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एक इन विट्रो में ट्यूमर निद्रा और Metastatic ग्रोथ पर स्विच अध्ययन प्रणाली

Published: August 11, 2011 doi: 10.3791/2914
Automatic Translation
1, 2
1Department of Biology, University of Haifa, 2Transgenic Oncogenesis and Genomics Section, Laboratory of Cancer Biology and Genetics, National Cancer Institute

Summary

एक संशोधित इन विट्रो प्रणाली में 3 डी में प्रस्तुत किया है जिसमें कई पुनर्गठन तहखाने झिल्ली में ट्यूमर सेल लाइनों के विकास विशेषताओं ट्यूमर कोशिकाओं के एक metastatic माध्यमिक साइट पर निष्क्रिय या proliferative व्यवहार के साथ सहसंबंधी

Protocol

1. सेल निष्क्रिय और metastatic ट्यूमर सेल लाइनों के रखरखाव संस्कृति

  1. 10 सेमी संस्कृति Dulbecco संशोधित ईगल (DMEM) मध्यम उच्च ग्लूकोज और 10% भ्रूण गोजातीय सीरम युक्त प्लेटों में निष्क्रिय (/ MCF7/K7M2-AS.46 D2OR) और metastatic ट्यूमर कोशिकाओं (/ D2A1 एमडीए MB-231 / K7M2) ग्रो ( FBS) और एंटीबायोटिक दवाओं. एक बार कोशिकाओं को 70-80% संगम तक पहुँचते हैं, तो निम्नलिखित assays के लिए आगे बढ़ें.

2. एक 3D-BME प्रणाली में सभ्य सेल (मौन) निष्क्रिय और metastatic (proliferating) ट्यूमर कोशिकाओं के प्रसार परख

3 डी प्रणाली में संवर्धन निष्क्रिय / metastatic कोशिकाओं

  1. पिघलना Cultrex वृद्धि कारक - कम 4 में तहखाने झिल्ली निकालें (BME) ° परख से बाहर ले जाने से पहले सी एक रात रेफ्रिजरेटर. नोट BME हर समय बर्फ पर नियंत्रित किया जाना चाहिए.
  2. अगले दिन, एक 96 लामिना हुड के अंदर बर्फ की एक ट्रे पर अच्छी तरह से थाली जगह है. हर अच्छी तरह से कोट के साथ बर्फ के ठंडे BME के ​​एक सिरिंज के साथ एक निकालने की मशीन का उपयोग 50-100μl. सुनिश्चित करें कि कोई बुलबुले कुओं में गठन कर रहे हैं. 30 मिनट के लिए 96 अच्छी तरह से एक humidified इनक्यूबेटर में BME के साथ 37 पर 5% सीओ 2 के साथ लेपित प्लेट ° सी रखें.
  3. बीच में निष्क्रिय और या metastatic ट्यूमर कोशिकाओं (1 अनुभाग में तैयार) से मीडिया aspirate. कुल्ला संस्कृति प्लेटों के साथ 10 मिलीलीटर फॉस्फेट खारा, 7.4 पीएच (पीबीएस) buffered. पीबीएस और ऐड 2ml trypsin 37 पर पूर्व - गरम डिग्री सेल्सियस, Aspirate संस्कृति प्लेटों. Humidified 5% सीओ 2 में 37 प्लेटें सेते डिग्री सेल्सियस, 5 मिनट के लिए.
  4. एक 15 मिलीलीटर शंक्वाकार DMEM उच्च 10% FCS और एंटीबायोटिक दवाओं के साथ पूरक ग्लूकोज की 5ml युक्त ट्यूब कोशिकाओं स्थानांतरण और कोशिकाओं गिनती.
  5. नीचे कुल सेल 1500g के एक गति से एक टिशू कल्चर अपकेंद्रित्र में सुसंस्कृत, 5 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर, संख्या स्पिन. हमारे assays में हम 2x10 3 कोशिकाओं / अच्छी तरह से प्रत्येक कोशिका लाइन या समय बिंदु के लिए जांच की जा तैयार है. हालांकि, यह प्रयोग किया जाता सेल लाइनों पर निर्भर करते हुए भिन्न हो सकते हैं.
  6. ध्यान से सतह पर तैरनेवाला aspirate. ध्यान दें, ज्यादातर मामलों में गोली दिखाई नहीं देता है. इसलिए, कुछ मीडिया के पीछे छोड़ दें. अपनी उँगलियों के साथ 15ml शंक्वाकार ट्यूब के नीचे ठोकर करने के लिए सुनिश्चित करें कि एकल कक्षों के निलंबन प्राप्त है. गोली DMEM के साथ पूरक एंटीबायोटिक दवाओं के साथ कम ग्लूकोज के साथ पुनः निलंबित 2% FCS + 2% BME (परख मीडिया). परख मीडिया के 100 μl हर 2x10 3 कोशिकाओं के लिए जोड़ा जाना चाहिए . कोशिकाओं 5ml विंदुक करने के लिए सुनिश्चित करें कि एक एकल कक्ष निलंबन बनाए रखा है के साथ कई बार Triturate.
  7. प्लेट सेल मिश्रण का एक 100μl प्रति अच्छी तरह से 96 अच्छी तरह से BME लेपित थाली के शीर्ष पर. पृष्ठभूमि (2.8 अनुभाग में) मूल्यांकन प्लेट प्रति के अलावा 100μl में अच्छी तरह से केवल 96 अच्छी तरह से BME लेपित थाली के शीर्ष पर परख मीडिया के लिए. सुसंस्कृत 96 अच्छी तरह प्लेटें सेते humidified 5% सीओ 2 इनक्यूबेटर में 37 डिग्री सेल्सियस कोशिकाओं को होना चाहिए हर 4 दिन फिर से परख मीडिया के साथ खिलाया.

परमाणु अप्रसार परख:

  1. कोशिकाओं के प्रसार परख: वांछित समय में कुओं को जोड़ने सेल टिटर 96 जलीय एक समाधान सेल प्रसार परख किट के 20 μl अंक. 37 ° C पर एक humidified 5% सीओ 2 इनक्यूबेटर में 2 के लिए सेते हैं. 490nm पर एलिसा प्लेट रीडर रिकॉर्ड absorbance का उपयोग. पृष्ठभूमि मूल्यांकन और घटाव के लिए, कुओं BME के ​​साथ पूर्व लेपित सेल टिटर 96 जलीय एक समाधान सेल प्रसार परख किट के 20μl जोड़ सकते हैं और केवल परख मीडिया से मढ़ा. 490 एनएम पर एक प्लेट एलिसा रीडर रिकॉर्ड absorbance का उपयोग करना.

3. सेल संकेतन अणुओं के लिए निष्क्रिय (मौन) ट्यूमर और / या metastatic (proliferating) कोशिकाओं ट्यूमर कोशिकाओं में Immunofluorescent धुंधला

संवर्धन immunfluorescence धुंधला के लिए निष्क्रिय / metastatic 3D प्रणाली में कोशिकाओं

* निम्न प्रोटोकॉल एक 3D संस्कृति देबनाथ जम्मू एट अल 18 द्वारा प्रकाशित प्रोटोकॉल के एक संशोधन है.

  1. 2.1 खंड में वर्णित BME तैयार. अगले दिन: लामिना हुड के अंदर बर्फ की एक ट्रे पर एक गिलास 8 कक्ष स्लाइड प्रणाली की जगह. बर्फ ठंड BME की 50ul 200μl pipetman का उपयोग कर के साथ एक अच्छी तरह कोट. सुनिश्चित करें BME समान रूप से फैला हुआ है और कोई बुलबुले कुओं में गठन कर रहे हैं. 8 चैम्बर कांच humidified 5% सीओ 2 में BME के साथ 37 पर लेपित स्लाइड ° C 20 मिनट के लिए रखें.
  2. 1 अनुभाग और संस्कृति के लिए तैयार के रूप में 2.3 2.4 खंड में वर्णित से हार्वेस्ट और निष्क्रिय या metastatic कोशिकाओं. एक 15 मिलीलीटर शंक्वाकार ट्यूब में सभ्य कोशिकाओं की कुल संख्या लीजिए. हम 5 x10 3 कोशिकाओं प्रत्येक कोशिका लाइन और समय बात करने के लिए जांच की जा के लिए / अच्छी तरह से तैयार है. नीचे 5 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर 1500g के एक गति से एक टिशू कल्चर अपकेंद्रित्र में कोशिकाओं, स्पिन. सावधानी supernate Aspirate. ध्यान दें कि गोली दृश्यमान नहीं है, इसलिए कुछ मीडिया पीछे छोड़. अपनी उँगलियों के साथ 15ml शंक्वाकार ट्यूब के नीचे ठोकर करने के लिए सुनिश्चित करें कि एक एकल कक्ष निलंबन प्राप्त है.परख मीडिया के साथ गोली पुनः निलंबित. परख मीडिया के 400μl हर 5x10 3 कोशिकाओं के लिए जोड़ा जाना चाहिए . कोशिकाओं 5ml विंदुक के साथ कई बार Triturate. यह कदम बहुत महत्वपूर्ण है करने के लिए सुनिश्चित करें कि एकल कक्ष निलंबन बनाए रखा है.
  3. 8 BME साथ लेपित कक्षों में से प्रत्येक के शीर्ष पर सेल प्रति अच्छी तरह से मिश्रण की प्लेट 400μl. एक humidified 5% सीओ 2 इनक्यूबेटर में 37 सुसंस्कृत कक्षों 8 गिलास स्लाइड प्रणाली सेते डिग्री सेल्सियस कोशिकाओं को होना चाहिए हर 4 दिन फिर से परख मीडिया के साथ खिलाया.

Immunofluorescence धुंधला हो जाना:

  1. वांछित समय अंक में, मीडिया की ऊपरी परत aspirate और लगानेवाला के 200μl 4% (पीएफए) Paraformaldehyde, 5% sucrose और 0.1% X-100 ट्राइटन युक्त जोड़ने और 5 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर सेते हैं. लगानेवाला Aspirate और 25 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर 5% sucrose और सेते युक्त 4% पीएफए ​​के 200μl जोड़ने.
  2. लगानेवाला Aspirate; जोड़ने फॉस्फेट की 400 μl खारा buffered प्रत्येक अच्छी तरह से (पीबीएस). कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए सेते हैं. पीबीएस Aspirate और 400 μ पीबीएस 0.05% बीच 20 से युक्त कमरे के तापमान पर 10 मिनट के लिए जोड़ने.
  3. 200μl या तो 10% गधा सीरम के साथ या 1hour (अवरुद्ध समाधान के लिए इस्तेमाल किया जा प्रत्येक प्राथमिक एंटीबॉडी के लिए निर्धारित empirically चाहिए) के लिए 3% BSA के साथ कमरे के तापमान पर तय की कोशिकाओं को ब्लॉक.
  4. अवरुद्ध समाधान Aspirate और प्राथमिक एंटीबॉडी के 200μl (प्रत्येक प्राथमिक एंटीबॉडी के लिए इस्तेमाल किया जा के लिए कमजोर पड़ने empirically निर्धारित करना चाहिए) को जोड़ने. 10% गधा सीरम में प्राथमिक एंटीबॉडी पतला अगर 10% गधा सीरम अवरुद्ध करने के लिए इस्तेमाल किया गया था या 3% BSA में प्राथमिक एंटीबॉडी पतला अगर 3% BSA अवरुद्ध समाधान इस्तेमाल किया गया था. प्राथमिक एंटीबॉडी के साथ 4 पर रातोंरात सेते डिग्री सेल्सियस
  5. एंटीबॉडी Aspirate 400μl पीबीएस के साथ 15 मिनट के लिए कुओं और धो दो बार दोहराने. पीबीएस Aspirate और गधा के 200μl rhodamine लाल (कमजोर पड़ने empirically निर्धारित किया जाना चाहिए) के लिए विरोधी संबंधित - आईजीजी संयुग्मित जोड़ने के लिए, 8 और कमरे के तापमान पर 1 घंटे के लिए एल्यूमीनियम पन्नी सेते साथ चैम्बर स्लाइड कवर.
  6. कुओं 400μl पीबीएस (3x15 मिनट प्रत्येक धोने) के साथ धोएं. Aspirate पीबीएस. VECTASHIELD DAPI के साथ मध्यम बढ़ते के साथ घुड़सवार. अंधेरे में कमरे के तापमान पर 40 मिनट के लिए सूखी स्लाइड्स. स्लाइड्स डिग्री सेल्सियस 4 में 1 सप्ताह के लिए रखा जा सकता है अंधेरे में स्लाइड्स स्टोर. छवि confocal माइक्रोस्कोपी से स्लाइड.

4. प्रतिनिधि परिणाम:

निष्क्रिय और 3 डी संस्कृति में D2.0R metastatic D2A1 ट्यूमर कोशिकाओं के प्रसार के विश्लेषण का एक उदाहरण चित्र 1A में दिखाया गया है. D2.0R कोशिकाओं पूरे प्रयोगात्मक 14 दिन संस्कृति अवधि के माध्यम से निष्क्रिय (मौन) कर रहे हैं जबकि अत्यधिक metastatic D2A1 कोशिकाओं केवल चार से छह दिनों जिसके बाद वे पैदा करना शुरू के लिए निष्क्रिय रहते हैं. प्रारंभिक निष्क्रिय चरण के दौरान, कई कोशिकाओं को 3 - डी संस्कृति में एकान्त रहते हैं (चित्रा 1 बी, 4 दिन) जबकि अन्य गैर proliferating कोशिकाओं बहु सेलुलर spheroids फार्म. 3 - डी संस्कृति में D2A1 एक निष्क्रिय कोशिकाओं से proliferative राज्य के संक्रमण (चित्रा 1 बी, 12 दिन) सेल आकारिकी में नाटकीय परिवर्तन के साथ जुड़ा हुआ है. इसलिए, इस परख क्या कारक का परीक्षण करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है / एस निष्क्रिय D2.0R कोशिकाओं को ट्रिगर करने के लिए अपने निष्क्रिय राज्य से उभर सकता है और कारक क्या s / D2A1 कोशिकाओं अपने निष्क्रिय राज्य से संक्रमण को रोकने सकता है चित्रा 2 एक एजेंट का एक उदाहरण है. निष्क्रिय से एक proliferative राज्य के लिए संक्रमण के लिए D2A1 कोशिकाओं को रोकने. चित्रा 2 में सचित्र, मायोसिन प्रकाश श्रृंखला kinase (एमएल 7) के एक विशिष्ट अवरोध करनेवाला के साथ D2A1 कोशिकाओं के उपचार के एक निष्क्रिय राज्य में D2A1 कोशिकाओं को बनाए रखा .

निष्क्रिय और proliferating ट्यूमर 3 डी प्रणाली में संवर्धित कोशिकाओं में संकेतन सेल सेल संकेतन अणुओं के लिए immunofluorescence धुंधला द्वारा अध्ययन किया जा सकता है. चित्रा 3 में सचित्र D2A1 कोशिकाओं (लाल धुंधला) में एक मायोसिन प्रकाश श्रृंखला की phosphorylation में एक उल्लेखनीय वृद्धि च actin filaments के गठन actin तनाव फाइबर (हरे रंग धुंधला हो जाना) के पुनर्गठन के बाद निद्रा से अपने संक्रमण के लिए (1-4 दिन) के दौरान होता है प्रसार (7 दिन). हालांकि, मायोसिन प्रकाश श्रृंखला kinase गतिविधि shRNA या विशिष्ट दवा (एमएल 7) द्वारा D2A1 कोशिकाओं में अवरुद्ध एक निष्क्रिय राज्य में D2A1 कोशिकाओं और मायोसिन प्रकाश श्रृंखला phosphorylation और च actin तनाव फाइबर संगठन (चित्रा 4) के निषेध में परिणाम बरकरार रखती है.

चित्रा 1
1 इन विट्रो एकान्त ट्यूमर सेल निद्रा और metastatic विकास के लिए स्विच अध्ययन मॉडल में चित्रा. 3 - डी Cultrex BME) निष्क्रिय D2.0R और metastatic D2A1 के प्रसार, n = 8 (मतलब ± एसई). तीन प्रयोगों (* 0.05 पी ≤) के प्रतिनिधि का परिणाम है. बी) D2.0R और D2A1 कोशिकाओं की लाइट माइक्रोस्कोपी छवियों 3 - डी Cultrex BME बढ़ाई x20 में सुसंस्कृत.चित्रा Barkan एट अल 17 से संशोधित.

चित्रा 2
चित्रा 2. मायोसिन प्रकाश श्रृंखला kinase (MLCK) के निषेध द्वारा 3 डी संस्कृति प्रणाली में निद्रा (निष्क्रियता) से D2A1 कोशिकाओं के प्रसार करने के लिए स्विच की रोकथाम . D2A1 सेल में 3 - डी Cultrex BME, पता सुसंस्कृत प्रसार के समय पाठ्यक्रम = 8 (± एसई मतलब). कक्ष अनुपचारित थे (नियंत्रण), या MLCK की एक विशिष्ट (ML-7, सुक्ष्ममापी 5) अवरोध करनेवाला के साथ इलाज किया 48 घंटा संस्कृति 5 दिन की शुरुआत के लिए. चित्रा Barkan एट अल 17 से संशोधित.

चित्रा 3
चित्रा 3. मायोसिन प्रकाश श्रृंखला की phosphorylation निद्रा से D2A1 कोशिकाओं के proliferative विकास पर स्विच करने के दौरान च actin के पुनर्गठन के द्वारा पीछा किया . D2A1 कोशिकाओं के 3-D Cultrex BME में 8 कक्ष गिलास स्लाइड पर सुसंस्कृत थे. कक्ष और तय DAPI परमाणु स्थानीयकरण के लिए (नीला), एफ actin के लिए phalloidin (हरा) के साथ और मायोसिन प्रकाश श्रृंखला (विधान परिषद के सदस्य पी) (लाल), के रूप में समय के विभिन्न बिंदुओं पर संकेत के phosphorylated फार्म के खिलाफ एक एंटीबॉडी के साथ दाग थे. च actin, और विधान परिषद के सदस्य पी धुंधला (पीला) के मर्ज. विधान परिषद के सदस्य पी की अभिव्यक्ति actin तनाव फाइबर गठन (तीर) द्वारा पीछा proliferative विकास (7 दिन) के लिए D2A1 निद्रा (days1-4) से कोशिकाओं के संक्रमण के दौरान वृद्धि हुई थी. Confocal माइक्रोस्कोपी, x63 बढ़ाई. सफेद पट्टी के रूप में 20 microns के बराबर होती है. चित्रा Barkan एट अल 17 से संशोधित.

चित्रा 4
चित्रा 4. मायोसिन प्रकाश श्रृंखला (MLCK) kinase मध्यस्थता D2A1 कोशिकाओं में तनाव च actin फाइबर गठन का निषेध D2A1 कक्ष अनुपचारित थे (नियंत्रण), या MLCK (ML-7, सुक्ष्ममापी 5) के लिए अवरोध करनेवाला के साथ इलाज संस्कृति दिन 48 घंटा शुरुआत के लिए, 5, या तले हुए MLCK या shRNA के साथ इलाज किया और मायोसिन प्रकाश श्रृंखला (विधान परिषद के सदस्य पी) (लाल), च actin (हरा), और नाभिक (नीला) के phosphorylated रूप के लिए दाग. च actin, और विधान परिषद के सदस्य पी धुंधला (पीला) के मर्ज. Confocal माइक्रोस्कोपी, x63 बढ़ाई. सफेद पट्टी के रूप में 20 microns के बराबर होती है.

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Discussion

अंतर्निहित तंत्र है कि एक निष्क्रिय या उनके metastatic विकास के लिए संक्रमण में राज्य के परिणाम में ट्यूमर कोशिकाओं फैलाया बनाए रखने में काफी हद तक अनजान रहते हैं. यह घटना अत्यंत मानव 4,12 रोगियों और कुछ preclinical मॉडल इस मुद्दे के समाधान के लिए विकसित किया गया है में अध्ययन के लिए मुश्किल हो गया है. फिर भी, vivo और पूर्व vivo ट्यूमर निद्रा के लिए मॉडल प्रणाली में कुछ विशेषता (1,12 में समीक्षा) किया गया है. हालांकि, मुख्य रूप से ट्यूमर निद्रा के लिए vivo मॉडल में ट्यूमर निद्रा को विनियमित करने के लिए संभावित तंत्र को मान्य का उपयोग किया जा सकता है, लेकिन वास्तविक समय में एक एकल फैलाया निष्क्रिय ट्यूमर सेल के जीव विज्ञान का पता लगाने के लिए उत्तरदायी नहीं हैं.

3 - डी सिस्टम पहली बार एकान्त ट्यूमर निद्रा और इन विट्रो मॉडल प्रणाली में में एक metastatic विकास के लिए स्विच के लिए मॉडल यहाँ प्रस्तुत किया. मॉडलिंग ट्यूमर (निष्क्रियता) निद्रा और 3 डी प्रणाली में प्रसार करने के लिए संक्रमण के लिए प्रसार परख समय के साथ पीछा किया जा सकता है. इस परख के लिए एक उच्च throughput ढंग से और एक अपेक्षाकृत कम समय संभावित कारकों / जीन है कि उनके मौन चरण में निष्क्रिय ट्यूमर कोशिकाओं को बनाए रखने या उन्हें सक्रिय करने के लिए पैदा हो सकता है फ्रेम में अध्ययन करने के लिए उपयोग किया जा सकता है. इसके अलावा, प्रसार परख अतिरिक्त ट्यूमर सेल लाइनों है कि एक निष्क्रिय phenotype हो सकता है के लिए स्क्रीन के लिए एक उच्च throughput मंच के रूप में उपयोग किया जा सकता है.

आणविक तंत्र है जो जैव रासायनिक विधियों द्वारा पारंपरिक 3 डी प्रणाली में metastatic विकास के लिए ट्यूमर निद्रा या अपने स्विच को नियंत्रित अध्ययन (RT-पीसीआर / पश्चिमी blots) आरएनए / प्रोटीन की कम राशि है कि जैव रासायनिक अध्ययन के लिए निष्क्रिय से निकाला जा सकता है को देखते हुए मुश्किल है ट्यूमर कोशिकाओं. हालांकि, 3D मॉडल प्रणाली में निष्क्रिय और outbreaking ट्यूमर कोशिकाओं है, के रूप में आंकड़े 3 और 4 में प्रस्तुत की सेल संकेतन अणुओं की immunofluorescence धुंधला लागू किया जा सकता है. इसलिए, यहाँ प्रस्तुत मॉडल प्रणाली एकान्त ट्यूमर सेल निद्रा और metastatic विकास के लिए संक्रमण को विनियमित करने के लिए आणविक तंत्र का पता लगाने के लिए शुरू एक कुशल उपकरण के रूप में सेवा कर सकते हैं.

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Disclosures

ब्याज की कोई संघर्ष की घोषणा की.

Acknowledgments

इस शोध के हिस्से में राष्ट्रीय कैंसर संस्थान के अंदर का रिसर्च प्रोग्राम द्वारा समर्थित किया गया था.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
DMEM high glucose Invitrogen 11965-118
DMEM low glucose Invitrogen 11885-092
Fetal bovine serum (FBS) Invitrogen 10091-148
Growth factor-reduced 3-D Cultrex Basement Membrane Extract Trevigen Inc. Protein concentration between 14-15mg/ml
D2.0R and D2A1 cell lines 5,19
K7M2 and K7M2AS1.46 cells 20
MCF-7 and MDA-MB-231 breast cancer cells ATCC
An 8 chamber glass slide system Lab-Tek 177402
Cell Titer 96 AQueous One Solution cell proliferation assay kit Promega Corp. G3580
VECTASHIELD mounting medium with DAPI Vector Laboratories H-1200
Normal donkey serum Jackson ImmunoResearch 017-000-121
Elisa Plate Reader Bio-Tec Record 490nm
Confocal microscope Carl Zeiss, Inc. Magnification x63

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References

  1. Aguirre-Ghiso, J. A. Models, mechanisms and clinical evidence for cancer dormancy. Nat Rev Cancer. 7, 834-846 (2007).
  2. Pantel, K., Woelfle, U. Micrometastasis in breast cancer and other solid tumors. J Biol Regul Homeost Agents. 18, 120-125 (2004).
  3. Naumov, G. N. Ineffectiveness of doxorubicin treatment on solitary dormant mammary carcinoma cells or late-developing metastases. Breast Cancer Res Treat. 82, 199-206 (2003).
  4. Klein, C. A. Framework models of tumor dormancy from patient-derived observations. Curr Opin Genet Dev. , (2010).
  5. Naumov, G. N. Persistence of solitary mammary carcinoma cells in a secondary site: a possible contributor to dormancy. Cancer Res. 62, 2162-2168 (2002).
  6. Townson, J. L., Chambers, A. F. Dormancy of solitary metastatic cells. Cell Cycle. 5, 1744-1750 (2006).
  7. Chambers, A. F., Groom, A. C., MacDonald, I. C. Dissemination and growth of cancer cells in metastatic sites. Nat Rev Cancer. 2, 563-572 (2002).
  8. Pantel, K. Differential expression of proliferation-associated molecules in individual micrometastatic carcinoma cells. J Natl Cancer Inst. 85, 1419-1424 (1993).
  9. Demicheli, R. Tumour dormancy: findings and hypotheses from clinical research on breast cancer. Semin Cancer Biol. 11, 297-306 (2001).
  10. Braun, S. A pooled analysis of bone marrow micrometastasis in breast cancer. N Engl J Med. 353, 793-802 (2005).
  11. Pantel, K., Alix-Panabieres, C., Riethdorf, S. Cancer micrometastases. Nat Rev Clin Oncol. 6, 339-351 (2009).
  12. Goss, P. E., Chambers, A. F. Does tumour dormancy offer a therapeutic target. Nat Rev Cancer. 10, 871-877 (2010).
  13. Mendoza, A. Modeling metastasis biology and therapy in real time in the mouse lung. J Clin Invest. 120, 2979-2988 (2010).
  14. Naumov, G. N. A model of human tumor dormancy: an angiogenic switch from the nonangiogenic phenotype. J Natl Cancer Inst. 98, 316-325 (2006).
  15. Barkan, D. Metastatic growth from dormant cells induced by a col-I-enriched fibrotic environment. Cancer Res. 70, 5706-5716 (2010).
  16. Barkan, D., Green, J. E., Chambers, A. F. Extracellular matrix: A gatekeeper in the transition from dormancy to metastatic growth. Eur J Cancer. , (2010).
  17. Barkan, D. Inhibition of metastatic outgrowth from single dormant tumor cells by targeting the cytoskeleton. Cancer Res. 68, 6241-6250 (2008).
  18. Debnath, J., Muthuswamy, S. K., Brugge, J. S. Morphogenesis and oncogenesis of MCF-10A mammary epithelial acini grown in three-dimensional basement membrane cultures. Methods. 30, 256-268 (2003).
  19. Morris, V. L. Mammary carcinoma cell lines of high and low metastatic potential differ not in extravasation but in subsequent migration and growth. Clin Exp Metastasis. 12, 357-367 (1994).
  20. Khanna, C. The membrane-cytoskeleton linker ezrin is necessary for osteosarcoma metastasis. Nat Med. 10, 182-186 (2004).

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