Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- ابدأ بإضافة 5 أجنة في E3 متوسطة إلى كل بئر من لوحة 96 بئرا، وإزالة الوسط الزائد بماصة.
تمييع مركب الفائدة بمذيب مناسب، مثل DMSO، لإعداد عدة تركيزات أو جرعات، واختبار تأثير كل جرعة على تطوير الأجنة.
في الوقت المطلوب في التطور الجنيني، ضع لوحة البئر تحت مجهر مناسب لفحص النمط الظاهري للأجنة.
- عادة ما يتم توفير مكتبات الجزيئات الصغيرة في لوحة مصدر 96 بئرا مع كل مركب مخزن في DMSO كمخزن 10 ملليمولار. قبل حوالي 60 دقيقة من وصول الأجنة إلى المرحلة المطلوبة ، قم بإذابة عدد مناسب من لوحات 96 بئرا تحتوي على aliquots من الجزيئات الصغيرة.
تدور لفترة وجيزة أسفل لوحات في جهاز طرد مركزي الطاولة مجهزة محول لوحة متعددة الآبار. إزالة شريط ختم الألومنيوم من لوحة المصدر. باستخدام ماصة 12 قناة، وتمييع المركبات في لوحة المصدر إلى التركيز المطلوب مع DMSO. في هذا البروتوكول، ونحن نستخدم تركيز نهائي 0.5 ملليمولار وإضافة 4.75 ميكرولتر من DMSO لتخفيف لوحة الأسهم 10 ملليمولار.
عندما تصل الأجنة الموجودة في الصفيحة ذات ال96 بئرا إلى المرحلة المطلوبة، استخدم ماصة من 12 قناة لنقل 2.5 ميكرولتر من المركبات من لوحات المصدر إلى لوحات المستلم التي تحتوي على الأجنة. قم بتغطية اللوحات التي تحتوي الآن على الأجنة والمركبات ذات الأغطية وسجل رقم تعريف لوحات المصدر على لوحات الأجنة.
قبل أداء الشاشة البصرية ، وصياغة معيار ضرب محددة. على سبيل المثال ، في شاشة لمثبطات جزيء صغير من التنمية الأمامية ، قد يكون ضرب مركبا أن يمنح فقدان الدماغ الأمامي.
في الأوقات المطلوبة في التنمية، وإزالة لوحات 96 جيدا تحتوي على الأجنة المعالجة المركبة من الحاضنة وفحص كل بئر تحت المجهر ستيريو.
ضع لوحة 96 بئرا مرة أخرى في الحاضنة.
يجب أن يكون توقيت الإضافة المركبة لإعادة الاختبار مطابقا لتوقيت الفحص الأصلي.
