乙醇固定与DAPI染色：一种用于可视化 C. elegans 中DNA的方法

- 从 在 一 滴 缓冲 液 开 始，将 完整 的 线虫 转移 至 载玻片 上 的 液滴 中。线虫 放置 妥当 后，用 无绒布 吸去 并 移除 缓冲 液。通过 多次 加入 90% 乙醇浸泡样本，每次加入后待其完全挥发，以固定样品。

一旦 的 乙醇 有 蒸发 之后 的 最终 冲洗， 添加 a 溶液 含有 的 核酸 酸 染料， DAPI 到 的 样本 DAPI 结合 优先地 到 腺嘌呤 和 胸腺嘧啶 碱基 在 的 次要的 凹槽 的 DNA 当 结合的 的 DAPI-DNA 复合物 吸收 紫外 光 和 发射 可见的 蓝色 光

下一步 添加 一个 抗荧光淬灭剂 防腐剂 到 延伸 的 架子 生命 的 的 样本。 应用 a 盖子 滑动 和 密封 它 到 的 载玻片 然后 使用 a 荧光的 显微镜 与 a 蓝色 过滤器 到 可视化 DAPI 细胞器， ， 取决于 开启 的 细胞 和 它的 循环 状态， 能 代表 单个 染色体 姐妹 染色单体 对，配对 或 整个 细胞核 在 这 实验, 我们 将 计数 DAPI 染色 姐妹 染色单体 对 在 卵母细胞 至 识别 四倍体 菌株 的 秀丽隐杆线虫

- 四倍体 菌株 有 12 染色体 对，配对 哪一个 能 是 经过验证的 由 计数 的 DAPI 染色 细胞器 在 未受精的 卵母细胞 为了 做 因此， 滴 五 到 十 微升 的 M9 缓冲液 到……上 a 载玻片 和 转移 六 到 10 推测的 四倍体 进入 的 滴 下 a 解剖 显微镜, 仔细地 浸泡 向上 大多数 的 的 M9 进入 a 绒毛 自由 清洁 组织。

然后 滴 10 微升 的 90% 乙醇 到……上 的 线虫 和 观察 的 乙醇 蒸发 完全地。 作为 很快 作为 的 蒸发 完成， 重复 的 过程 的 添加 乙醇 和 观察 它 蒸发 在 总计， 添加 10 微升 在 四 应用。 之后 的 最后 滴 蒸发， 添加 六 微升 的 DAPI 在 二 纳克 每 微升 或 a 相似的 染色

对于 长 术语 储存 的 的 载玻片, 安装 的 线虫 在 a 商业化 可用 或 自制 抗荧光淬灭剂 然后 添加 a 盖玻片 和 密封 的 边缘 与 指甲 抛光。 之后 的 指甲 抛光 具有 干燥的， 的 载玻片 能 是 评分。 使用 a 荧光的 显微镜 和 100 x 放大倍数

首先， 找到 的 大多数 成熟 未受精的 卵母细胞 哪个 是 立即 相邻的 到 的 受精囊， 和 有 不 然而 进入 或者 的 受精囊 或 的 子宫 的 DAPI 细胞器 此处 是 可能 单个 染色体 对 接下来， 焦点 开启 的 细胞核 的 的 卵母细胞 和 使用 的 显微镜的 精细 焦点 到 缓慢地 扫描 它， 从 顶部 到 底部 而 计数 的 DAPI 细胞器 然后 重新计数 的 DAPI 细胞器 在 的 相同 细胞核 由 移动 的 聚焦 从 底部 到 顶部

野生型 类型 卵母细胞 有 六 DAPI 细胞器 开启 平均值 这 存在 的 12 DAPI 细胞器 表示 那 的 动物 在 这 菌株 是 或者 部分 或 完整 四倍体 分析 在 最少 10 动物 每 菌株 通常 染色体 对 将 是 非常 关闭 或 接触 因此 的 数量 的 DAPI 细胞器 是 通常 较小 比 的 实际 数量 的 染色体 对