Inflation de l’encre de l’Inde: Une méthode de coloration pour visualiser les nodules tumoraux

Commencez par placer un côté ventral de souris euthanasié vers le haut sur un lit chirurgical et en sécurisant les membres de l’animal. À l’aide de ciseaux, couper le long de la ligne médiane à travers la cage thoracique jusqu’aux glandes salivaires. Placez une pointe de pipette sous la trachée pour l’élever et l’isoler. Faites pivoter le lit chirurgical à 180 degrés. Insérez une aiguille de seringue contenant une tache d’encre de l’Inde dans la trachée et injectez l’encre dans les poumons jusqu’à ce que vous sentiez de la résistance.

Les cellules cancéreuses sécrètent une grande quantité d’acide lactique qui génère une forte charge négative à la surface des cellules. Lorsque ces cellules sont tachées d’encre de Chine, une tache acide, la surface de la cellule repousse la tache et reste non tachée.

Utilisez des ciseaux pour couper la trachée et faire glisser une paire de pinces sous les poumons. Retirez doucement les poumons du corps de l’animal. Rincez les poumons à l’eau et transférez-les dans un flacon contenant la solution de Fekete pour enlever l’excès de taches et fixer le tissu dans une hotte de fumée. Les nodules de tumeur semblent blancs sur le fond foncé.

Dans le protocole suivant, nous effectuerons la technique d’inflation de l’encre de Chine pour valider la métastase pulmonaire.

Pour valider la métastase de la tumeur primaire au poumon, placez d’abord la souris dans la position de supination sur une planche de polystyrène et fixez les jambes pour assurer un accès dégagé à la trachée. Vaporiser la souris avec 70% d’éthanol. Ensuite, utilisez une paire de ciseaux pour faire une incision le long de la ligne médiane de l’abdomen moyen de la souris à travers la cage thoracique et vers le haut vers les glandes salivaires. Identifiez la trachée. Ensuite, utilisez des forceps pour enlever les tissus environnants.

Ensuite, en tenant une pointe pipette dans une main, enfiler la pointe sous la trachée et soulever doucement le tissu de haut en loin du corps. En gardant la trachée surélevée, faites pivoter la plate-forme de dissecting à 180 degrés. Ensuite, insérez une seringue à tuberculine de calibre 27 demi cc dans la trachée et gonflez complètement les poumons avec de l’encre de Chine jusqu’à ce qu’une forte résistance soit ressentie.

Puis, à l’aide d’une paire de ciseaux, couper la trachée. Tenir la souris en place avec un forceps, insérer un autre forceps sous les poumons et tirer les lobes pulmonaires de la souris. Rincez brièvement les poumons dans un bécher d’eau et transférez le tissu dans une hotte de fumée. Ensuite, placez les poumons dans un flacon de scintillation en verre contenant 3 millilitres de la solution de Fekete, plafonnant le flacon pour empêcher la solution de s’évaporer. Après quelques minutes, transférer les poumons dans une boîte de Pétri et compter le nombre de nodules de tumeur simples, blancs et métastatiques.