FSL يبني : طريقة بسيطة لتعديل خلية / الفيريون السطوح مع مجموعة من العلامات البيولوجية دون أن يؤثر ذلك صلاحيتها

الهدف العام من هذا الإجراء هو تسمية أسطح الخلايا الحية أو S بشكل غير ضار وسريع بتركيبات نشطة بيولوجيا. يتم تحقيق ذلك عن طريق إعداد فاصل دالة أو محلول بناء دهني أو FSL أولا. بعد ذلك ، يتم خلط جزء متساو من محلول البناء مع جزء متساو من محلول الخلايا أو VIRs.

كخطوة ثالثة ، يتم تحضين الخليط لمدة 60 دقيقة عند 37 درجة مئوية. الخطوة الأخيرة هي غسل الخلايا أو الخلايا المعدلة أو VIRs أو VIRs المعدلة واستخدامها تجريبيا كالمعتاد. في النهاية ، يمكن تصور الخلايا الحية المعدلة على السطح أو S من خلال جميع تقنيات التحليل التجريبي الروتيني بما في ذلك قياس التدفق الخلوي والفحص المجهري والتراص.

الميزة الرئيسية لهذه التقنية على الطرق الحالية مثل وضع العلامات التساهمية ، هي أنها سريعة وقوية ومرنة ولا تؤثر على حيوية الخلية المعدلة أو فاريان. لتحضير محلول مخزون بناء FSL أولا ، أضف ملليلترا واحدا من المخفف إلى ملف المنتج لإعادة تكوين منتج FSL الجاف ، مما يؤدي إلى إنشاء محلول مخزون واحد ملليغرام لكل مليلتر. قم بتقطيع القارورة لمدة 30 ثانية ، وقم بتقسيم المرق في حاويات معقمة سعة 100 ميكرولتر ، وقم بتخزين الحاويات عند درجتين إلى ثماني درجات مئوية لمدة تصل إلى أسبوع واحد.

لإعداد حلول بناء FSL العاملة للإدراج قبل استخدام المحلول بالصوتنة مرة أخرى لمدة 30 ثانية لتجانس أي خلايا خاطئة ، ثم قم بتخفيف بنية FSL والمخزن المؤقت للتركيز المطلوب. قم بتخزين محلول العمل عند درجتين إلى ثماني درجات مئوية لمدة تصل إلى أسبوع بعد تعليق Resus في وسائط خالية من الدهون أو جهاز طرد مركزي PBS للخلايا لتعديل FSL خالية من الدهون غير المرتبطة. ثم قم بتعبئة الخلايا في 100 ميكرولتر من المخفف ، واغسل الخلايا للعناصر الضابطة في ظل نفس الظروف إلى 100 ميكرولتر من الخلايا غير المعدلة.

أضف 100 ميكرولتر من التخفيف المناسب لمحلول FSL إذا رغبت في ذلك. في موازاة ذلك ، قم أيضا بإنشاء عناصر تحكم سلبية باستخدام حلول FSL غير ذات صلة و / أو PBS. ثم احتضان جميع المجموعات الفرعية للخلية لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية بعد الحضانة.

اغسل جميع الخلايا مرتين باستخدام وسائط خالية من الدهون أو PBS لإزالة أي تركيبات FSL مجانية وإعداد تعليق مناسب في وسائط خالية من الدهون. بمجرد اكتمال عملية تعديل FSL ، يمكن تخزين الكويز عند أربع إلى ثماني درجات مئوية مثل الزهرة. تتكون تركيبات FSL من ثلاثة مكونات رئيسية ، الرأس الوظيفي أو F ، والتي يمكن أن تكون مجموعة متنوعة من المجموعات الوظيفية بيولوجيا.

تم تصميم الفاصل RS للحث على تباعد الرأس الوظيفي بعيدا عن الغشاء لتحسين تشتت الماء ويكون غير متفاعل مع المصل البشري والدهون DAL أو L ، مما يسمح للبناء بالاندماج تلقائيا في الأسطح الأربعة. تظهر مجموعات FSL التمثيلية في الصور الخمس التالية. تم تصنيف أجنة الفئران الحية مباشرة بفلوريسين FSL بواسطة ساعتين عند طريقة 37 درجة مئوية في وسائط زراعة الخلايا الخالية من المصل التي يتم غسلها ثم عرضها تحت الفحص المجهري الفلوري.

في هذه الصورة الأولى ، يمكن رؤية جنين عاكس خليتين خال من zop palita. يمثل التلوين الشديد في منتصف الجنين تلطيخ الجسم القطبي الكلاسيكي. في الصورتين التاليتين ، تظهر هنا أجنة عاكسة من أربع خلايا وثماني خلايا خالية تظهر تلطيخا غامضا للخلايا الموجودة خارج المجهر P للتركيز.

تظهر صورة لجنين عاكس خال من zop palita مكون من 16 خلية في هذه الصورة الأخيرة لفلوريسين FSL المسمى أجنة النسخ المتطابق الحي التي يبلغ عمرها أربعة إلى خمسة أيام ، وأجنة متطابقة سليمة مع كل من الجنين و zop LUCITA المسمى في هذه السلسلة التالية من الصور. يتم عرض ملصقات الفلورسين FSL لأسماك الزرد. هذه الصورة الأولى هي تصوير الأوعية الدموية المجهري ليرقات الزرد بعد 52 ساعة من الإخصاب والتي تم حقن فلوريسين FSL مباشرة في الدورة الدموية.

يمكن ملاحظة تلطيخ الأوعية الدموية لسمك الزرد هنا. تم إنشاء فلوريسين FSL ، خلايا أنسجة الكلى غير المتجانسة لسمك الزرد أو خلايا ZK exvivo ثم حقنها الجزئي في الدورة الدموية لمتلقي الإخصاب بعد 52 ساعة من الإخصاب ، تم إجراء ملاحظات لخلايا ZK بعد ساعتين من الحقن عن طريق تصوير الأوعية الدموية تحت التألق مع الفحص المجهري بفاصل زمني موضح هو إطار فيديو واحد مع خلايا كبيرة بطيئة الحركة أو غير متحركة مشار إليها بأسهم برتقالية وخلايا سريعة الحركة ، والتي بدت غير واضحة بسبب حركتها المشار إليها بالأسهم الخضراء. في هذه الصورة ، يظهر وضع العلامات على فلورسين FSL عن طريق الامتصاص الفموي للبنية التي تم تحقيقها عن طريق غمر أجنة أسماك الزرد والوسائط المحتوية على فلورسين FSL لمدة تصل إلى خمسة أيام.

يتوافق المجهر الساطع لسمكة الزرد المعالجة بالفلورسين FSL على اليسار مع صورة الفلورسنت المجاورة على اليمين. كان التألق موجودا بشكل تفضيلي في الأمعاء. لم يلاحظ أي تلطيخ في الأجنة الضابطة غير المعالجة الموضحة هنا.

هنا فيروس التهاب الفم الحويصلي أو VSV المسمى مباشرة ب 10 ميكروغرام لكل ملليلتر من فلوريسين FSL لمدة ساعتين عند 37 درجة مئوية ، متبوعا بالتثبيت باستخدام 4٪ ألدهيد بارافورم ، ثم يظهر التحليل عن طريق فحص الحقائق عدم تنقية VSV vir. كانت هناك حاجة إلى وضع العلامات على FSL. يظهر هذا الرسم البياني خلايا خصية الخنازير المصابة ب A بورتوريكو البشري 8 19 34 أو H واحد N واحد VIRs المسمى بفلورسين FSL.

يتم تمثيل الخلايا غير المصابة غير الفلورية بالخط الأسود بينما يشار إلى اندماج H واحد N واحد مع خلايا الخنازير ، مما أدى إلى التألق بالخط الأحمر. في هذه السلسلة التالية من الصور ، تم تصنيف الخلايا أولا بالبيوتين FSL لمدة ساعة واحدة عند 37 درجة مئوية ، ثم تم غسلها وتفاعلها مع Fluor four المسمى أفادون ثم غسلها وتركيبها على الترطيب للفحص المجهري الفلوري. تظهر الصورة الأولى صورة متحدة البؤر مجمعة لانفجارات جنين الفئران تساعد ، ويظهر هذا الشكل شريحة مركزية متحدة البؤر من الجنين من الصورة السابقة.

هنا البشر المتحركة الحية بيرم زوا. يحدث التعتيم نتيجة لحركتهم. يمكن رؤية صورة تمثيلية أكثر وضوحا للحيوانات المنوية للإنسان مثبتة في 4٪ ألدهيد Paraform بعد الإدخال في هذا الشكل هنا.

يظهر تثبيت كريات الدم الحمراء البشرية المسمى بالبيوتين FSL مع 4٪ من ألدهيد الطفيل لا يؤثر على وضع العلامات على FSL كما هو موضح في الشكلين التاليين هنا ، يمكن ملاحظة 4٪ RL 95 خلايا سرطان بطانة الرحم البشرية. بينما في هذه الصورة ، لم يتم إصلاح خلايا سرطان بطانة الرحم البشرية RL 95. لم يتم ملاحظة أي اختلافات تقريبا في الملصقات بين الصورتين مع أو بدون تثبيت.

الخلايا ذات الوريد FSL المسمى RBC في عينة دم مأخوذة بعد ساعتين من التسريب الوريدي للخلايا ، وتم عرض الخلايا تحت الفحص المجهري الضوئي على اليمين ، وتم عرض نفس مجال الخلايا تحت التألق ، ويمكن التعرف على السيتين الموجودتين باللون الأخضر. يمكن استخدام حساب نسبة الخلايا إلى الخلايا غير المسماة كمؤشر على البقاء على قيد الحياة. تظهر هذه الصورة الخلية الأخيرة المسماة بالبيوتين FSL خلايا بيوتين بطانة الرحم البشرية الحية التي تم تصورها عن طريق الارتباط بالخرز المخفف.

تظهر هذه السلسلة الأخيرة من الصور تفاعلات بناء FSL مع علامات فصيلة الدم. الصورة الأولى لخلايا GLI ذات الخلايا الحمراء البشرية المغلفة بتركيز 500 ميكروغرام لكل مليلتر من FSLG تم اختباره ضد تخفيفات المصل البشري. لا تتفاعل الخلايا الحمراء البشرية بشكل طبيعي مع مستضد Xena GALI.

على هذا النحو ، يمكن استخدام الخلايا لتحديد مستويات الأجسام المضادة في المصل. في هذا المثال ، تم تحديد أن المريض لديه عيار أنتيجا من واحد إلى 32 عن طريق إنشاء خلايا ذات مستويات متناقصة من FSL. على غرار إنشاء عيار مستضد ، يمكن تحديد مستوى المستضد الأمثل للكشف عن الجسم المضاد ، ويمكن إنشاء الخلايا لإعطاء نتيجة إيجابية فقط عندما يتجاوز مستوى الجسم المضاد عيار معين.

مستوى مستضد FSL المطلوب لإعطاء نتيجة إيجابية على جودة ومستوى الجسم المضاد الذي يتم اكتشافه. عادة بالنسبة لمستضدات الكربوهيدرات ، سيؤدي محلول FSL البالغ 100 ميكروغرام لكل مليلتر إلى رد فعل إيجابي قوي. المجموعة البشرية O الخلايا الحمراء المعدلة للحصول على مستوى معين من المستضد أو ما يسمى بالمعيار.

تستخدم الخلايا لقياس كمية antia بدقة وتكرار في مصل البشرية. في هذا المثال ، تم تحضير الخلايا من الخلايا الحمراء للمتبرع ووجد أن مستوى antia في مصل المجموعة O الذي تم اختباره يتراوح من واحد إلى 32. كما هو موضح هنا في الأنبوب السادس ، تم استخدام مستضدات فصيلة الدم A و B التي تم إدخالها في وقت واحد في مجموعة واحدة من عينات الخلايا الحمراء O لإنشاء أسبوع ، ب أسبوع ، صيرات الأسبوع.

يمكن استخدام هذه السيوت لأغراض مراقبة جودة VO. يعطي تحليل المعالج على وجه التحديد لمدة أسبوع ، واختبار سيت الأسبوع B ضد الكواشف antia و B المضادة للتفاعلات الضعيفة المتوقعة كما يتضح من هذا الشكل مع التفاعلات التي تحدث في المنطقة السفلية الوسطى من الأنابيب. يمكن القيام بهذه التقنية البسيطة في غضون ساعتين إذا تم إجراؤها بشكل صحيح.