الكشف القائم على تباين الخواص الفلورية لتفاعلات البروتين والبروتين

للكشف عن تفاعل البروتين والبروتين القائم على تباين الخواص الفلورية ، ابدأ بالبروتينات المستهدفة المؤتلفة الموسومة بزخارف رباعي الأسيستين الطرفية C في مخزن مؤقت مناسب لتباين الخواص.

أضف صبغة تحتوي على الفلوروفور - ترتبط بالبروتينات المستهدفة عبر شكل التتراسيستين. غسيل الكلى باستخدام المخزن المؤقت تباين الخواص ، وإزالة الصبغة غير المقيدة. انقل الخليط إلى كوفيت الكوارتز. قم بقياس الامتصاص ، وتحديد النسبة المئوية للبروتينات المستهدفة التي تم تصنيفها بنجاح.

في كوفيت مضان ، امزج البروتينات المستهدفة المسماة بالفلوروفور مع البروتينات غير المسماة. باستخدام مقياس الطيف فلوري ، قم بقياس تباين الفلورة.

نظرا لأن البروتينات المستهدفة تتوقف بحرية في المخزن المؤقت ، فإن الفلوروفورات المرتبطة بها تدور بشكل عشوائي حول محاورها بسبب الحركة البراونية. عند الإثارة بضوء مستقطب رأسيا بطول موجي مناسب ، تنبعث الفلوروفورات من الضوء المستقطب في المستويين الرأسي والأفقي. يتم قياس نسبة شدة التألق للانبعاثات المستقطبة الرأسية والأفقية - تباين الخواص -.

عندما ترتبط البروتينات غير المصنفة بالأهداف المسماة بالفلوروفور ، يزداد الحجم الجزيئي لمركب البروتين ، مما يقلل من حركته الدورانية. نتيجة لذلك ، يصبح الضوء المنبعث أكثر استقطابا ، مع انبعاث أعلى في المستوى الرأسي من المستوى الأفقي - مما يزيد من تباين الخواص.

أضف