Abstract
Gelokaliseerde intraductale behandelingen voor borstkanker bieden mogelijke voordelen, waaronder efficiënte levering aan de tumor en verminderde systemische toxiciteit en bijwerkingen 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7. Echter, een aantal uitdagingen blijven voordat deze behandelingen op grotere schaal kan worden toegepast. De ontwikkeling en validatie van intraductal therapeutica in een geschikt diermodel vergemakkelijken van de ontwikkeling van intraductal therapeutische strategieën voor patiënten. Terwijl de muis borstklier grote schaal gebruikt als een modelsysteem van borstklier ontwikkeling en tumorigenese, de anatomie verschilt van de menselijke klier. Een grotere diermodel, zoals het konijn, kan dienen als een beter model voor borstklier structuur en intraductale therapeutische ontwikkeling. in contrast aan muizen, waarin tien ductale bomen ruimtelijk verdeeld langs de lichaamsas, elk eindigend in een afzonderlijke speen, het konijn borstklier meer lijkt op de menselijke klier, meerdere overlappende ductale systemen die uitgang via afzonderlijke openingen in één speen. Hier presenteren we minimaal invasieve werkwijzen voor het afleveren van reagentia direct in het konijn borstklier kanaal en visualisatie van de levering zelf met hoge resolutie echografie.
Introduction
De intraductale afgifte van therapeutische middelen is bestudeerd in diermodellen en in een vroeg stadium menselijke proeven 3, 4, 5, 6, 11, 12. Een recent Fase I studie toonde de veiligheid en de haalbaarheid van intraductal carboplatine of intraductal gepegyleerde liposomale doxorubicine bij vrouwen wachten mastectomie voor de behandeling van invasieve kanker 2.
Eerdere protocollen voor intraductale afgifte zijn ontwikkeld voor muizen en ratten borstklieren 6, 7, 8, 9. Voor onderzoeksdoeleinden, intraductal tumorcel injecties en de lentivirale vector levering van oncogenen zijn ook uitgevoerd in diermodellenref "> 13, 14, 15, 16. evenwel een ideale in vivo model van de intraductal leveringsproces moet de ontwikkeling van nieuwe klassen van therapeutische verbindingen mogelijk en preklinische beoordeling mogelijk. anatomische verschillen tussen knaagdieren en mensen hebben de vertaling van deze gecompliceerde studies.
In tegenstelling tot muizen, waarbij elk kanaal eindigt in een afzonderlijke speen, de menselijke borst bestaat uit 5-9 onafhankelijke ductale systemen, elk met een aparte opening eindigt bij de speen. Rabbit melkklieren haven vier onafhankelijke ductale systemen, elk afzonderlijk toegankelijk via een van de vier openingen in één speen. Een konijnenmodel beter overeenkomt met de menselijke anatomie en maakt de studie van intraductal geneesmiddelafgifte in een relevante context.
Hier maken we gebruik van twee technieken om intraductal levering beoordelen. De co-toediening van eenvitale kleurstof maakt visualisatie door de huid en zorgt voor een eenvoudige en snelle bevestiging van deze methode. Voor sommige toepassingen kan hogere resolutie in kaart brengen van de kanalen de voorkeur. We presenteren hier een protocol voor echografie van de kanalen door de intraductale levering van een niet-gerichte contrast reagens.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Procedures met behulp van proefdieren zijn goedgekeurd door de Institutional Animal Care en gebruik Comite van de Universiteit van Texas in Austin.
1. Preoperatieve Voorbereiding
- Registreer het lichaamsgewicht van elk konijn. Zoals bij alle preklinische studies, bewaken diergewichten regelmatig mogelijke toxiciteit te beoordelen.
- Vóór verlamming het konijn, vul een 50 ml conische buis met commercieel verkrijgbare echogel en centrifugeren bij 500 xg gedurende 30 s; Er mogen geen zichtbare luchtbellen in de gel na voltooiing van het centrifugeren.
- Dien glycopyrrolaat subcutaan toegediend in een dosis van 0,1 mg / kg acepromazine en intramusculair met een dosis van 0,75 mg / kg. Wacht 15-20 minuten voor het kalmerende door te voeren, terwijl het toezicht op de vitale functies en gedrag.
OPMERKING: Glycopyrrolaat is een anti-cholinergisch middel dat bradycardie voorkomt en vermindert respiratoire secreties en GI. Acepromazine is een kalmerend middel dat dient als premedicativoor anesthesie. - Dien 35 mg / kg ketamine en 5 mg / kg xylazine subcutaan als anestheticum. Aangezien de operator wordt ervaren en kunnen de intraductale afgifte sneller bereiken, het geneesmiddel doseringen verlaagd tot 15 mg / kg ketamine en 3 mg / kg xylazine subcutaan; dit zal de narcose tijd en de tijd die het dier herstellen van de anesthesie verkorten.
- Controleer en documenteren van de hartslag, SPO 2, temperatuur, ademhaling, en slijm membraan kleur elke 15 min. Solliciteer eye smeermiddel aan beide ogen.
NB: Alleen personeel die een passende opleiding hebben ondergaan en door IACUC van hun instelling goedgekeurd moeten beheren of te monitoren anesthesie. Het gebruik van een veterinair anesthesiemonitor kan helpen bij het verkrijgen vitale functies en wordt aanbevolen. De veterinaire anesthesie monitor, maar vervangt niet de noodzaak om het dier elke 15 min handmatig te controleren. Zie de instructies van de fabrikant van fof het juiste gebruik van een dierenarts monitor. - Controleer of het begin van de anesthesie door een zachte teen knijpen; het konijn moet niet reageren alvorens verder te.
- scheren voorzichtig caudale buik van het konijn in de omgeving van de derde en vierde paren lies spenen.
- Met de meerderheid van de haren verwijderd, breng een over-the-counter ontharingscrème om de kaalgeschoren omgeving. Verwijder de crème 10 min na applicatie met vochtige papieren handdoeken bevochtigd met warm water.
LET OP: Het konijn huid is zeer fragiel / gevoelig. De ontharingscrème worden gebruikt voor niet meer dan 10 min. In feite is het veiliger om een "test spot" probeer op 5 min en alleen achter te laten op langer als proef spot geeft een langere periode nodig is. - Veeg het gebied met alcohol doordrenkte gaasjes op de injectieplaats te reinigen.
- Plaats het konijn op het dorsum in een V-vormige trog gevoerd met een recirculerende warm water deken en een absorberend kussen.
2. Preparation van het contrastmiddel
- Reconstrueren de ongerichte contrast Reagens volgens de instructies van de fabrikant. Pipet op en neer voorzichtig te mengen.
Opmerking: Het contrastmiddel gebruikt in dit protocol is stabiel bij kamertemperatuur gedurende 4-6 uur na reconstitutie. Schud de flacon tussen elke retrieval.
OPMERKING: De volume oplossing dat nodig is hangt af van het aantal kanalen te spuiten. Het konijn heeft 4 ductale openingen per speen en 0,2 ml oplossing voldoende is om een ductale boom van een volwassen New Zealand Wit konijn (Oryctolaguscuniculus) vullen. Aldus kan een totaal volume van 0,8 ml worden geleverd aan een borstklier.
3. intraductale Delivery
- Zoek de juiste spenen te injecteren; de 3 e en 4 e paar lies spenen worden aanbevolen, omdat ze gemakkelijk worden gevisualiseerd als het dier wordt geplaatst op haar dorsum.
- Load 0,2 ml steriele 0,9% zoutoplossing ineen 1 ml Luer-lock tuberculine spuit met een 22 G naald. Gooi de 22 G-naald zodra de zoutoplossing in de spuit en te vervangen door een steriele 25-gauge naald. Veeg het gebied met 85% isopropylalcohol op een gaasje.
- Met de schuine kant van de naald en de injectiespuit parallel aan het lichaam van het dier, plaatst de schuine kant van de naald in de zijkant van de speen en injecteer langzaam 0,1-0,2 ml zoutoplossing; dit zal zorgen voor een betere visualisatie van de ductale openingen.
- Load 0,2 ml injectieoplossing in een 1 ml Luer-lock tuberculine spuit.
- Houd de speen zachtjes met de duim en wijsvinger en til het iets om het te positioneren voor de intraductal injectie; een draagbare oculaire loupe kunnen helpen bij het visualiseren van de ductale openingen.
- Met behoud van de opgeheven positie van de speen, zorgvuldig canule het kanaal van belang met behulp van een 25 G stompe-tip naald.
- Na infusen, voorzichtig draai de Luer-lock spuit op de naaf van de stompe-tip infusie naald totdat het is vergrendeld.
- Til de speen en injecteer de oplossing langzaam om mogelijke schade als gevolg van snel bewegende vloeistof in het kanaal een minimum te beperken; op geen enkel moment moet er weerstand bij het injecteren van de oplossing.
4. Ultrasound Imaging
- Breng een ruime hoeveelheid gecentrifugeerde ultrasound gel op de huid van het gebied van belang. Zorg ervoor dat er geen luchtbellen in de gel, omdat deze de beeldkwaliteit in het gedrang brengt.
- Stel de beeldvorming diepte 6 mm. Plaats de 21-MHz transducer in contact met de gel en scan het interessegebied in B-modus. Let op het contrast medium in de gescande regio, waaronder de ductale opening en de rest van het kanaal.
Opmerking: Deze instellingen zijn ontwikkeld voor gebruik met een specifiek fotoakoestische ultrageluidapparaat. Raadpleeg de tabel van materialen voor meer informatie. Het kan nodig zijn om het zendvermogen en imaging scherptediepte andere beeldvormende systemen borstklier optimaliseren passenklier visualisatie. - Verwijder de ultrasone gel uit de huid van het dier met een gaasje.
5. postoperatieve zorg
- Let op de injectieplaats: er mogen geen tekenen van trauma op de speen regio of het omringende weefsel, en zwelling in het gebied rondom de speen geeft waarschijnlijk een mammair vetkussentje injectie plaats succesvol intraductale injectie.
- Leg het konijn in een borstbeen positie. Indien nodig, geeft 0,2 mg / kg intraveneus yohimbine de marginale oorader; Dit zal het effect van xylazine omkeren en laat het dier sneller te herstellen van de anesthesie.
- Bewaak het konijn elke 15 min gedurende de herstelperiode tot het dier is alert, responsief, en onderhoudt een borstbeen positie.
LET OP: Deze procedure mag niet leiden tot weefselschade of zwelling. Als roodheid of zwelling worden waargenomen, toedienen van een dosis van meloxicam 0,1-0,2 mg / kg PO zodra het dier is alert en in staatmedicatie oraal te nemen. Neem contact op met de veterinaire personeel van de instelling voor verdere begeleiding.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Hier laten we zien dat de intraductale afgifte van contrast reagentia de borstklier kanalen van een konijn kan worden bereikt zonder trauma aan het weefsel (Figuur 2). Bij konijnen vier afzonderlijke ductale systemen convergeren op een speen kan derhalve worden benaderd en afzonderlijk belicht met deze methode. Afzonderlijke ductale openingen zijn gemakkelijk gevisualiseerd; let op de pijlpunt het markeren van een tweede ductale opening grenzend aan de canule kanaal in figuur 2B.
Hoge-resolutie echografie met irrelevante contrast reagens in lineaire imaging-modus kan een real-time uitlezing van de intraductal levering. Representatieve beelden tonen detectie van het reagens tot 45 min na levering (figuur 3). Deze techniek kan ook nuttig om de kinetiek van therapeutische bezorging via de leidingen zijn.
(figuur 4) en of leidingen beschadigd tijdens de bevalling.
Figuur 1: Schema van Rabbit borstklieren. De twee onderste paren stippen stellen de spenen van de inguinale klieren. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 2: Voorbereiding en Canulatie van de lies borstklier voor intraductal Delivery. (A) De speen van de rechter lies borstklier hier onmiddellijk na de levering van 0,2 ml 0,9% steriele zoutoplossing getoond. Na injectie worden de ductale openingen duidelijker zichtbaar. (B) een ductale opening in dezelfde speen wordt vervolgens canule met een 25 G stompe punt infuusnaald. De pijl geeft een ductale opening zonder canule. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 3. Niet-gerichte Contrast reagens binnen de Borst Duct gevisualiseerd door Ultrasound Imaging. (A) Het contrast reagens direct gelokaliseerd na de bevalling en gevisualiseerd (B) 30 min na levering en (C) 45 min na levering. Het voortbestaan van het reagens in de borstklier kanaal maakt visualisatie gedurende de looptijd van dit protocol. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 4: Een Inguinal borstklier geïnjecteerd door de speen met Evans Blue zoutoplossing. (A) Het uiterlijk na intraductale injectie van 0,2 ml Evans Blue oplossing. (B) Bij het openen van de huid, de Evans Blue maakt de visualisatie van de gehele borstklier ductale structuur en bevestigt de intacte ductale constructie. (<strong> C) Whole-mount specimen van een regio lies borstklier na fixatie en kleuring met karmijn aluin. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Deze methode van intraductal levering aan het konijn uier kan worden gebruikt voor het ultrageluid contrast reagentia en vele andere waterige oplossingen, waaronder vitale kleurstoffen en therapeutica. Eerdere studies hebben aangetoond intraductale afgifte van hormonen 17, 18, 19. In knaagdiermodellen, de intraductale afgifte van nucleïnezuren 8, chemotherapeutica 6, 7 en 8 nanodeeltjes dragers zijn 20 uitgevoerd. De hier beschreven protocol kan worden aangepast voor deze toepassingen.
Voor sommige toepassingen, de bevestiging van de levering door intraductal Evans Blue vitale kleurstof, zoals gevisualiseerd door de huid, voldoende zijn. Echter, visualisatie via de huid is diffuus, en afzonderlijke kanalen zijn niet goed demarcated. In eindpunt studies, Evans Blue vitale kleurstof wel een duidelijke kaart van het gehele ductale boom, maar dit vereist de isolatie van het borstweefsel. Daarom contrastversterkte ultrasoon verschaft een alternatieve benadering voor het visualiseren van de intraductale afgifte aan afzonderlijke kanalen in levende dierstudies. We merken op dat Evans Blue kleurstof brengt de hele ductaal boom, met inbegrip van de kleinste diameter terminal kanalen, terwijl het contrast reagens en echografie kaarten alleen de grotere kanalen. Een ander verschil is de mogelijkheid om temporele dynamiek ultrasound bevinden en dat Evans Blue geeft slechts een momentopname meting.
Evenals in de methode voor intraductale afgifte aan het knaagdier borstklier kanaal 9, de grootste uitdaging en beperking van deze techniek zal waarschijnlijk afhankelijkheid deskundigheid operator. De grotere omvang van de ductale openingen in een konijnenmodel vereenvoudigt de procedure, overbodig voerening de techniek met behulp van een stereomicroscoop en verkort de tijd vereist voor nieuwe operatoren vaardigheid ontwikkelen. In onze ervaring, de injectie van 0,1-0,2 ml zoutoplossing aan de kant van de speen vóór het intraductale afgifte is een kritische stap die de duidelijke visualisatie van de ductale openingen (stap 3.2, hierboven) maakt. Nauwkeurige positionering en het opheffen van de levering site is ook van essentieel belang; dit zorgt ervoor dat de oplossing stroomt in het kanaal (stap 3,5 en 3,6, hierboven). Wij merken op dat de co-toediening van het contrastmiddel reagens nood- beschikbare volume voor het testen van andere reagentia of therapeutica vermindert. Toch kan intraductal levering ook worden uitgevoerd zonder imaging of met een eenvoudige controle door Evans Blue aan de levering te bevestigen.
De meest voorkomende noninvasive laesie van de borst ductaal carcinoma in situ (DCIS), waarin abnormale ductale epitheliale cellen prolifereren in de borstklieren buis maar dringen niet through de basaalmembraan naar aangrenzend weefsel. Met de vooruitgang in de mammografische beeldvorming, hebben de detectie van DCIS enorm toegenomen. In de Verenigde Staten, ongeveer 25% van de nieuw gediagnosticeerde borstkanker laesies worden geclassificeerd als DCIS, en in 2020, zal meer dan 1 miljoen vrouwen wonen met DCIS in de Verenigde Staten alleen al 22, 23, 24, 25. Veel DCIS laesies slapend blijven, en de meeste schattingen zien dat slechts 15-40% 21, 22, 23, 24, 25 van DCIS laesies ooit zal ontwikkelen tot invasieve kanker. Er zijn echter nog geen voorspellende biomarkers te helpen bij het identificeren van tumoren die invasief worden.
Naarmate er meer vrouwen worden gediagnosticeerd met deze precancereuze laesie, ernstige vragen met betrekking tot overdiagnose en overbehandeling naar voren zijn gekomen. De behandeling van premaligne ziekte is meestal agressief. De meeste patiënten met DCIS zal chirurgie (lumpectomie of mastectomie) ondergaan, en velen krijgen ook straling 25. Sommige patiënten met hormoonreceptorpositieve DCIS ontvangt ook 5 of meer jaren endocriene therapie, waarvan is aangetoond dat om herhaling te verminderen. Bijwerkingen van deze behandeling kan omvatten beroerte, bloedstolsels, botverlies en verhoogd risico op baarmoeder- en endometriale kankers. Al deze opties hebben ernstige systemische bijwerkingen en beïnvloeden de patiënt de kwaliteit van leven. Er is een grote behoefte aan minder invasieve therapeutische strategieën 25.
De intraductal aflevering van chemotherapeutische middelen in zowel muismodellen en bij borstkankerpatiënten Eerder is aangetoond doeltreffend te zijn, met geen bewijs van systemische toxiciteit of lange termijn histopathologische veranderingenref "> 3, 4, 5, 6. De intraductale toediening van therapeutische middelen kan een dag bieden nieuwe mogelijkheden voor vrouwen gediagnosticeerd met DCIS dat nog niet heeft geleid tot een lokaal invasief laesie. Het potentieel voor het tegengaan tumorgenese tegelijkertijd behoud ductale structuur maakt deze een aantrekkelijke therapeutische strategie 10. Belangrijk is dat de gelokaliseerde levering aanpak zorgt ervoor dat de behandeling van de relevante abnormale cellen bereikt terwijl potentieel het minimaliseren van collaterale schade aan andere weefsels. terwijl konijn tumor modellen zijn niet beschikbaar zijn, kan de normale melkklier van konijnen een relevant model te voorzien test de gelokaliseerde aflevering, veiligheid, transport en kinetiek van opname therapeutica in de borstklier kanaal. Deze in vivo studies de testen en valideren van kandidaat diagnostica en therapeutica bij een relevante weefsel mogelijk zullen maken.
8, 9. De anatomie van de muis borstklier verschilt van de menselijke borst in een aantal belangrijke opzichten, waaronder het weefsel samenstelling en het aantal kanalen die eindigen bij elke speen. Hier breiden wij deze techniek een grotere diermodel waarbij de mammaire epitheliale structuur dichter de anatomie van de menselijke borst 12, 14 vertegenwoordigt. Dit opent de mogelijkheid voor uitgebreide bewaking door beeldvorming en voor het testen van de gelijktijdige intraductale levering van verschillende reagentia aan het konijn borstklier ductaal epitheel. Vooruitgang in gelokaliseerde afgifte aan een geschikt diermodel, met ductale anatomie vergelijkbaar met de menselijke klier, dient de toepassing van niet-i versnellennvasive gerichte therapeutische strategieën bij mensen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| MicroMarker non-targeted contrast reagent | VisualSonics | VS-11694 | |
| Luer Lock 1 mL Syringes | BD | 309628 | |
| Glycopyrrolate 0.2 mg/mL | Wedgewood Compounding Pharmacy | GLYCOP-INJ013VC | 6 month shelf life, supply may be limited. |
| Atropine Sulfate 0.5 mg/mL | Animal Health International | 15320764 | If glycopyrrolate is unavailable. Not to be combined with glycopyrrolate. |
| Ketamine HCL 100 mg/mL | Animal Health International | 21250699 | http://www.animalhealthinternational.com/ |
| Acepromazine 10 mg/mL | Animal Health International | 17640541 | |
| Xylazine 20 mg/mL | Animal Health International | 20101547 | |
| Yohimbine 0.2 mg/mL | Animal Health International | 14588965 | |
| Hair Removing Cream | Veet | Sensitive skin solution. Available through local retailers. | |
| Blunt tip infusion needles | Sai Infusion Technology | B14-50 | http://www.sai-infusion.com/collections/blunt-needles |
| Veterinary Pulse Oximeter | EdanUSA | VE-H100B | http://www.edanusa.com/Product/VE-H100B-Veterinary-Pulse-Oximeter.html |
| Warm Water Pump | Gaymar | TP700 | |
| Warm Water Blanket | Animal Health International | 21232696 | Maxi-Therm Lite Warming Pads |
| Ultrasound system | VisualSonics | Vevo 2100 |
References
- Flanagan, M., Love, S., Hwang, E. S. Status of Intraductal Therapy for Ductal Carcinoma in Situ. Curr Breast Cancer Rep. 2 (2), 75-82 (2010).
- Love, S. M., et al. A Feasibility Study of the Intraductal Administration of Chemotherapy. Cancer Prevention Research. 6 (1), 51-58 (2013).
- Stearns, V., et al. Preclinical and Clinical Evaluation of Intraductally Administered Agents in Early Breast Cancer. Sci Transl Med. 3 (106), 106ra108 (2011).
- Zhang, B., et al. The Safety Parameters of the Study on Intraductal Cytotoxic Agent Delivery to the Breast before Mastectomy. Chin J Cancer Res. 26 (5), 579-587 (2014).
- Mahoney, M. E., Gordon, E. J., Rao, J. Y., Jin, Y., Hylton, N., Love, S. M. Intraductal Therapy of Ductal Carcinoma In Situ: a Presurgery Study. Clin Breast Cancer. 13 (4), 280-286 (2013).
- Murata, S., et al. Ductal Access for Prevention and Therapy of Mammary Tumors. Cancer Res. 66 (2), 638-645 (2006).
- Chun, Y. S., et al. Intraductally Administered Pegylated Liposomal Doxorubicin Reduces Mammary Stem Cell Function In the Mammary Gland but in the Long Term, Induces Malignant Tumors. Breast Cancer Res Treat. 135 (1), 201-208 (2012).
- Brock, A., et al. Silencing HoxA1 by Intraductal Injection of siRNA Lipidoid Nanoparticles Prevents Mammary Tumor Progression in Mice. Sci Trans Med. 6 (217), 2172a2 (2014).
- Krause, S., Brock, A., Ingber, D. E. Intraductal Injection For Localized Drug Delivery To The Mouse Mammary Epithelium. J Vis Exp. (80), e50692 (2013).
- Brock, A., Goh, H. T., Yang, B., Yu, L., Li, H., Loh, Y. H. Cellular Reprogramming: A New Technology Frontier In Pharmaceutical Research. Pharm Res. 29 (1), 35-52 (2012).
- Silverstein, M. J., et al. Ductal Carcinoma In Situ of the Breast. Annu. Rev Med. 51, 17-32 (2000).
- Love, S. M., Barsky, S. H. Anatomy of the Nipple And Breast Ducts Revisited. Cancer. 101 (9), 1947-1957 (2004).
- Virnig, B. A., Shamliyan, T., Tuttle, T. M., Kane, R. L., Wilt, W. J. Diagnosis and Management of Ductal Carcinoma In Situ (DCIS). Evidence Report/Technology Assessment. , AHRQ Publication No. 09-E018 185 (2009).
- Mills, D., et al. Examination of Duct Physiology in the Human Mammary Gland. PLoS One. 11 (4), e0150653 (2016).
- King, B. L., Love, S. M. The Intraductal Approach to the Breast: Raison d'Etre. Breast Cancer Res. 8 (2), 206 (2006).
- Bu, W., Xin, L., Toneff, M., Li, L., Li, Y. Lentivirus vectors for stably introducing genes into mammary epithelial cells in vivo . J Mammary Gland Biol Neoplasia. 14, 401-404 (2009).
- Lyons, W. R. The Direct Mammotrophic Action of Lactogenic Hormone. Proc. Soc. Exp. Bio. Med. 51 (2), 308-311 (1942).
- Fiddler, T. J., Birkinshaw, M., Falconer, I. R. Effects Of Intraductal Prolactin On Some Aspects of the Ultrastructure and Biochemistry of Mammary Tissue in the Pseudopregnant Rabbit. J Endocrinol. 49 (3), 459-469 (1971).
- Falconer, I. R., Fiddler, T. J. Effects of Intraductal Administration Of Prolactin, Actinomycin D and Cycloheximide on Lipoprotein Lipase Activity in the Mammary Glands of Pseudopregnant Rabbits. Biochim Biophys Acta. 218 (3), 508-514 (1970).
- Singh, Y. Influence of Molecular Size on the Retention of Polymeric Nanocarrier Diagnostic Agents in Breast Ducts. Pharm Res. 29 (9), 2377-2388 (2012).
- Jain, R., et al. Atypical Ductal Hyperplasia: Interobserver and Intraobserver Variability. Mod Pathol. 24 (7), 917-923 (2011).
- Betsill, W. L. Jr, Rosen, P. P., Lieberman, P. H., Robbins, G. F. Intraductal Carcinoma. Long-term Follow-up After Treatment by Biopsy Alone. JAMA. 239 (18), 1863-1867 (1978).
- Eusebi, V., et al. Long-term Follow-up of In Situ Carcinoma of the Breast. Semin Diagn Pathol. 11 (3), 223-235 (1994).
- Sanders, M., et al. The Natural History Of Low-Grade Ductal Carcinoma In Situ Of The Breast In Women Treated By Biopsy Only Revealed Over 30 Years Of Long-Term Follow-Up. Cancer. 103 (12), 2481-2484 (2005).
- Esserman, L. J., et al. Addressing Overdiagnosis and Overtreatment in Cancer: A Prescription For Change. Lancet Oncol. 15 (6), e234-e242 (2014).
