Encyclopedia of Experiments: Biology
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- 96웰 플레이트의 각 웰에 E3 배지5개를 첨가하고 파이펫으로 과잉 배지를 제거합니다.
DMSO와 같은 적절한 용매로 관심 있는 화합물을 희석하여 여러 농도 또는 용량을 준비하고 배아 개발에 대한 각 투여량의 효과를 테스트합니다.
배아 발달시 원하는 시기에, 배아의 표현형을 검사하기 위해 적합한 현미경 아래에 웰 플레이트를 배치합니다.
- 소분자 라이브러리는 전형적으로 10 밀리머 스톡으로 DMSO에 저장된 각 화합물과 함께 96웰 소스 플레이트에 공급됩니다.
멀티웰 플레이트 어댑터가 장착된 탁상 원심분리기에서 플레이트를 짧게 회전합니다.
96웰 플레이트의 배아가 원하는 단계에 도달하면 12채널 파이펫을 사용하여 소스 플레이트에서 배아를 포함하는 수신자 판으로 2.5 마이크로리터의 화합물을 전송합니다. 이제 배아와 화합물을 뚜껑으로 덮고 배아 플레이트의 식별 번호를 기록합니다. 부드럽게 소용돌이치면 판을 혼합하고 28.5도의 섭씨 인큐베이터에 놓습니다.
시각적 화면을 수행하기 전에, 특정 히트 기준을 공식화. 예를 들어, 전뇌 발달의 작은 분자 억제제에 대한 화면에서, 히트는 전뇌의 손실을 부여하는 화합물일 수 있습니다. 눈의 부재는 전뇌의 손실의 쉬운 시각적 지표이며 분석에 형광이 필요하지 않습니다.
개발 시, 인큐베이터로부터 처리된 배아를 함유한 96웰 플레이트를 제거하고 스테레오 현미경하에서 각각 의검사를 실시합니다.
96웰 플레이트를 인큐베이터에 다시 배치합니다. 48시간 후에 눈과 뇌의 손실을 재확인합니다. 배아는 전뇌가 없더라도 적어도 4일 동안 생존할 것입니다.
재검사를 위한 화합물 첨가의 타이밍은 원래 스크리닝의 타이밍과 동일해야 한다. A 히트는 유도된 표현형이 화합물의 재검사에 대한 용량 의존적 방식으로 재현될 때 확인된다.
