تقييم استيعاب البروتينات السطحية المستهدفة باستخدام مشتق البيوتين

عالج الخلايا النجمية القشرية للفأر بمشتق البيوتين القابل للانقسام.

احتضان عند درجة حرارة منخفضة لمنع استيعاب البروتين وتسهيل ارتباط البيوتين بالبروتينات السطحية المستهدفة.

اغسل وأضاف وسط دافئ ، ثم احتضنه للحث على استيعاب البروتينات الحيوية.

اغسل وعالج بعامل اختزال غير منفذ للغشاء لشق البيوتين غير الداخلي.

أضف كاشف التبريد لإيقاف التفاعل وغسله.

حصاد الخلايا وأجهزة الطرد المركزي. قم بإزالة المادة الطافية.

أضف مخزلا مؤقتا للتحلل للخلايا ، وإطلاق البروتينات الحيوية غير الحيوية والداخلية

جهاز طرد مركزي لتكسير حطام الخلية.

اجمع المادة الطافية المحتوية على البروتينات ، وأضف حبات الستربتافيدين - الاغاروز ، واخلطها لالتقاط البروتينات الحيوية.

جهاز طرد مركزي لحبيبات الخرز والتخلص من المادة الطافية.

أضف عازلة تحميل وحرارة لتغيير طبيعة البروتينات وإطلاقها من الخرز.

قم بتشغيل البروتين على مادة هلامية وانقله إلى غشاء نشاف.

الكشف عن استخدام الأجسام المضادة الأولية والثانوية لتصور نطاق بروتيني مميز ، مما يؤكد استيعاب البروتين الناجح.

أولا ، قم بإزالة مزارع الخلايا النجمية من الحاضنة وشفط الوسط. ثم اغسل الخلايا ثلاث مرات باستخدام 4 ملليلتر من CM-PBS المبرد وضع الأطباق على الثلج المجروش. قم بشفط CM-PBS ثم قم بإدخال 3 ملليلتر من البيوتين المؤقت في كل طبق. قم بإمالة الأطباق ذهابا وإيابا عدة مرات للتأك