阿加安装：安装活斑马鱼胚胎进行长期成像的基本方法

- 首先加入 E3 中低熔点琼脂糖并加热至琼脂糖完全溶解。将琼脂糖冷却至 37 摄氏度，并加入三卡因溶液。接下来，通过将三卡因添加到含有 E3 培养基中胚胎的培养皿中来麻醉胚胎。旋转培养皿以收集中间的胚胎。

使用移液管，用最少量的培养基吸取一个胚胎。将移液器保持在直立位置并弹跳胚胎以将其定位在移液器的尖端。现在将胚胎放入琼脂糖溶液中，不添加任何多余的培养基，这会稀释琼脂糖并防止胶凝。在琼脂糖中轻轻混合胚胎，并使用移液管将溶液转移到成像板的孔中。

将板放在显微镜下，并使用移液器吸头将胚胎定位在所需的方向。琼脂糖凝固后，将含有三卡因的 E3 培养基倒在其顶部，以保持琼脂水合并为胚胎成像。在一个示例协议中，我们将安装旁生元斑马鱼胚胎进行成像和分析。

为了获得融合胚胎的图像，请制备 0.8% 低熔点琼脂糖。趁热，将 1 毫升琼脂糖分装到 1.5 毫升微量离心管中，置于 37 摄氏度加热块中。通过将 1 毫升 4 毫克/毫升 pH 7.0 三卡因添加到 25 毫升含有胚胎的 E3 培养基中来麻醉副生元胚胎。轻轻旋转培养皿，使胚胎在中间聚集。

然后使用宽头塑料移液管，在尽可能少的液体中吸取胚胎。接下来，将移液器直立转动并轻轻弹动胚胎，使它们沉淀在移液器的最底部。然后通过轻轻触摸琼脂糖表面的移液管吸头，将胚胎转移到 1 mL等分试样的低熔点琼脂糖中。从移液管中清除多余的液体，并使用移液管轻轻混合琼脂糖中的胚胎。

然后，用移液管将琼脂糖和胚胎转移到玻璃底六孔板的孔中。在立体显微镜下，使用固定在梳理针末端的凝胶加载尖端将胚胎定位在靠近盖玻片的位置，并处于所需的成像方向。琼脂糖凝固并将含有三卡因的培养基添加到孔中后，使用倒置宽场落射荧光激光扫描共聚焦或转盘共聚焦显微镜获取图像。

对于整个胚胎视野，请使用 4x 主观。使用 20 倍物镜对特定组织进行成像。根据文本协议处理图像。