多层安装于斑马鱼的长期光表镜

该程序的总体目标是安装斑马鱼胚胎以进行长期体内光片显微镜检查。这是通过首先清洁含氟的乙丙烯或 FEP 管并涂上甲基纤维素来实现的。接下来，对感兴趣的斑马鱼胚胎进行涂层。

然后，首先将胚胎转移到熔化的琼脂糖中，然后转移到包被的 FEP 管中。最后，用 aros 塞封闭管的底部，并仔细检查安装的胚胎的方向。最终，可以通过体内光片显微镜获得结果，显示斑马鱼胚胎在几天内以高空间和时间分辨率不受干扰地发育。

嗯，与现有技术相比，主要优势在于我们现在可以在几天内观察超级鱼胚胎，而不仅仅是几个小时。这种方法可以使用光片显微镜为斑马鱼的长期胚胎发生提供有价值的见解。它也可以应用于其他小型生物，如小型海洋生物。

它还可用于其他显微镜技术，例如光学投影断层扫描、宽场显微镜或共聚焦显微镜。刚接触这种方法的人可能会很困难，因为该方案涉及一些时间关键的步骤，并且判断胚胎的最终位置需要一些专业知识 准备 FEP 管 首先，用一磨牙氢氧化钠反复冲洗来清洁它。然后将试管转移至装有 0.5 摩尔氢氧化钠和超声 8 的 50 mL离心管中，放置 10 分钟。

将聚合物管转移到装有蒸馏去离子水的小盆中并冲洗。然后冲洗 70% 乙醇，然后再将其转移到新的离心管中。用乙醇超长。

对试管进行超声处理 10 分钟，然后将其转移到装有蒸馏去离子水的小盆中并冲洗。再。将干净的 FEB 管切成三厘米长的小块，必要时将其拉直。将清洁后的试管存放在装满蒸馏去离子水的 50 毫升新鲜试管中。

准备 Trica 储备溶液。根据文本方案，3% 甲基纤维素以及 1.5% 和 0.1% Aros。融化 1.5% agarro 并将其倒入培养皿中，形成一层厚度约为 2 毫米的层。

在所需阶段收集已阳性表达所选荧光基因的斑马鱼胚胎，并将它们转移到立体镜下的 E 3 新鲜培养皿中。使用两个锋利的镊子，小心地包覆胚胎，用一个镊子固定冠状体，第二个镊子将其撕开并拉下以进行多层安装。戴手套的手，将钝端套管连接到注射器上。

小心地将套管插入清洁过的 FEP 管的一端约 3 毫米。接下来，将 FEP 管的自由端浸入 3% 甲基纤维素中，并将溶液填充到管中。然后慢慢推动注射器，使用 E 三种培养基释放甲基纤维素，重复浸渍和排出步骤。

同时，在加热块中，将一份 0.1% 的等分试样加热至 70 摄氏度。在将反应管转移到设置为 38 摄氏度的加热块之前，先短暂涡旋反应管。加热后，让试管短暂冷却，加入 trica 至终浓度为每升 133 至 200 毫克，然后涡旋。

再次使用玻璃粘贴移液器。将涂有涂层的胚胎转移到反应管中，预热的 aros 尽可能少地转移 E 3。用 FEP 管和连接的注射器轻轻吸收少量 aros，然后吸收胚胎并将 aros 完全填充管中。

胚胎应位于管的任一端，头部指向开口。为避免内容物泄漏，请将管子保持在水平位置以堵塞管子。用剃须刀片将其从套管上切下来。

然后保持管子垂直，慢慢地将其末端穿过整个 1.5%aros 层并稍微旋转。为避免干燥，成像前将封固的标本保存在装有 E 三种培养基的 1.5 毫升反应管中。确认 FEP 管内的鱼是笔直的，然后它的头部直接位于塞子的顶部进行成像。

将 trica 添加到成像室内的培养基中。这里显示的是受精后 1 天的转基因。K-G-R-L-G-F-P 斑马鱼胚胎在两天的过程中成像，以观察脉管系统的发育。

斑马鱼不受封固剂的限制，可以正常发育。例如，它的头会抬起。尾巴伸展，维管发芽似乎不受阻碍。

如果作得当并且所有材料都很容易获得，这种技术可以在 10 分钟内完成。请记住立即执行所有主要步骤。保持所有溶液清洁，因为污垢会影响最终图像质量。