تشريح الجهاز العصبي المركزي اليرقات في Melanogaster ذبابة الفاكهة

Biology

Your institution must subscribe to JoVE's Biology section to access this content.

Fill out the form below to receive a free trial or learn more about access:

 

Summary

نحن في هذه المقالة شرح كيفية تشريح الجهاز العصبي المركزي يرقات ذبابة الفاكهة من المركز الثالث طور مرحلي.

Cite this Article

Copy Citation | Download Citations

Hafer, N., Schedl, P. Dissection of Larval CNS in Drosophila Melanogaster. J. Vis. Exp. (1), e85, doi:10.3791/85 (2006).

Please note that all translations are automatically generated.

Click here for the english version. For other languages click here.

Abstract

الجهاز العصبي المركزي (CNS) من يرقات ذبابة الفاكهة معقدة وغير مفهومة. طريقة واحدة للتحقيق في الجهاز العصبي المركزي هو استخدام المناعية للنظر في التعبير عن رواية مختلفة والبروتينات علامة. تلطيخ اليرقات كله هو غير عملي لأن بشرة صعبة يمنع اختراق الأجسام المضادة من داخل تجويف الجسم. من أجل هذه الأنسجة وصمة عار لا بد من تشريح الحيوان قبل تثبيت والتلوين. نحن في هذه المقالة شرح كيفية تشريح يرقات ذبابة الفاكهة دون الإضرار الجهاز العصبي المركزي. أبدأ تمزيق يرقة في نصف مع غرامة زوج من ملقط ، ثم تتحول إهاب "من الداخل إلى الخارج" لفضح الجهاز العصبي المركزي. إذا أجري تشريح الجهاز العصبي المركزي بعناية سوف تظل تعلق على بشرة. نستمر في الجهاز العصبي المركزي عادة تعلق على بشرة طوال خطوات التثبيت والتلوين ، وفقط إزالة الجهاز العصبي المركزي من إهاب قبيل تركيب العينات على الشرائح الزجاجية. نعرض أيضا بعض الصور ممثل CNS اليرقات ملطخة حواء ، عامل النسخ التي أعرب عنها في مجموعة فرعية من الخلايا العصبية في الجهاز العصبي المركزي. ويختتم المقال بمناقشة بعض الاستخدامات العملية لهذه التقنية ، والصعوبات المحتملة التي قد تنشأ.

Protocol

  1. تشريح 3 اليرقات طور مرحلي الثالثة ، وترك الجهاز العصبي المركزي التابعة لبشرة. مكان في أنبوب مل 1.5.
  2. الإصلاح في برنامج تلفزيوني (1X) التي تحتوي على الفورمالديهايد 2 ٪ لمدة 40 دقيقة مع هزاز. ؛ استخدم 250ul لكل 50-10 تشريح الجهاز العصبي المركزي.
  3. إزالة الفورمالديهايد ، ويغسل 3 مرات لفترة وجيزة مع برنامج تلفزيوني + 0.1 ٪ تريتون X - 100 (PBST). استخدام سحبت ناعما باستور ماصة لتجنب فقدان الأنسجة.
  4. حجب المواقع البروتين غير محددة وملزمة وpermeabilize أغشية الخلايا التي تفرخ الأنسجة 1-8 ساعات في جيش صرب البوسنة PBST + 5 ٪ ، هزاز في 4 درجات مئوية.
  5. في احتضان الضد الأولية مخففة في PBST + هزاز BSA 5 ٪ عند 4 درجات مئوية خلال الليل. وسوف تختلف الضد الأمثل التخفيف عن الأجسام المضادة المختلفة.
  6. شطف 3X في PBST تليها اثنين من يغسل 30min في 4 درجات مئوية.
  7. في احتضان الضد الثانوية مخففة في PBST + 5 ٪ لجيش صرب البوسنة 1-3 ساعات هزاز في 4 درجات مئوية. شطف 3X في PBST تليها اثنين من يغسل 30min في 4 درجات مئوية. إذا كان الثانوي هو مترافق لمجمع الحساسة للضوء ، والتفاف الأنبوب في رقائق الألومنيوم.
  8. تشريح الأنسجة أخرى (عند الحاجة) وجبل على الشرائح.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

هذا الفيديو يوضح كيفية تشريح الجهاز العصبي المركزي يرقات ذبابة الفاكهة من المركز الثالث طور مرحلي. بعد التشريح ، ويمكن للجهاز العصبي المركزي الملون باستخدام بروتوكول المناعية القياسية. حاليا ، لا تزال غير معروفة كثيرا حول كيفية إنشاء نظام أخلاقي العصبي ، وكذلك الكيفية التي يخزن وينقل المعلومات. وينبغي للدراسات الجهاز العصبي المركزي النامية اليرقات ذبابة الفاكهة تعزيز معرفتنا الأسلاك الجهاز العصبي وظيفة.

يرقات ذبابة الفاكهة المعرض عددا من السلوكيات stereotpyed ، مثل الاستجابة للمنبهات البيئية. كيف يتم تعلم هذه السلوكيات وتخزينها في الجهاز العصبي؟ سوف دراسات الجهاز العصبي خلال نمو اليرقات مساعدة للإجابة على هذا السؤال.

في هذه المرحلة من التنمية ذبابة الفاكهة ، الكائن تستعد للخضوع لتغييرات واسعة المورفولوجية التي تحدث أثناء pupation. خلال هذا الوقت ، إعادة عرض واسع النطاق للنظام العصبي العضلي كما يحدث التحولات organsim من الزحف الى يرقة الذبابة الكبار. سيكون من المثير لتحديد كيفية الخلايا العصبية تتغير خلال هذه المرحلة من التنمية ، وإذا كان يمكن ملاحظة نفس النوع من التصرفات العصبية في الحيوانات العليا.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Type Company Catalog Number Comments
Forceps fine tipped
9-well Watch glass
Plastic Petri dish

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Forthcoming.

Comments

1 Comment

  1. The justification/ultimate goals are poorly explained. How dŒs the presence of a protein show function?

    Reply
    Posted by: jacqui s.
    December 12, 2009 - 6:36 AM

Post a Question / Comment / Request

You must be signed in to post a comment. Please or create an account.

Usage Statistics