موسوعة JoVE للتجارب
علم الأعصاب
0 مشاهدة • 4:28 دقيقة • April 28th, 2025
ضع شريحة دماغ الفأر في غرفة نضح تحتوي على aCSF تحت مجهر ثنائي الفوتون.
تم تصميم الفأر وراثيا للتعبير عن GFP في الخلايا الدبقية الصغيرة ، مما يتيح تتبع حركة الخلايا الدبقية الصغيرة.
قم بتأمين الشريحة بحامل.
باستخدام إضاءة المجال الساطع ، حدد موقع منطقة الاهتمام.
قم بالتبديل إلى إضاءة التألق لتصور الخلايا الدبقية الصغيرة.
املأ ماصة دقيقة بمركب الاختبار ، وقم بتثبيتها على حامل الحقنة ، وخفضها للمس الشريحة.
قم بتنشيط وضع التصوير ثنائي الفوتون ، مع تركيز ضوء الأشعة تحت الحمراء القريبة منخفض الطاقة في الأنسجة.
في النقطة المحورية لليزر ، يجمع فوتونان طاقتهما لإثارة GFP ، مما ينبعث منه تألق.
التقط صورا على مستويات Z متعددة للتركيز على عمليات الخلايا الدبقية الدقيقة.
سجل نشاط خط الأساس، ثم قم بحقن المركب وتابع التسجيل.
يرتبط المركب بمستقبلات الخلايا الدبقية الصغيرة ، مما يؤدي إلى مسارات الإشارات التي تدفع امتداد عملية الخلايا الدبقية الصغيرة نحو المصدر المركب.
راقب زيادة التألق بالقرب من موقع الحقن بمرور الوقت لتتبع الحركة.
30 دقيقة قبل بدء التسجيل ، قم بتوصيل المضخة التمعجية بغرفة تسجيل مخصصة مع نضح علوي وسفلي لتحسين الأكسجين وقابلية شرائح الأنسجة وتنظيف نظام التروية بالكامل ب 50 مل من الماء فائق النقاء. في نهاية دورة التنظيف، ابدأ نضح غرفة التسجيل ب 50 مل من aCSF في دورق زجاجي تحت كربوجين مستمر واس
اعرض النص الكامل واحصل على الوصول إلى آلاف الفيديوهات العلمية