 horas após a remoção do curativo de sinais de scabbing ou contração. Se presente, enxerto pode ter falhado a irrigar e deve ser considerada uma falha técnica.
  6. Monitorar diariamente para sinais de rejeição (normalmente definido como ~ 80% de necrose do tecido do doador)
  7. Transplantes alogênicos de pele geralmente rejeitam entre d8-12 pós-operatório

Dicas úteis V.

  1. A colheita de tecidos de doadores perto da base da orelha vai: 1) maximizar o tamanho do enxerto, e 2) fornecer uma saliência ventral desigual que irá facilitar a divisão
  2. Sempre use uma lâmina nova para barbear destinatário
  3. Se analgésico deve ser dado ip, administrar antes do transplante procedimento para minimizar pós-operatório de manipulação (minimizar chance de interromper o enxerto)
  4. Se possível, retire as luvas antes de aplicar o curativo. Luvas tendem a se ater a atadura e complicar a aplicação
  5. Colocação de uma sutura única no final bandage irá minimizar a remoção prematura
  6. Bandagem wrap tão apertado como permitido e avaliar a respiração ANTES de colocar sutura. Se bandage é muito apertado, animal vai parar de respirar. Se bandage é muito solta, animal irá removê-lo.

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Discussion

Como demonstrado neste vídeo-artigo, o modelo de transplante de pele é um método rápido e fácil para monitorar respostas de células T alogênicas. Transplante alogênico de pele tem uma vasta gama de aplicações e tem sido utilizada para ensaio da eficiência de uma variedade de agentes imunossupressores e protocolos de indução de tolerância, bem como para investigar os efeitos biológicos de vários anticorpos de bloqueio.

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Acknowledgements

NIH Imunologia Training Grant T32 AI 60573 (KRG) e NIH conceder GM 41514 (MDC)

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Micro-dissecting forceps (curved) Sigma-Aldrich F4142
Rat-tooth forceps (1x2 teeth, straight) Fine Science Tools 11053-10 n=2
Strabismus scissors (blunt end) Fine Science Tools 14074-11
Iris forceps (curved) Fine Science Tools 11065-07
Spring scissors (angled) Fine Science Tools 15006-09
Halsey micro needle holder Fine Science Tools 12500-12
10 cm plates Corning 430167
PBS Cellgro 21-040-CV
Bupernex (Buprenorphine hydrochloride) Reckitt Benckiser 517201
Insulin syringes (29 Ga) Monoject 8881 600145
Q-tips Solon Manufacturing Company 362
Single edge razor blades (#9) Smith & Nephew Inc. 67-0238
Silk suture (2-0; PS-2) Ethicon Inc. 583H

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Comments

20 Comments

  1. Kym, I would really be interested to see a histologic profile of the post-op period - do you have the respective images?
    Thank you in advance,
    Peter

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 22, 2008 - 4:34 PM
  2. Dear Peter- Thanks for the great suggestion. I've contacted JoVE to see if a section can be added to the article containing histo pics from allo- and syn- transplants.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 22, 2008 - 7:33 PM
  3. The connecting speed is too slow, it spends loog time to watch the whole video. Can we download the video?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 9:35 AM
  4. Hi Merlin. I am sorry you are having trouble.  Is it your connection that is slow or ours?  Please use www.speedtest.net to test your connection.  If the problem is on your end, we are now working on a solution to help people with slow connections.  If you would like to discuss this, please send me an email directly to support@jove.com and I'll see what may be the problem.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 11:09 AM
  5. Hi,nikitab. Thank your help. I am from China, I test my connection, the connection is slow from USA to my city. could you tell me how to fix this problem?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 10:04 PM
  6. If you click the pause pause/play button, the video will buffer and you should be able to play it without interruptions after some time.  Hope tihs helps!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    March 28, 2008 - 10:21 PM
  7. Merin, just wanted to let you know that we've upgraded the video player.  How are the videos playing now?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 15, 2008 - 6:34 PM
  8.  wow ive learned alot from this can you tell me more about this? is it different from human skin transplants? there is alot going on with stem cell, is this simular, this is intresting, would this maby help people that have bad skin burns?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 3, 2009 - 11:16 PM
  9. hello this is interesting, is this simular to human skin transplants? dŒs this help people with bad skin burns?  theres alot going on with stem cell research is this simular? i have learned alot from this vidio, i wait for your answers.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    February 3, 2009 - 11:32 PM
  10. Hi, Kym, I learn the technique of ear-skin graftting through the video. Well, in the articles about skin graft in mice, most of them just use the method of back-back or tail-back skin transplantation. And do you provide some articles about ear-back skin graft to me? Thank you very much.
    cai

    Reply
    Posted by: Anonymous
    July 9, 2009 - 7:37 PM
  11. beautiful video. we use a similar technique at the Diamantina Institute, but I got some handy hints watching your technique. thanks.

    Reply
    Posted by: Anonymous
    August 5, 2009 - 1:41 AM
  12. Are donor and recipient mice females or males?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    September 24, 2009 - 12:54 PM
  13. Hi Kym. I was wondering if you or your colleges transplant embryonic skin that way, or if there has to be special protocol for that?

    Reply
    Posted by: Anonymous
    January 21, 2010 - 4:29 PM
  14. Hi Kim,
    we do skin grafts and we have problems with the bandage. I use band-aids (the ones sold in the regular pharmacy for cuts and bruises) and mice chew them off as soon as they weak up from anesthesia. I do not see in your materials list what kind of bandage you use. Would you please tell me where do you buy it and the catalog number? I would really appreciate.
    best regards
    sg

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 28, 2010 - 3:03 PM
  15. why i can't see it? is it because the subscription lock? Our school don't have this database. How can i see it ? is it mean that that i need to buy it ?

    Reply
    Posted by: jin l.
    October 16, 2011 - 8:02 AM
  16. Access to this article is only available through an institutional subscription. Please contact your Librarian and include me on cc, and we will arrange a ² weeks FREE trial to the entire institution. Not only will this give you access to this article but will provide you with the opportunity to access other content.

    I hope this helps bridge the gap a little and I look forward to speaking with you soon.

    Best wishes,

    Ward Parry
    Director of Library Relations
    Journal of Visualized Experiments (JoVE)
    48 Grove Street, Suite 305, Somerville, MA 0²144
    T. 617.996.9161
    E. ward.parry@jove.com

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 16, 2011 - 6:40 PM
  17. I am very sorry that i reply so late. At first, i try to contact you through email, but it was rejected by the recipient domain.
    I am from China and our school librarian didn't have this service now, so i only to contact you, and thank you to arrange a free trial for me. Please tell me what should i do to apply the free trial, you can send the details to me. If i can't receive your email. i will post message on jove.thank you again.
    Best wishes
    jin liu
    Chengdu, China. Chengdu medical college
    Sichuan Province, Chengdu Chengdu City Jinniu District Road No. 601

    Reply
    Posted by: jin l.
    October 19, 2011 - 9:37 PM
  18. Dear Jin,
    I have forwarded your response to our account manager in China. She will be in touch in due course. Thank you for your interest in JoVE.

    Best,
    Ward

    Reply
    Posted by: Anonymous
    October 20, 2011 - 12:14 PM
  19. thank you!

    Reply
    Posted by: jin l.
    October 21, 2011 - 9:37 AM
  20. Hi,Kym, I am doing mouse ear skin grafts recently, I want to ask did mice ear cartilage layer, in the video is the inner or outer ear skin transplantation.Thank you very much!

    Reply
    Posted by: Anonymous
    May 14, 2017 - 4:17 AM

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