Name: نقل النووي في البويضات ماوس (فيديو) | JoVE Journal
Uploaded: 2006-11-30T00:00:00.000+00:00
Duration: 14 min 17 s
Description: تعلم تقنية نقل النووي في بويضات الفأر لإعادة برمجة النوى المتمايزة إلى حالة جنينية. يوضح هذا البروتوكول خطوات التحضير والمعايرة لدعم أبحاث الخلايا الجذعية والطب التجددي.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

وأود أن أشكر DE الدكتور إخفاء Akutsu لتقاسم له NT الحيل والدكتور ستيفن وسوليفان غاريت Birkhoff لقراءة نقدية للبروتوكول.

التحضير : <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li class="jove_step" style=";text-align:right;direction:rtl"> ويمكن العثور على وصف تفصيلي لفرط الإباضة وmicrodrop ثقافة الجنين في مكان آخر 2. </li><li class="jove_step" style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد طبق بتري مع microdrops من مستنبت جنين (على سبيل المثال KSOM ، Chemicon). مع تغطية الزيوت المعدنية (وينبغي اختبار دفعات الزيوت المعدنية من أجل التوافق مع ثقافة الجنين). يوازن في 37 درجة مئوية في الهواء بالإضافة إلى 5 ٪ CO 2. (وفي الحرارية الكترون الحاضنة للمياه 3110 تغلف أو ما يعادلها) </li><li class="jove_step" style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد طبق لعزل البويضات : قطرات مكان hepes مخزنة CZB وهيالورونيداز (0.1 ٪ ث / ت ، سيجما) في نصف الطبق وHCZB في النصف الآخر. مع تغطية الزيوت المعدنية. الحفاظ على طبق الحارة على مرحلة ساخنة من مجهر تشريح. </li><li class="jove_step" style=";text-align:right;direction:rtl"> تحضير المجهر : ضع ماصة بعقد القطر الخارجي للμ م حوالي 50 (أصغر قليلا من قطر البويضة) ، وفتح μ م حوالي 20 في حامل ماصة واحدة. ماصات عقد سهلة لجعل بالمعدات اللازمة ، ومجتذب إبرة (سوتر الآلات) وmicroforge (Narishige) ، ولكن يمكن أيضا أن تكون شراؤها من Humagen. تحميل 3-5 ل μ الزئبق في ذيل micropipette (الداخلية قطرها متر μ 8). تجنب تسرب الزئبق. إعداد الطبق مع قطرات صغيرة عدة في كل من 11 ٪ ث / ت PVP (بوفيدون) في HCZB و 5 μ غ / مل مثبط حركة الخلايا B في HCZB. استخدام غطاء طبق بيتري بدلا من الطبق نفسه غطاء لديه حافة القصير الذي لن تتدخل مع حركة عقد وماصات قلع. محاذاة ماصة عقد وقلع ماصة في انخفاض HCZB. نضح a HZCB قليلا الى غيض من ماصة القابضة. </li><li class="jove_step" style=";text-align:right;direction:rtl"> إعداد الخلايا المانحة يعتمد إلى حد كبير على نوع من الخلايا والتجربة المحقق تعتزم القيام بها. بصفة عامة ، ينبغي أن يعامل الخلايا المانحة مع انزيم بروتين مثل التربسين وأبقى على الجليد للحد من الالتصاق حتى نقلها. </li><li class="jove_step" style=";text-align:right;direction:rtl"> الموت ببطء إنسانية الفئران 14-15 بعد ساعات من إدارة قوات حرس السواحل الهايتية. ناقلة البيضات الحصاد وتشريح لها في قطرات HCZB - هيالورونيداز الدافئة. بعد تقريبا. 5 دقائق ، وسوف تكون حرة في الغالب البويضات من خلايا الركام. ثم ينبغي أن يكون غسلها عدة مرات في HCZB ، ثم غسلها مرة أخرى في قطرات KSOM قبل معايرتها ، ويوضع في الحاضنة حتى قلع. </li></ol> استئصال تتم المعالجات مع micromanipulators الهيدروليكية (Narishige) على مجهر مقلوب ، مثل TE200 نيكون. ويستخدم micromanipulator بيزو (Primetech) لحفر الشفافة زونا. ويمكن شراء شقة ذات الرؤوس وقلع ماصات نقل من Humagen. تنظيف وتليين ماصة قلع في قطرات PVP بطرد قطرات الزئبق المجهرية والشفط وطرد PVP. لمنع الالتصاق من الإبرة ، ينبغي أن يتم نفس الإجراء بين كل مجموعة من البويضات التي يتم منزوعة النواة أو نقلها. وضع مجموعة صغيرة من البويضات في الانخفاض B - HCZB مثبط حركة الخلايا. وينبغي تكييف حجم المجموعة إلى مستوى من الخبرة من المحقق. لا ينبغي أن تبقى البويضات على المسرح لمدة أطول من 20-30 دقيقة. نقل الصكوك إلى قطرات B - HCZB مثبط حركة الخلايا. ينبغي جلب ماصة عقد وماصة استئصال متماشيا مع الطائرة الاستوائية من البويضة. هذا لن يكون ممكنا إذا كان لديه عقد ماصة قطرها الخارجي أصغر قليلا من البويضة نفسها. تدوير بويضة حتى يمكن رؤية المغزل الطورية الانكسار مختلفة. إذا كان مبتدئا لا تستطيع رؤية المغزل ، ويمكن التعرف على لوحة الطورية باستخدام الحمض النووي هويشت الصبغة والإضاءة فوق البنفسجية ، مع ذلك ، أنه لا يتوافق مع التطور الجنيني كفاءة. موقف المغزل الطورية في 3:00 والاحتفاظ بها بشكل جيد مع ماصة القابضة. تطبيق البقول بيزو لاختراق الشفافة زونا. لوحة اللمس الطورية مع ماصة قلع. مرة واحدة يمكن أن تكون مقاومة المغزل الطورية &#39;شعر&#39; ، نضح المغزل وسحب الإبرة. السيتوبلازم البويضة هو السائل ، والمغزل الطورية التحركات ولكن كما أجمة عندما تطرق مع ماصة. في محاولة لتقليل كمية السيتوبلازم التي يتم إزالتها مع المغزل. بعد أن تم منزوعة النواة مجموعة من البويضات ، ويغسل لهم من خلال مستنبت جنين ووضعها في الحاضنة حتى نقلها. لا ينبغي أن بعض البويضات منزوعة النواة ولكن ينبغي أن يتم نقل وتفعيلها يكون بمثابة الرقابة لاستئصال. فإن هذه البويضات شظية في غضون عدة ساعات ، مشيرا إلى استئصال ناجحة. نقل النووي خلايا المكان الى حل PVP (11 ٪ في HCZB PVP). إذا كان كثير من الحيوانات المستنسخة القبض على خلية المرحلة 1 ، ينبغي خفض تركيز PVP إلى 5 ٪ أو أقل. خلايا المزيج جيدا الطرافةح PVP. تلتقط الخلايا مع ماصة مع القطر الداخلي أصغر قليلا من قطر الخلية. يجب على غشاء الخلية على كسر الطموح. في بعض الحالات ، يمكن استخدام طرد المتكررة والطموح فضلا عن تطبيق البقول بيزو لطيف لكسر الخلية المانحة. وينبغي بذل قطرة جديدة من الخلايا المانحة مع كل مجموعة من البويضات نقله ، والخلايا المانحة تصبح لزجة بعد بعض الوقت. حقن الخلايا المانحة بعد وقت قصير من كسر كسر الغشاء. لنقل ، والتركيز على متن الطائرة الاستوائية في البويضة نفسها بدلا من الطائرة الاستوائية من زونا الشفافة ، ونقل موقف وماصة عقد في نفس الطائرة. عقد البويضة بما في ذلك الجزء من السيتوبلازم لها بحزم. اختراق الشفافة زونا باستخدام نبضات بيزو. جعل النواة المانحة لغيض من ماصة ، ثم دفع غيض ماصة تقريبا إلى الجانب الآخر من بويضة منزوعة النواة ، على مقربة من ماصة عقد ، مما يجعل من ثلم في أعماق الخلية البيضية. نضح على كمية صغيرة جدا من السيتوبلازم البويضة في ماصة ، وتطبيق واحد بيزو نبض ضعيف لكسر غشاء البويضة ، إخراج النواة من الجهات المانحة ، وسحب الإبرة بسرعة بينما الشفط في غشاء هيولي في الطرف الأيمن من ثلم. في وقت واحد ، وسحب الإبرة والشفط ، وينبغي أن يكون من الممكن لإغلاق ثقب التي خلفها NT. وهذا الثقب إزالة &quot;تقنية تقليل عدد البويضات التي ليز خلال NT. غسل البويضات بناؤها في KSOM وإعادتها إلى حاضنة لساعات 1-3. تنشيط البويضة تعد واحدة من نصف الطبق مع قطرات من الكالسيوم MCZB مجانا والنصف الآخر مع قطرات من الكالسيوم MCZB مجانا زائد 2 + 10MM الأب و 5 μ غ / مل مثبط حركة الخلايا B لكبح القطبية قذف الجسم. يوازن لمدة 30 دقيقة. CO 2 أقل من 5 ٪ في الهواء. يغسل جيدا في الأجنة NT - MCZB الكالسيوم الحرة ومكان لهم بعد ذلك في مجموعات صغيرة في قطرات مختلفة من الكالسيوم MCZB الحرة. عودة الطبق إلى حاضنة والثقافة لمدة 5-6 ساعات. للسيطرة على تفعيل بروتوكول للظروف اصطناعية والثقافة الجنين ، يجب استخدام البويضات غير منزوعة النواة. كما ستعمل على تطوير الاجنة بكرية التوالد. بعد التنشيط ، وغسل الأجنة من خلال أجنة KSOM وضعها في الحاضنة لمدة طويلة الأجل الثقافة. وينبغي أن تكون مرئية Pronuclei في هذه المرحلة الزمنية ، مشيرا إلى نقل ناجحة. كتاب الطبخ الجنين الثقافة وسائل الإعلام سيد الأملاح تبدأ عالى النقاء 980 ​​مل O 2 H العقيمة في زجاجة 1 لتر إضافة مكونات الجافة : كلوريد الصوديوم 4760 ملغ (81mM) سيغما S - 5886 بوكل 360 ملغ (5mM) سيغما P - 5405 MgSO 4 • 7H 2 O 290 ملغ (1.18mM) سيغما M - 2773 KH 2 ص 160 4 ملغ (1.17mM) سيغما P - 5655 EDTA 2NA 40 ملغ (0.1mM) سيغما E - 6635 الجلوكوز (D) 1000 ملغ (و 5.5mm) سيغما G - 6152 إضافة مكونات السائل NA - اكتات (حمض اللبنيك) 5.3 مل &amp; نباهوجان ساماج ؛ سيغما 44263 Pen&#39;Strep 10 مل Gibco 15140-122 للاملاح ألبوم MCZB : فلتر تعقيم 500 مل أملاح الرئيسي (جيد لمدة 3-4 شهور ؛ المحل في 4 درجات مئوية) للاملاح ألبوم HCZB : تبدأ مع 500 مليلتر أملاح الرئيسية إضافة 50 ملغم PVA (البارد للذوبان ؛ سيغما P - 8136) يحرك المزيج لمدة 30-60 دقيقة ومعقمة تصفية (جيد لمدة 3 أشهر ؛ المحل في 4 درجات مئوية) كاليفورنيا + + الحرة MCZB (لتنشيط البويضات في 5 ٪ CO 2) تبدأ مع 99 مل من أملاح الأسهم MCZB إضافة مكونات الجافة : 211 ملغ 3 NaHCO سيغما S - 5761 NA - البيروفات (حمض البيروفيك) 3 ملغ سيغما P - 4562 الجلوتامين L - 15mg سيغما G - 8540 ألبومين المصل البقري (BSA) 500 ملغ سيغما A - 3311 تذوب جميع المكونات حتى دوامة ؛ تصفية العقيمة. HCZB (للالمجهرية في الغلاف الجوي المحيط) تبدأ مع 99 مل من أملاح الأسهم HCZB إضافة مكونات الجافة : Hepes - 520 ملغ نا سيغما H - 3784 NaHCO 3 42 ملغ سيغما S - 5761 إضافة مكونات السائل : 128 ملي CaCl 2 (18.8g / لتر) 1 مل سيغما C - 7902 ضبط الرقم الهيدروجيني إلى 7.5 مع حمض الهيدروكلوريك N 1 دوامة حتى المنحل ؛ تصفية العقيمة.

<ol><li>Eggan, K., Jaenisch, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aEggan%2C+K+%22Mammalian+and+Avian+Transgenesis-+New+Approaches%22">Mammalian and Avian Transgenesis- New Approaches</a>. Pease, S., Lois, C. , Springer. (2006).</li>
<li>Nagy, A., Gertsenstein, M., Vintersten, K., Behringer, R. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aNagy%2C+A+%22Manipulating+the+mouse+embryo%22">Manipulating the mouse embryo</a>. Press, C. S. H. L. , (2003).</li>
<li>Wakayama, T., Perry, A. C., Zuccotti, M., Johnson, K. R., Yanagimachi, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Full-term+development+of+mice+from+enucleated+oocytes+injected+with+cumulus+cell+nuclei%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Full-term development of mice from enucleated oocytes injected with cumulus cell nuclei.</a> Nature. 394, 369-374 (1998).</li>
</ol>

ليس لدى المؤلفين أي تضارب في المصالح للإفصاح عنه.

حظا سعيدا!

يرجى التحقق من التراكيب مخازن إضافية في إطار البروتوكول.

نقل النووي في البويضات ماوس

Nuclear Transfer into Mouse Oocytes

يمكن نقل النووي في بويضة غير مخصبة استعادة التنموية المحتملة للخلية متمايزة. هذا يدل على أن عمليات التنمية الأساسية ، والتمايز والشيخوخة هي اللاجينية بدلا من العمليات الجينية. على عكس هذه العمليات تفتح آفاقا مثيرة في البحوث الأساسية ، وأكثر في المستقبل البعيد ، في مجال الطب التجديدي. في الماوس ، يمكن اشتقاق خلايا جذعية جنينية من أجنة مستنسخة المرحلة سابق للانغراس. مثل الخلايا الجذعية الجنينية لديها القدرة على أن تؤدي إلى جميع أنواع الخلايا للكائن أخلاقي. الأهم من ذلك ، هذه الخلايا متطابقة وراثيا إلى الجهة المانحة. إذا كان ينطبق على الإنسان ، وهذا من شأنه أن يسمح للاشتقاق الخلايا الجذعية من المريض. ويمكن عندئذ أن تكون هذه الخلايا المتمايزة في نوع من الخلايا المتضررة للمريض ، ودرس في المختبر ، أو استخدامها لتحل محل الخلايا التالفة أو المفقودة. دراسة نقل النووي في الفأر لا يزال هاما لأنها يمكن أن تبلغنا عن مبادئ برمجة النووية. والمقصود من هذا الفيلم والبروتوكول المرافق له للمساعدة في تعلم نقل النووي في الفأر ، وهو أسلوب وضعت في البداية في مجموعة من Yanagimachi الأستاذ (اكاياما وآخرون 1998).

والمقصود من هذا الفيلم والبروتوكول للمساعدة في نقل التعلم النووية.

يمكن أن يؤدي النقل النووي إلى بويضة غير مخصبة إلى استعادة القدرة التطويرية لخلية متمايزة. وهذا يثبت أن العمليات التي تكمن وراء...

نقوم بإجراء عملية النقل النووي (NU Nuclear transfer) لأن مجموعتنا البحثية مهتمة بإعادة البرمجة. وتعتبر هذه العملية مذهلة حيث يمكن إعادة برمجة النواة المتمايزة لتعود إلى الحالة الجنينية. وهذه هي الكواشف case SUM وHCCV، وهذا هو إنزيم الهيالورونيداز (hyaluronidase).أولاً، أقوم بتجهيز طبق، والذي سيُنقل إلى الحاضنات ليتواءم مع CO2. هذه عبارة عن قطرات، عدة قطرات لـ Turing مغطاة بالزيت المعدني، وذلك لمعايرة جو CO2.الآن قم بوضع قطرة من HCZB. ستُستخدم هذه القطرة لعملية الغسيل. تكون هذه الكمية كبيرة وتُغطى مرة أخرى بهذا الزيت المعدني.هذا مرتفع، وهذا ينخفض مع الهيالورونيداز. هذا الجزء هنا عبارة عن قطرات HCCP فقط. هذه مخصصة للغسيل.يُستخدم هذا لإزالة خلايا ulu من الجانب O. يتم تسخين هذه المرحلة لتبقى دافئة حتى أعود وأحضر عينات الزيت من الفئران وأغطي كل شيء بالزيت المعدني. هذه قطرات PVP لتنظيف الإبرة ولوضع الخلايا بداخلها، وهذا HCCB بالإضافة إلى Cyla B. وهنا سأقوم بإجراء العمليات.حسناً، هذا هو لون الإبرة. ما أفعله الآن هو سحب إبرة. حسناً، لدي الآن إبرة جيدة جداً ورقيقة للغاية.وهذا هو جهاز الصهر الدقيق (micro forge). يجب عليّ قطع الإبرة عند موضع معين للحصول على ماصة إمساك بالحجم المناسب. أقوم بتسخين الكرة الزجاجية، ثم أنزل بالإبرة لتنصهر وتلتصق بها، والآن أصبحت مكسورة.أقوم بإبعاد هذا. كما ترى، فإن الإبرة المكسورة مثالية. الآن أنتقل إلى هنا، وأقوم برفع درجة الحرارة.الآن ستتحول الكرة الزجاجية إلى اللون الأحمر وستنصهر، قم بدفع الكرة الزجاجية لتشكل منحنى. هذا كافٍ، سأقوم بإزالتها.كما ترون، أقوم الآن بإدخال الإبرة. لقد انتهينا للتو من تجهيز ماصة التثبيت، لذا نقوم بتركيبها في هذا الرأس. والآن، نعيد إدخالها في المجهر.ماصة دقيقة، وأنبوب شعري مُعبأ بالزئبق. قمت بتعبئته في هذه الرأس. قم بتعبئة هذا الأنبوب الشعري هنا بالزئبق.يتم إدخاله إلى الداخل. ثبّت الإبرة هنا في هذا الرأس. اربطها بإحكام، ثم اسحبها للخلف.سيؤدي التدوير في اتجاه عقارب الساعة هنا إلى دفع الزئبق إلى الأمام حتى تتمكن من رؤيته. والآن نضع الطرف في الزيت. أرأيت؟ والآن أقوم بتحريك الإبرة لأسفل للحصول على الرؤية.قم بطرد بعض قطرات الزئبق ثم اسحب بعض الـ QVP. هذا جيد. وبعد ذلك، حركه للأعلى مرة أخرى.أتوجه إلى HCCB وأتحرك للأسفل في الثقب. بالنسبة لرأسي، أتوجه إلى P، وهي ماصة الفئران. أحتاج إلى تحضير أنبوب شعري لإدخاله هنا. شكراً. تم بالفعل. جيد.لذا، قم بتجهيز بعض الأنابيب الشعرية. حسناً. وفي الأنبوب. أنا لِي.لقد أتيت من سويسرا وبدأت هذا العمل منذ عام واحد، حيث انضممت إلى مختبر K وبدأت في تعلم النقل النووي. إنه حقاً مكان رائع والعمل هنا متميز للغاية. وبالطبع، تعد هذه التجربة معقدة للغاية وقد تظهر العديد من المشكلات أثناء تنفيذها.لذلك، عند البدء، قد تواجه مشكلات مثل تحلل العديد من الخلايا أثناء عملية التنوي أو أثناء النقل. أو قد تجد أنه على الرغم من نجاح عملية النقل، إلا أن الخلايا لا تنمو. ويمكن أن يكون هناك دائمًا أسباب عديدة لذلك.أقصد أنه يمكنك البدء بنظام الزرع لجميع المواقع. لذا، يحتاج المرء دائماً إلى بعض الضوابط، مثل أجزاء من الضابط الجيني أو بعض الأجنة المخصبة لاختبار نظام الزرع والحاضنات. وبعد ذلك، تحتاج أيضاً إلى تحسين المهارات في استخدام المجهر.لذا يتطلب الأمر الكثير من التدريب حتى تتمكن من تطعيم الجانب بشكل موثوق ثم النقل مرة أخرى. المسألة مجرد تدريب، وقد يستغرق الأمر بضعة أسابيع أو أشهر حتى تتقن هذه العملية. وبخلاف ذلك، تصبح العينة جاهزة للتجارب الطويلة.لذا، من الجيد تخصيص يوم كامل لهذه العملية. ومن الأمور الصعبة في البداية أيضاً هي عملية السحب بالماصة، لذا يجب تجنب تكوين الفقاعات، والتحكم في العملية جيداً لضمان عدم فقدان الرؤية الواضحة، وخاصة أنك قد تتسبب في تلف المستعمرة؛ نظراً لأن الطبقة الخارجية من الـ sonar lucita تكون مفتوحة، فمن الممكن عند استخدام الماصة أن يتضرر ذلك المستعمرة مما يؤدي إلى تسربه من الـ sonar lucita.لذا، يجب أيضاً توخي الحذر لتجنب وجود زيت في أنبوب الفم. وكذلك عدم السحب أو النفخ بقوة مفرطة، ولكن اكتساب هذه المهارة أمر سهل نسبياً.

Research

JoVE Journal

Biology

علم الأحياء

نظهر هنا التي يمكن استخدامها عبر إعادة برمجة جينية نقل نواة الخلية الجسدية (SCNT) بوصفه أداة لتوليد نماذج الفأر مع محددة مسبقا مستقبلات الخلايا التائية (TCR) الخصوصيات. هذه الفئران transnuclear تعبر عن TCR المقابلة من موضع الذاتية الخاصة بهم تحت سيطرة المروج المحلية.

Transnuclear الفئران مع الخصوصيات المحددة مسبقا ضد مستقبلات الخلايا T المقوسة الغوندية الحصول عليها عن طريق SCNT

البويضات عرضة لعدم توازن الصبغيات بسبب أخطاء في العزل الصبغي خلال نضوج الانتصافي. البيض يمكن أن تسبب العقم مختل الصيغة الصبغية ، والإجهاض ، أو اضطرابات النمو مثل متلازمة داون. هنا ، نحن تصف طرق لإدخال المواد المختارة في البويضات وأساليب لدراسة وتقييم النضج الانتصافي الصيغة الصبغية.

الماوس Microinjection سيت ، والنضج وتقييم الصيغة الصبغية

يصف هذا الفيديو الحقن النووي لنواقل الفيروسات العدسية في الفضاء المحيط لجنين الفأر المخصب. يحتوي فيروس العدسات على الجين المعدل ، والذي يتم دمجه في جينوم الجنين المخصب ، مما يؤدي في النهاية إلى ظهور الفئران المعدلة وراثيا.

حقن perivittelline القائم على ناقلات الفيروسات العدسية: طريقة لتحويل الجين المعني إلى بويضات فأر مخصبة أحادية الخلية

هنا نقدم بروتوكول لتوصيف البويضات غاري الماوس على أساس تنظيم نويي.

عزل وتوصيف ماوس الغارية البويضات واستنادا إلى منظمة ونين نويي

يصف لنا طريقة تحسنت بشكل كبير للاستنساخ الماوس باستخدام تريتشوستاتين أ، وفيتامين ج، والبومين المصل البقري منزوع. علينا إظهار بروتوكول مبسط وقابل لإعادة الإنتاج الذي يدعم تطوير كفاءة الأجنة المستنسخة. ومن ثم، يمكن أن يصبح هذا الأسلوب إجراء موحد لاستنساخ الماوس.

العلاج التوافيقيه Trichostatin A وفيتامين ج يحسن كفاءة استنساخ الفئران بنقل نواة الخلية الجسدية

المتغيرات الجينية المرتبطة بأمراض الإنسان تبدأ لتصبح كشف، تزداد أهمية وضع نظم لتقييم سرعة الأهمية البيولوجية لتلك المتغيرات التي تم تحديدها. ويصف هذا البروتوكول الأساليب لتقييم وظيفة الجينات البشرية أثناء الانقسام الاختزالي الإناث الأول باستخدام بويضات الماوس.

استخدام الماوس بويضات لتقييم وظيفة الجينات البشرية أثناء الانقسام الاختزالي أنا

يتم تقديم بروتوكول محسن يتيح استنفاد مراكز تنظيم الأنابيب الدقيقة السيتوبلازمية في بويضات الفئران أثناء الطور الاستوائي الأول باستخدام ليزر الفيمتو ثانية القريب من الأشعة تحت الحمراء.

الاجتثاث بالليزر متعدد الفوتون لمراكز تنظيم الأنابيب الدقيقة السيتوبلازمية في بويضات الفأر

الخطأ في فصل الكروموسومات هو سمة شائعة في البويضات. لذلك ، فإن دراسة نقطة تفتيش تجميع المغزل تعطي أدلة مهمة حول الآليات اللازمة لإنتاج بيض صحي. يصف البروتوكول الحالي ثلاثة مقايسات تكميلية لتقييم سلامة نقطة تفتيش تجميع المغزل في بويضات الفئران.

تقييم سلامة نقطة تفتيش تجميع المغزل في بويضات الفأر

يوفر هذا البروتوكول إطارا تجريبيا لتوثيق التأثير المادي للهيكل الخلوي على الشكل النووي والعضيات الداخلية الخالية من الغشاء في نظام بويضات الفأر. يمكن تكييف الإطار للاستخدام في أنواع الخلايا والسياقات الأخرى.

التقاط التحريض القائم على الهيكل الخلوي لنواة بويضة الفأر عبر المقاييس المكانية

هذا البروتوكول يوضح تقنية لاستخراج البويضات أو الأجنة في مرحلة مبكرة من قناة البيض المخصب من الفئران. القدرة على تحديد infindibulum وادخال ابرة في نهاية حادة من الضروري القيام بشكل صحيح الإجراء.

استرجاع البويضات ماوس

تعلم تقنية نقل النووي في بويضات الفأر لإعادة برمجة النوى المتمايزة إلى حالة جنينية. يوضح هذا البروتوكول خطوات التحضير والمعايرة لدعم أبحاث الخلايا الجذعية والطب التجددي.

نقل النووي في البويضات ماوس

استكشف المزيد من الفيديوهات