琼脂糖包埋：一种用于斑马鱼胚胎长期成像的活体封片基本方法

- 开始 由 添加 E3 培养基 到 低 熔化 点 琼脂糖 和 加热 直到 的 琼脂糖 完全地 溶解。 冷却 的 琼脂糖 到 37 度 摄氏度 和 添加 三卡因 溶液 接下来， 麻醉 的 胚胎 由 添加 三卡因 至 a 佩特里 培养皿 含有 胚胎 在 E3 培养基 涡旋 的 佩特里 培养皿 到 收集 的 胚胎 在 的 中间

使用 a 转移 移液器 绘制 上 一 胚胎 与 a 最小 量 的 培养基 保持 的 移液器 在 一个 直立的 位置 和 反弹 的 胚胎 到 位置 它 在 的 尖端 的 的 移液器 现在 位置 的 胚胎 在 的 琼脂糖 溶液 无 添加 任何 过量 培养基 哪个 会 稀释 的 琼脂糖 和 防止 凝胶化。 轻柔地 混合 的 胚胎 在……之内 的 琼脂糖 和 转移 的 溶液 进入 的 良好 的 一个 成像 平板 使用 的 移液器

放置 的 平板 下 a 显微镜 和 使用 a 移液器 尖端 到 位置 的 胚胎 在 的 期望的 方向。 一旦 的 琼脂糖 凝固， 倒入 E3 培养基 含有 三卡因 在 顶部 的 它 到 保持 的 琼脂 水合的 和 图像 的 胚胎 在 一个 示例 方案 我们 将 安装 parabiotic 斑马鱼 胚胎 用于 成像 和 分析。

获取 图像 的 的 融合的 胚胎， 准备 0.8% 低 熔化 点 琼脂糖 尽管 静止 热的， 等分试样 一 毫升 的 的 琼脂糖 进入 1.5 毫升 微型离心机 管 设置 在 a 37 度 摄氏度 加热 阻断 麻醉 的 异源共生 胚胎 由 添加 1 毫升 的 4 毫克 每 毫升 pH 7.0 三卡因 到 的 25 毫升 的 E3 培养基 含有 的 胚胎 轻柔地 涡旋混合 的 培养皿 因此 那 的 胚胎 池 在 的 中间

然后 使用 a 宽头 塑料 转移 移液器 绘制 上 的 胚胎 在 作为 小的 液体 作为 尽可能。 接下来， 转动 的 移液器 直立的 和 轻柔地 反弹 的 胚胎 因此 那个 他们 沉淀 到 的 非常 底部 的 的 移液器 然后 转移 的 胚胎 到 a 1 毫升 等分试样 的 低 熔化 点 琼脂糖 由 轻微地 接触 的 移液器 尖端 在 的 表面 的 的 琼脂糖 处理 关闭 任何 过量 液体 从 的 移液器 和 使用 的 移液器 到 轻柔地 混合 的 胚胎 在 的 琼脂糖

然后， 与 的 移液器 转移 的 琼脂糖 和 胚胎 到 的 良好 的 a 玻璃 底部 六孔板 平板 下 a 立体 显微镜, 使用 a 凝胶 加载中 尖端 固定的 到 的 结束 的 a 解剖分离 针 到 位置 的 胚胎 关闭 到 的 盖子 玻璃 和 在 的 期望的 取向 用于 成像 之后 的 琼脂糖 具有 设置 和 培养基 与 三卡因 有 已经 添加 至 的 孔 使用 一个 倒置 宽场 落射荧光 激光扫描 共聚焦 或 旋转 盘式共聚焦 显微镜 到 获取 图像

对于 a 整个 胚胎 领域 的 查看， 使用 4倍 主观的 使用 a 20x 目标 到 图像 a 特异的 组织 过程 的 图像 根据 到 的 text 实验方案