Summary
Ved hjælp af et webcam og en kombination af fri og billig software-programmer, kan lokomotiv mønstre i Drosophila melanogaster skal analyseres for at påvise forskelle i den hastighed, distance og tid af forskellige motoriske aktiviteter.
Abstract
Video tracking systemer er blevet brugt i vid udstrækning til at analysere Drosophila melanogaster bevægelse og opdage forskellige abnormiteter i lokomotiv adfærd. Selv om disse systemer kan give et væld af adfærdsmæssige oplysninger, kan omkostningerne og kompleksiteten af disse systemer være uoverkommelige for mange laboratorier. Vi har udviklet en billig assay til måling af lokomotiv adfærd og beslaglæggelse bevægelse i D. melanogaster. Systemet benytter en web-cam til at tage billeder, som kan behandles ved hjælp af en kombination af billig og gratis software til at spore den afstand, flyttes, den gennemsnitlige hastighed bevægelighed og varigheden af bevægelse under en bestemt tidsperiode. For at demonstrere anvendeligheden af dette system, vi undersøgte en gruppe af D. melanogaster mutanter, Bang-følsomme (BS) værkbrudne, der er 3-10 gange mere modtagelige for beslaglæggelse-lignende aktivitet (SLA) end vildtype fluer. Ved hjælp af dette nye system, var vi i stand til at opdage, at BS mutant bang meningsløse (BSS) udviser lavere niveauer af sonderende bevægelse i en roman miljø end vildtype fluer. Desuden blev det system, der anvendes til at identificere, at lægemidlet metformin, som er almindeligt anvendt til behandling af type II diabetes, reducerer intensiteten af SLA BS mutanter.
Introduction
På grund af sin korte levetid og de robuste genetiske værktøjer til rådighed, Drosophila melanogaster er en fremragende model system til at undersøge ætiologien af forskellige sygdomme og den underliggende fysiologi af forskellige biologiske processer. I mange tilfælde er det fordelagtigt at måle effekten, at adfærdsmæssige, genetiske eller farmakologiske manipulationer har på bevægelse i disse modelorganismer 1,2.
Der er en række metoder, der er almindeligt anvendt til måling af flyve bevægelse i to dimensioner 3-7. Disse systemer kan understøtte sporing af flere fluer samtidigt og kan måle hastighed, optage banelængder og registrere den procentdel af tiden en flue har brugt bevægelse. De er blevet brugt til at studere bevægelse i en række forskellige sammenhænge, herunder virkningerne af narkotika på bevægelse og seksuel dimorf natur flyve bevægelse 6-9. Den største ulempe ved disse systemer er omkostningseffektiv sporingsteknologierne system eller tilsvarende software og kamera. I nogle tilfælde kan dette køre i tusindvis af dollars. Omkostninger er en særlig bekymring for et laboratorium, der ville kun behøver begrænset brug af et sådant system, for eksempel, kvantificering lokomotiv mønstre af en nyligt isoleret mutant.
En enklere men mindre robust metode er at anvende systemer, som registrerer bevægelse baseret på, hvor mange gange en flue krydser en infrarød lysstråle sti, der er placeret i midten af et lukket rør 10,11. Mens sådanne systemer kan give værdifulde oplysninger om bevægelse og søvn-vågne cyklus, kan over eller under skøn bevægelse, de, fordi de undlader at fange den faktiske sti til fluen. For eksempel vil fluer, der udviser betydelig bevægelse ved enderne af røret registrere så lav bevægelse fluer selv om der er anvendt yderligere fremgangsmåder høj opløsning for at forsøge at omgå disse begrænsninger 12.
Enklere og billigere stadig er klatring udstyr, der måler geotaxis, den opadgående bevægelse af fluer, gennem et enkelt rør eller en serie af rør 2,13. Mens sådanne systemer er billige og nemt kan identificere geotaxis defekter, de undlader at fange mange andre aspekter af bevægelse, der ville være af interesse for efterforskerne.
For mange laboratorier, en low-cost robust analysesystem, der er enkel at sætte op og betjene ville være en fordelagtig redskab til at karakterisere adfærdsmæssige forskelle i D. melanogaster stammer. Her beskriver vi en analyse, der kan sættes op i mindre end to hundrede dollars, og er i stand til at give oplysninger om stien, hastighed og varighed af fluen bevægelse. For at demonstrere effektiviteten af assayet, præsenterer vi data, der viser, at det kan anvendes til at identificere, 1) en lokomotorisk defekt i et Bang-følsomme (BS) mutant, der er modtagelige for anfald og 2) evnen af lægemidlet metformin, som er almindeligt anvendt til behandling af type II-diabetes for at reducere intensiteten af krampelignende aktivitet (SLA) in to BS mutanter.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1.. Udarbejdelse af Individuelle Flies til Locomotion Assay
- Transfer flyver ved forsigtigt at banke ind i de enkelte tomme hætteglas og cap hætteglassene med en vatpind stik. Tillad fluer til at sidde uforstyrret 20-30 min før observation. Det er vigtigt ikke at bedøve fluer inden for timer før adfærdsobservation idet tidligere undersøgelser har fundet anæstesi eksponering kan ændre adfærd i forhold til unanesthetized fluer 14.
- Bank forsigtigt på fluen ud af hætteglasset og placere de enkelte fluer under en diameter på 5 cm petriskål dæksel (5 mm høj) med små slidser at give luft passage. Oplys nedefra og observere fluer ved hjælp af et webcam monteret over petriskål.
2. Udarbejdelse af Individuelle Flies for Beslaglæggelse Assay
- Feed to dage gamle beslaglæggelse følsomme fluer enten standard gær / majsmel / agar medier eller standard medier blandes direkte med narkotika. For de data, der præsenteres her, blev fluer fodret enten 1 gangF-standard medier eller 1 g af standard medier blandet med 25 mg metformin.
- Efter fluerne har fodret i to dage på mediet eller plus narkotika, overføre dem ved en let banken i individuelle tomme hætteglas og cap hætteglassene med en vatpind stik. Tillad fluer til at sidde uforstyrret i 20 min før observation. Det er vigtigt ikke at bedøve fluer inden for timer før adfærdsobservation idet tidligere undersøgelser har fundet anæstesi eksponering kan ændre adfærd i forhold til unanesthetized fluer 14.
- Vortex enkelte hætteglas, der indeholder en enkelt flue på en lab vortexer ved hjælp af den højeste indstilling i 10 sek. Placer immobiliserede flue på et blankt hvidt papir direkte under et webcam monteret over papiret.
3. Video Recording
- Optag bevægelse eller SLA bruge HandyAvi software program http://www.azcendant.com/download.htm . Dette program bruger webcam tiltage billeder baseret på brugerens indstillinger.
- Vælg Time-Lapse billeder indstilling under fanen Capture Når vinduet åbner, skal du vælge webcam som capture enhed. For de fleste eksperimenter video frame størrelse på 640 x 480 er tilstrækkelig.
- Vælg Intel IYUV codec til komprimering og vælg 0,1 sek / ramme til beslaglæggelse assay eller vælg 0,1-0,5 sek / ramme for bevægelsen analysen. Under fanen Avanceret skal du vælge at oprette en. Bmp billedfil for hver opsamling og vælg en mappe til programmet til at gemme de billeder, det tager (billedet stack).
- Placer en død flue på papiret. Klik på feltet Videoindstillinger og justere indstillingerne under fanen Enhedsindstillinger, så der er en lys hvid baggrund og en klar kontrast til den mørkere flue.
- Klik på startknappen for at starte optagelsen. Når optagelsen periode er færdig, skal du klikke på stopknappen. Den billedstak skulle nu være i den valgte mappe. Bemærk: Før optagelse, sikre, at følder er valgt for billedet stakken er tom.
4.. Dataanalyse Brug ImageJ
- Åbent NIH gratis billedbehandling software ImageJ, som kan downloades på http://rsbweb.nih.gov/ij/download.html . Bemærk: Ud over at downloade programmet, skal Multitracker plug-in downloades og installeres som angivet på http://rsbweb.nih.gov/ij/plugins/index.html .
- Importer billedstak i ImageJ ved at klikke på fanen Filer og derefter vælge Importer → Billede sekvens.
- Vælg den mappe, der indeholder billedet stakken, fremhæve et af billederne, og vælg åben. En sekvens Options dialog boks vil åbne. Klik på Sorter navne numerisk og vælg derefter OK og billedet stakken vil blive indlæst i ImageJ.
- Threshold alle de billeder, så hver består af en hvid baggrund med flue bliveromdannes til en sort prik. Til at begynde denne proces, konvertere billedet til et 8-bit-format ved at vælge type → 8 bit under fanen Image.
- Klik på fanen Billede igen, og vælg Juster → Threshold. Dette vil åbne Threshold dialogboks, hvor tærsklen afskåret punkt kan justeres.
- Scan gennem billederne for at se, om der er ekstra sorte prikker eller hvis en skive mangler en sort prik. Hvis dette er tilfældet, justere tærsklen for at afhjælpe problemet. Normalt tærsklen ikke behøver at blive justeret, da programmets standardindstillinger til en passende værdi.
Note: Hver dias i stakken skal have bare en sort prik, der repræsenterer placeringen af fluen. - Vælg anvendelse i Threshold dialog box og en Konverter til Mask dialogboks vil åbne. Klik ikke på nogen af de muligheder, men blot klikke på OK for at tærsklen billedstak.
- Efter thresholding billedet stakken, skal du vælge Multitracker plug-in under fanebladet Plugin for atmåle bevægelsen af flue i pixels. Objekt Tracker dialogboks vises.
- Klik på alle de fire muligheder, der er angivet i dialogboksen, og vælg derefter OK. Den Multitracker plug-in vil derefter vedhæfte koordinater til den sorte prik i hver skive og liste disse i vinduet Søgeresultater samt den samlede vejlængde i pixels. Kurver vindue giver en grafisk visning af stien fluen tog.
- Kopier x-og y-koordinat liste fra Results vinduet og indsætte dataene i et Excel-regneark. Hvis nogen dias i stakken ikke har en sort prik i det, vil det Multitracker programmet standse på det dias. Hvis dette sker, er det nødvendigt at gå tilbage til trin 4.2 og re-tærskel stakken for at sikre, at de flyve registre som en sort prik i dias pågældende.
- For at konvertere stien længder fra pixels til cm, tage et separat billede af to prikker, der er fordelt én cm fra hinanden på et blankt stykke hvidt papir.
- Følg ovenståendetrin (3.1-4.4.2), for at bestemme x, y pixel koordinater for de to prikker og bruge denne information til at bestemme antallet af pixels, der svarer til en cm. Denne omregningsfaktor anvendes i trin fem til at generere bevægelse data i cm. Bemærk: Når dette er gjort, er det vigtigt at holde kameraet fast for alle fremtidige optagelser. Hver gang kameraet flyttes eller justeres, er man nødt til at gentage dette trin for at konvertere pixel til cm.
- Stien længde, der er genereret af Multitracker plug-in overvurderer bevægelsen, fordi små udsving i kroppens stilling og lysintensitet / overvejelser vil påvirke størrelsen og midten af den sorte prik, der genereres, når tærskling billederne. Denne støj skal fjernes for at få en nøjagtig vurdering af flyve bevægelse.
5.. Dataanalyse Brug Excel
- Fjern støj fra de registrerede data ved at importere den række af x, y koordinater genereret af Multitracker prOGRAM ind Fly Analysis, en Excel Visual Basic-program udviklet af forfatterne. (Programmet findes ved at kontakte forfatterne.)
- Klik på Klik på mig knappen, og vælg en tærskelværdi cut-off. Vælg en grænseværdi på 0,5 cm / sek SLA analyse eller vælge en værdi mellem 0,1-0,3 cm / sek til bevægelse analyse. Klik på OK, og programmet vil beregne hastigheden, tid og afstand bevægelighed. Bemærk: Programmet bruger en glidende vindue analyse for at vurdere data i sekventielle 0,5-1,0 sek skraldespande og beregner hastigheden i løbet af dette vindue. Alt over den brugerdefinerede cutoff behandles som flue bevægelse.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Den her beskrevne teknik har været anvendt tidligere til at analysere forskelle i SLA i Drosophila BS mutanter 1. Resultaterne præsenteres her inddrage BS stammer let chokerede (EAS), bang meningsløs (BSS) og teknisk knockout (TKO). EAS locus koder for en ethanolamin kinase involveret i fosfatidylethanolamin syntese 15, og TKO locus koder for en mitokondrie riboprotein 16. BSS mutationen er en allel af den lamme (para) spændingsstyret natrium kanal 17.. De alleler, der anvendes i denne undersøgelse, var EAS 1, BSS 1 og TKO 25t.
En illustration af effektiviteten af metoden til måling af SLA kan ses i figur 1, som viser vejlængden af EAS beslaglæggelse-følsomme kontrol flyve i forhold til ender er blevet fodret med lægemidlet metformin. Metformin er et biguanid anvendes til behandling af type II diabetes. Det stof hæmmer mitokondrie respiratoriske kæde kompleks I, som via opregulering af AMPK, udløser en stigning i glykolysen og glukose optagelse i pattedyrceller 18. Tidligere undersøgelser har vist, at metformin opregulerer glycolytiske gener, formentlig for at kompensere for inhibering af aerobe stofskifteveje 19. Figur 2 viser, at fodring af BS mutanter EAS og TKO metformin i to dage (25 mg / g af fødevarer) reducerer SLA vejlængde .
Ud over at reducere vejlængden kan de data, der genereres ved denne metode bruges til at analysere forskelle i SLA hastighed og SLA varighed. I dette tilfælde indikerer dataene, at SLA varighed blev reduceret betydeligt (figur 3), mens SLA hastighed ikke ændredes signifikant (figur 4).
5 viser et eksempel på en sti gennemskåret af en vildtype Canton-Special Den ovenfor beskrevne analyse kan også bruges til at måle bevægelse i løbet af en bestemt periode. Figur (CS) fly og en sti gennemskåret af en BSS flyve over en periode på 15 min. Mens bevægelighed for både fluer blev koncentreret i kanterne af det cirkulære område, CS flue udstillet langt mere bevægelse i løbet af 15 min optagelse periode. Assayet er derfor nyttigt at se på både mængden af bevægelighed og bevægelsesmønster fluerne.
Den gennemsnitlige afstand gennemskæres af BSS fluer var signifikant lavere end i CS flyver som indikeret ved Figur 6. Ikke kun BSS fluer vise mindre bevægelse, de havde tendens til at bevæge sig med en langsommere hastighed. Ændringer i hastigheden af bevægelsen af to individuelle fluer er afbildet i figur 7. Ved at bruge denne data, kan en gennemsnitlig hastighed beregnes og sammenlignes som i F igur 4 for SLA. Baseret på de repræsentative fluer er vist i figur 7, er det klart, at CS fluer havde mere hyppige anfald af hurtig bevægelse, mens BSS fluer havde flere anfald af inaktivitet i den periode, der er repræsenteret i figuren.
Figur 1. Repræsentative stier af SLA i EAS mutanter og EAS mutanter fodret metformin. Individuelle fluer var mekanisk chokeret over at fremkalde SLA. Stien til en individuel flyve under SLA er repræsenteret i figuren. A) Path of et EAS mutant. B) Path af et EAS mutant fodret metformin. (Bar repræsenterer 1 cm).
files/ftp_upload/51460/51460fig2highres.jpg "src =" / files/ftp_upload/51460/51460fig2.jpg "/>
Figur 2. Individuelle fluer var mekanisk chokeret over at fremkalde SLA. Afstanden fluen flyttet under SLA blev brugt som et mål for SLA intensitet. I begge BS mutanter undersøgte, metformin væsentligt reduceret afstanden flyttet. Data blev analyseret ved anvendelse af Mann-Whitney U-test (* p <0,05; *** p <0,001, n = 15).
Figur 3. Individuelle fluer var mekanisk chokeret over at fremkalde SLA. Den tid fluen brugt undergår SLA blev brugt som et mål for SLA intensitet. I begge BS mutanter undersøgte, metformin væsentligt reduceret SLA varighed. Data blev analyseret ved anvendelse af Mann-Whitney U-test (* p <0,05; *** p <0,001, n = 15).
Figur 4.. Individuelle fluer var mekanisk chokeret over at fremkalde SLA. Den gennemsnitlige hastighed af fluen under anfald af SLA blev brugt som et mål for SLA intensitet. Der var ingen signifikant ændring i den gennemsnitlige hastighed for de to BS testes, når fodret metformin mutanter. Data blev analyseret ved anvendelse af Mann-Whitney U-test (n = 15).
Figur 5. Paths enkelte fluer i arenaen. Spor viser stierne enkelte fluer gennemkøres i arenaen under 15 min overvågningsperiode. A) Path af et aktivt CS flyve med movement koncentreret omkring periferien af det cirkulære arena. B) Path en typisk bss flue. Bevægelse var stadig koncentreret omkring periferien, men der var meget mindre bevægelse i forhold til CS fluer. (Bar repræsenterer 1 cm)
Figur 6. Fly bevægelse når de udsættes for et hidtil ukendt miljø. Individuelle fluer blev anbragt i en 5 cm diameter arena (5 mm i højden), og bevægelse blev overvåget i 15 min. Vejlængder blev beregnet for hver flue, og den gennemsnitlige længder blev taget for hver genotype. BSS mutanter viste en signifikant reduktion i vejlængde i forhold til CS fluer. Data blev analyseret ved anvendelse af Mann-Whitney U-test (** p <0,01, n = 10).
Figur 7. Velocity som en funktion af tid under sonderende bevægelse til CS (A) og en BSS (B) fly. En individuel flue blev anbragt i en 5 cm diameter arena (5 mm i højden), og bevægelse blev overvåget i 15 min. Velocity blev beregnet hver 0,5 sek som gennemsnittet af hastigheden over en 1 sek glidende vindue (bevægelse fra den tidligere 0,5 sek til det efterfølgende 0,5 sek interval.) Efter et par indledende byger af aktivitet BSS fluen forbliver relativt inaktiv hele retssagen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Ved behandlingen af bevægeapparatet eller bevægelsesmønstre i Drosophila, er det nyttigt at være i stand til at udtrække oplysninger om distance, hastighed bevægelighed og bevægelsesmønster. For at udtrække disse oplysninger har dyrt udstyr traditionelt været ansat, der ofte er uoverkommelige for små laboratorier eller laboratorier, der ønsker at benytte sådanne assays sparsomt 4,8,9.
Den her beskrevne assay kan anvendes til at bestemme den tilbagelagte afstand (fig. 2 og 6), hastigheden af bevægelse (figur 4 og 7) og bevægelsesmønster (figur 1 og 5) under anvendelse af udstyr, der koster mindre end to hundrede dollars . Brug af Excel Visual Basic-program, vi har udviklet, den række af x, y koordinater genereret af ImageJ program kan analyseres for at udtrække alle disse oplysninger. Dette system hartidligere blevet anvendt til at identificere både genetiske og farmakologiske undertrykkere af SLA i beslaglæggelse-følsomme Drosophila BS mutanter 1.
Mens systemet kan udtrække værdifulde oplysninger, har vi kun analyseret et flyve ad gangen. Dette kan være en væsentlig ulempe i forhold til de meget parallelle kommercielle muligheder 4. Den Multitracker plug-in til ImageJ har dog mulighed for at spore flere objekter samtidigt, men vi har ikke prøvet denne mulighed. Til dette bevægeapparatet assay, er en enkelt flue placeret under en plastik petriskål låget. Afhængigt af positionen af kameraet, kan man filme flere petriskåle at gøre parallelle optagelser. Ulempen er, at resolutionen vil falde som web-kamera er positioneret til at tage i et større felt. Hvordan dette påvirker integriteten af optagelsen er ikke kendt, men en højere ende kamera ville være en mulighed, hvis man ønskede at forfølge parallelle optagelser.
Optagelserne Den her er begrænset til 15 min, men det er muligt at gøre længere optagelser, hvis man anvender 64-bit versionen af ImageJ. Den 32-bit-versionen har en hukommelse grænse, der begrænser størrelsen af de filer, man kan analysere. Ved længere optagelser, er det vigtigt at bruge 64-bit versionen af ImageJ.
En af de største spørgsmål vedrørende denne metode er behovet for at fjerne støjen fra de data, der genereres ved at behandle det i ImageJ software. Men dette er ikke enestående for denne metode som lignende støjproblemer skal løses med andre optagemuligheder 3,5,6,8. Som omtalt i de metoder, kan en stationær flue vise mindre mængder af bevægelse, når behandles gennem ImageJ fordi programmet måler bevægelse fra midten af objektet, der kan variere, selv i et stationært objekt grund af udsving i lys og flyve kropsholdning.
Vores Visual Basic Excel-program bruger et glidende vindue analyse at fastsætte en tærskel for bevægelse. Denne threshold kan variere afhængigt af assayet. For beslaglæggelse analyse glidende vindue ser på ti optagelse point, som spænder 1 sek af realtid. Hvis fluen er flyttet 0,5 cm eller mere i løbet af denne tid, det anses for at være aktivt beslaglæggelse. Hvis det er mindre, anses det for at være i hvile. Når man ser på normal bevægelse, er en lavere tærskel er nødvendig for at bestemme cut off, og dette skal opnås via trial and error. En tærskelværdi på 0,1 cm / sek blev anvendt i denne undersøgelse. Den bedste måde at opnå dette er at registrere en flue, mens den holder stille i en kort periode og derefter justere cutoff, så det indikerer nogen bevægelse under optagelsen.
Sammenfattende er dette billig metode repræsenterer en levedygtig analyse til at udtrække meningsfulde oplysninger om de forskellige parametre for flue bevægelse. Det er en ideel screening teknik til at bruge til at identificere, hvis en adfærdsmæssig, genetisk eller farmakologisk manipulation har en effekt på bevægelse eller beslaglæggelse modtagelighed.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne erklærer, at de ikke har nogen konkurrerende finansielle interesser.
Acknowledgments
Forfatterne ønsker også at udtrykke tak til Kris Burner, Stephen McKinney, Laura Tobin, Jenny Gilbreath, Ashley Olley, Megan Hoffer, og Megan Hyde for deres arbejde i finpudsning denne analyse.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| WebCam | Logitech | Pro900 | Any quality webcam will suffice. |
| HandiAVI time-lapse software | Azcendant software | Latest version can be found at http://www.azcendant.com/ | |
| ImageJ | NIH | Latest version can be found at http://rsbweb.nih.gov/ij/download.html | |
| Multiracker Plug-In | NIH | Latest version can be found at http://rsbweb.nih.gov/ij/plugins/index.html | |
| Vortexer | VWR | Vortex Genie 2 | Most standard size vortexers such as the Vortex Genie 2 will suffice. |
| 5 cm Petri dish cover | LabM Limited | D011 | Smaller or larger Petri dish covers can be used for an arena in movement assay. |
| Light box | custom made | Built from scrap material. Illumination is used for the locomotion assay. Depending on the room lighting, it is possible to perform the assay without the light box. |
References
- Stone, B., Evans, L., Coleman, J., Kuebler, D. Genetic and pharmacological manipulations that alter metabolism suppress seizure-like activity in. 1496, 94-103 (2013).
- Benzer, S. Behavioral mutants of Drosophila isolated by countercurrent distribution. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 58, 1112-1119 (1967).
- Slawson, J. B., Kim, E. Z., Griffith, L. C. High-Resolution Video Tracking of Locomotion in Adult Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (24), (2009).
- Spink, A. J., Tegelenbosch, R. A., Buma, M. O., Noldus, L. P. The EthoVision video tracking systema tool for behavioral phenotyping of transgenic mice. Physiol. Behav. 73, 731-744 (2001).
- Kohlhoff, K. J., Jahn, T. R., Lomas, D. A., Dobson, C. M., Crowther, D. C., Vendruscolo, M. The iFly tracking system for an automated locomotor and behavioural analysis of Drosophila melanogaster. Integr. Biol. 3, 755-760 (2011).
- Gomez-Marin, A., Partoune, N., Stephens, G. J., Louis, M. Automated tracking of animal posture and movement during exploration and sensory orientation behaviors. PLoS ONE. 7, (2002).
- Wolf, F. W., Rodan, A. R., Tsai, L. T., Heberlein, U. High-Resolution analysis of ethanol-induced locomotor stimulation in Drosophila. J. Neurosci. 22, 11035-11044 (2002).
- Martin, J. R. A portrait of locomotor behaviour in Drosophila determined by a video-tracking paradigm. Behav. Processes. 67, 207-219 (2004).
- Meunier, N., Belgacem, Y. H., Martin, J. R. Regulation of feeding behaviour and locomotor activity by takeout in Drosophila. J. Exp. Biol. 210, 1424-1434 (2007).
- Koudounas, S., Green, E. W., Clancy, D. Reliability and variability of sleep and activity as biomarkers of ageing in Drosophila. Biogerontology. 13, 489-499 (2012).
- Catterson, J. H., Knowles-Barley, S., James, K., Heck, M. M., Harmar, A. J., Hartley, P. S. Dietary modulation of Drosophila sleep-wake behaviour. PLoS One. 5, (2010).
- Donelson, N., Kim, E. Z., Slawson, J. B., Vecsey, C. G., Huber, R., Griffith, L. C. High-Resolution positional tracking for long-term analysis of Drosophila sleep and locomotion using the ''Tracker'' program. PLos ONE. 7, (2012).
- Duboff, B., Fridovich-Keil, J. L. Mediators of a long-term movement abnormality in a Drosophila melanogaster model of classic galactosemia. Dis. Model Mech. 5, 796-803 (2012).
- Seiger, M. B., Kink, J. F. The effect of anesthesia on the photoresponses of four sympatric species of Drosophila. Behav. Genet. 23, 99-104 (1993).
- Pavlidis, P., Ramaswami, M., Tanouye, M. A. The Drosophila easily shocked gene: a mutation in a phospholipid synthetic pathway causes seizure, neuronal failure, and paralysis. Cell. 79, 2333 (1994).
- Royden, C. S., Pirrotta, V., Jan, L. Y. The tko locus, site of a behavioral mutation in D. melanogaster, codes for a protein homologous to prokaryotic ribosomal protein S12. Cell. 51, 165-173 (1987).
- Parker, L., Padilla, M., Du, Y., Dong, K., Tanouye, M. A. Drosophila as a model for epilepsy: bss is a gain-of-function mutation in the para sodium channel gene that leads to seizures. Genetics. , 187-534 (2011).
- Hardie, D. G. Role of AMP-activated protein kinase in the metabolic syndrome and in heart disease. FEBS Lett. 582, 81-89 (2008).
- Fulgencio, J. P., Kohl, C., Girard, J., Pegorier, J. P. Effect of metformin on fatty acid and glucose metabolism in freshly isolated hepatocytes and on specific gene expression in cultured hepatocytes. Biochem. Pharma. 62, 439-446 (2001).
