تصور الإجهاد التأكسدي الناتج عن الممرض لدى C. elegans باستخدام SKN-1 الموسوم ب GFP
موسوعة JoVE للتجارب
علم الأحياء الدقيقة
0 مشاهدة • 3:12 دقيقة • March 31st, 2026
ابدأ بطبقين يحتويان على ديدان C. elegans تعبر عن SKN-1 البروتين الفلوري الأخضر الموسوم بعلامة SKN-1، وهو عامل نسخ موجود في السيتوبلازم الأمعاء. تحتوي هذه الديدان أيضا على حبيبات ليبوفوسين معوية تظهر التألق الذاتي.
يتم زرع إحدى اللوحين ببكتيريا غير ممرضة كمجموعة ضابطة، والأخرى مع البكتيريا الممرضة كمجموعة اختبار.
في مجموعة الاختبار، يسبب بيروكسيد الهيدروجين الناتج عن الممرض الإجهاد التأكسدي، مما يحفز انتقال SKN-1 إلى أنوية الأمعاء.
في المجموعة الضابطة، يبقى معظم SKN-1 موزعا بشكل منتشر في السيتوبلازم.
اغسل كل طبق باستخدام مخزن وانقل الديدان إلى أنابيب.
جهاز طرد مركزي لفصل الديدان وإزالة المخزن الخلفي.
أضف وسط يحتوي على أزيد الصوديوم لتخديرها.
قم بتركيب الديدان على وسادات الأغاروز، وضع أغطية الديدان، وراقب تحت مجهر فلوري. استخدم التألق الذاتي لتصور حدود النواة.
تشير إشارة SKN-1 النووية القوية في الاختبار، مقارنة بالإشارة السيتوبلازمية المنتشرة في الضابطات، إلى إعادة تموضع نووي وتؤكد الإجهاد التأكسدي الناتج عن الممرض.
باستخدام ماصحة، أضف حوالي 100 يرقة L4 إلى كل صفائح بذور من المكورات العقدية وNGM بذور الإشريكية القولونية . استخدم ثلاث أطباق لكل سلالة من البكتيريا.
حضن الألواح لمدة ساعتين إلى ثلاث ساعات عند 25 درجة مئوية. بعد ذلك، قم بإزالة الألواح من الحاضنة. اغسلها ب M9W واجمع الديدان في أنابي
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية