Encyclopedia of Experiments: Biology
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- 96ウェルプレートの各ウェルにE3培地に5個の胚を加え、ピペットで余分な培地を取り除きます。
DMSOのような適切な溶媒で目的の化合物を希釈して、いくつかの濃度または用量を調製し、各用量が胚の発達に及ぼす影響をテストします。
胚発生の望ましい時期に、胚の表現型を調べるために適切な顕微鏡の下にウェルプレートを置く。目の喪失、成長の遅れ、または発達中の胚におけるメラノサイトの喪失などの表現型を観察してもよい。
- 低分子ライブラリは通常、DMSOに10ミリモルストックとして保存された各化合物を備えた96ウェルソースプレートに供給され、胚が所望の段階に達する約60分前に、小分子のアリコートを含む適切な数の96ウェルプレートを解凍します。
マルチウェルプレートアダプターを装備した卓上遠心分離機のプレートを簡単に回転させます。ソースプレートからアルミニウムシールテープを取り出し、ソースプレートの化合物をDMSOで所望の濃度に希釈します。
96ウェルプレートの胚が望ましい段階に達したら、12チャンネルピペットを使用して、2.5マイクロリットルの化合物をソースプレートから胚を含むレシピエントプレートに移します。 胚と化合物を蓋で覆い、胚プレートにソースプレートの識別番号を記録します。プレートを穏やかに渦巻いてプレートを混ぜて28.5°Cのインキュベーターに入れます。
視覚画面を実行する前に、特定のヒット基準を策定する。例えば、前脳の発達の小分子阻害剤のためのスクリーンで、ヒットは前脳の喪失を与える化合物であり得る。
開発中の所望の時期に、培養器から処理された胚を含む96ウェルプレートを取り除き、ステレオ顕微鏡下で各井戸を調べる。前脳発達の小分子阻害剤をスクリーニングする際には、前脳発達阻害のマーカーとして28時間でプレートを検査する。
96ウェルプレートをインキュベーターに戻して、目と前脳の喪失を48時間で再確認します。胚は前脳を持たないにもかかわらず、少なくとも4日間は生き残ります。
再試験のための化合物添加のタイミングは、元のスクリーニングのそれと同じである必要があります。引き出された表現型が化合物の再試験に用量依存的に再現されたときにヒットが確認されます。
