渗透避免IN线虫:突触功能的两个基因，人类同源 NRXN1 NLGN1，作为候选人自闭症

大家好，我是西班牙科尔多瓦大学遗传学系的 Manuel Ruiz Rubio。我们以优雅为实验工具 在自闭症的研究中，利用世界表征神经系统的三种优雅。我们正在研究线虫的突变体，它对参与神经突触的基因有效，这与自闭症有关。

Rein Regans 是存在于突触中的膜粘附分子。C elegance 的头部包含 amfi，这是线虫的感觉器官，可介导对不同刺激（包括渗透强度）的反应。Amfi 由 12 个高度相关的感觉 bipo 神经元和一个 INAP 末端动作组成。

其中两个神经元 Name A SH 右侧和左侧在渗透感觉功能中特别重要。检测具有高渗透强度的水溶性再平衡。嗨，A Nan River wine 用天空法测量突触缺陷突变体的渗透回避

为了评估神经和神经高渗透强度回避的影响，我们使用基于四摩尔果糖溶液的方法报告了 C 对神经神经基因缺陷突变体的不同反应。敲响当天，准备含 1% 刚果红的四摩尔果糖原液，并在室温下完全溶解。NGM 板上直径为 1 厘米的环形环是固体培养基中心的子线。

使用 15 微升红色四磨牙果糖溶液。让果糖浸泡到英亩中约 5 分钟，实验应盲目进行。每个菌株为 S 8 的板应由第二个实验者标记。

SA 是使用这些未询问的标记执行的。当实验在进行销售前约 24 小时完成时，有必要挑选每种基因型的 L 四只幼虫，并将它们转移到含有大肠杆菌的 AFL NGM 板中，并在第二天保持在 20 摄氏度。实验应该从年轻人开始。

将每个菌株的单个蠕虫放在休息圈内，并跟踪每只动物对抽动屏障的反应。我们应该进行每个菌株的 10 只动物和至少 3 次复制实验以获得结论性结果。连续六次避开红环的被归类为正常。

那些在少于六次尝试中退出环的人被认为在渗透敏感性方面有缺陷，必须在每个 SA Bristol 中使用控制菌株，并且使用两只动物作为阳性对照，因为它们要避开环屏障。控制菌株 当他们发现由四颗磨牙果糖组成的渗透屏障时，他们会向后响应。神经缺陷突变炸弹的行为与一种类型强度的行为相似。

然而，NEUR 缺陷突变体未能检测到这种渗透屏障。双突变强度 car 在不同的 ative neur 和 nout 等位基因中恢复了响应渗透强度的野生型表型，以获得 Of downworms 通过 RNA 干扰喂养已用含有与靶基因相对应的片段的 L 44 40 载体转化的大肠杆菌 HD 11 5 菌株的分离菌落。第二天将细菌分离到 LBA 或带有碳酸的板上。

挑选细菌菌落并接种 LV 液体培养基。在 37 度的摇晃下继续生长约 7 小时。观察这种培养物滴到具有碳酸天花板的 NGM 板上，并在室温下放置 IPTG 和 wai 过夜，使细菌生长并开始诱导靶基因片段的表达。

有必要对 RNA 干扰使用阳性和非阴性对照。喂养实验。阴性对照相等。

I HT 11 5 菌株用 TL 44 40 载体转化。阳性对照 ELI HT 11 5 细胞用含有 22 基因序列的 L 44 40 载体转化。该基因的锁定起源于在无菌显微镜下容易区分的摇晃表型。

第一天。L 来自 NGM PLA 的四阶段细菌在 20 摄氏度的 12 小时内转移到含有细菌和科威特的平板上。这是一个斋戒期。

第二天，将快速的年轻成体转移到接种了表达特异性 RNA 干扰靶基因的细菌的平板上。在 48 摄氏度下放置约 20 小时以获得 F1 后代。然后在接下来的两天里，将一些 F1 成虫炸弹挑选到另一个接种相同细菌的平板上。

从 F 两个后代中选择并分离年轻人 表型 Bristol N 两个野生型菌株脂肪与细菌发生同理心。L 44 40 向量在正常时向后移动。渗透屏障。

Bristol 和真白色型菌株喂养了表达神经基因片段的细菌，从优雅未能检测到脚趾的磨牙溶液。然而，无法检测到渗透屏障的神经缺陷突变体在喂食表达 nane 基因片段的细菌时恢复了这种能力 来自海优雅.在本视频中，我们展示了一种简单的方法，可以研究影响 Sea Elegance 中渗透回避反应的基因的影响。

使用带有刚果红的果糖正式紧固环来分析炸弹对渗透强度的响应。缺陷突变体的神经学在这种反应中是有缺陷的，然而，NU 突变体没有受损，无法检测到显示出类似于野生型菌株的断层应激反应。该视频显示，携带不同敲除等位基因的双突变菌株在基因和释放基因中恢复了对渗透强度有反应的野生型表型。

这些观察结果使用 RNA 干扰、喂养锁定方法得到证实。这样，野生型菌株在喂食表达 ING 基因序列的细菌时，识别渗透屏障的能力受损。另一方面，无法检测到另外四种果糖溶液的神经缺陷突变体在喂食表达根据 NNU 基因序列的细菌时恢复了这种行为。

本实验显示的结果表明，n seeing 和 neur 可能参与线虫传感器神经元的突触连接，并且它们以影响突触功能的方式相互相互作用。好了，再见，祝你的实验好运。