3D培养基膜测定：在3D基膜蛋白矩阵上培养癌细胞，研究细胞入侵

首先，将冷底膜基质倒入玻璃底盘中，然后用移液器尖均匀地铺开。让膜在37摄氏度下凝固，持续供应二氧化碳。尝试对荧光标记的癌细胞进行脱脂，将其从板表面分离，并在培养介质中补充它们。

将这些恢复的细胞转移到圆锥管中并旋转。去除超自然物，并补充培养介质中的细胞。计数后，将包含所需细胞数的细胞与地下室基质的细胞数量以相等的比例混合。

轻轻地将细胞基质混合物镀在凝固的地下室膜基质涂层盘上。让细胞基质混合物在37摄氏度下凝固，持续供应二氧化碳。混合物凝固后，在菜肴中加入培养介质，并在所需的时间内孵育。

癌细胞可以形成富含作用的膜突起，并释放蛋白酶来降解细胞外基质，从而侵入基质。将菜放在荧光显微镜下，每隔一段时间分析形成突起的细胞。在示例协议中，我们将在 3D 基膜基质上培养乳腺癌细胞，以研究入侵过程。

在开始培养过程之前，将地下室膜基质、P200移液器和移液器尖端放在冰上过夜，温度为4摄氏度。第二天，使用冰冷的200微升移液器的尖端，将矩阵的50微升以螺旋状模式铺在Confocal 1号玻璃底盘的底部。然后将菜放在37摄氏度的细胞培养孵化器中，含5%的二氧化碳，至少30分钟。

当基质进行凝固时，尝试将 70% 到 80% 的汇成 100 毫米细胞板。一旦细胞开始分离，用10毫升的介质灭活特异素，然后将细胞悬架转移到15毫升的圆锥管中。

在 100 Gs 和 4 摄氏度下将细胞离心三分钟。当细胞向下旋转时， 将 50微升矩阵加入一个1毫升的微中轴管，每盘地下室膜矩阵，并将管子放在冰上。当细胞完成旋转时，吸气超自然分子，而不会干扰颗粒，然后用1毫升的介质恢复细胞并计数。

接下来，将2.5倍10到第4个细胞转移到一个新的微中心管中，用介质将细胞悬架顶到最后体积为50微升。然后以 1：1 的比例将 50 微升的冰冷地下室膜基质添加到细胞中，最终体积为 100 微升。将基质轻轻镀在凝固的基膜基质上，使细胞嵌入细胞培养孵化器中的基质中。

30分钟后，用2毫升的介质覆盖矩阵，并将菜放回孵化器，在实验期间每天更换介质。在实验期间，每天使用一次光显微镜的10倍目标，拍摄20张悬浮在地下室膜基质中的殖民地的微分干扰对比图像。盲目分析图像，以确定细胞群落的恒星形成。如果观察到细胞球体的一个或多个投影，则殖民地被视为恒星。