Encyclopedia of Experiments: Cancer Research
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
Ötenazili bir fare ventral tarafını cerrahi bir yatağa yerleştirerek ve hayvanın uzuvlarını sabitleyerek başlayın. Makas kullanarak, orta çizgi boyunca göğüs kafesi boyunca tükürük bezlerine kadar kesin. Yükseltmek ve izole etmek için nefes borusunun altına bir pipet ucu yerleştirin. Ameliyat yatağını 180 derece döndürün. Nefes borusuna Hindistan mürekkedi lekesi içeren bir şırınga iğnesi yerleştirin ve direnci hissedene kadar mürekkeci akciğerlere enjekte edin.
Kanser hücreleri, hücre yüzeyinde güçlü bir negatif yük oluşturan çok miktarda laktik asit salgılar. Bu hücreler asidik bir leke olan Hindistan leki ile boyandığında, hücre yüzeyi lekeyi geri püskürtülr ve lekesiz kalır.
Nefes nefesini kesmek ve akciğerlerin altına bir çift cımbız kaydırmak için makas kullanın. Ciğerleri yavaşça hayvanın vücudundan çıkarın. Akciğerleri suda durulayın ve fazla lekeyi gidermek ve dokuyu duman kaputuna sabitlemek için Fekete'nin çözeltisini içeren bir şişeye aktarın. Tümör nodülleri koyu arka plana karşı beyaz görünür.
Aşağıdaki protokolde, akciğer metastazını doğrulamak için Hindistan mürekkep şişirme tekniğini gerçekleştireceğiz.
Primer tümörün akciğere metastazını doğrulamak için, önce fareyi bir polistiren tahtası üzerinde supine konumuna yerleştirin ve trakeaya engelsiz bir erişim sağlamak için bacakları sabitleyin. Fareye% 70 etanol püskürtün. Daha sonra, farenin orta karnının orta çizgisi boyunca göğüs kafesi boyunca ve tükürük bezlerine doğru bir kesi yapmak için bir makas kullanın. Nefes borusunun kimliğini tespit edin. Daha sonra, çevredeki dokuları çıkarmak için tokmak kullanın.
Daha sonra, bir elinde pipet ucu tutarak, ucu nefes borusunun altına geçirin ve dokuyu hafifçe yukarı ve vücuttan kaldırın. Trakeayı yüksek tutarak, diseksiyon platformunu 180 derece döndürün. Daha sonra, yarım cc 27-gauge tüberkülin şırınnayı nefes borusuna yerleştirin ve güçlü bir direnç hissedilene kadar akciğerleri Hindistan mürekkeple tamamen şişirin.
Sonra, bir makas kullanarak nefes nefesini kesin. Fareyi bir kümesle yerinde tutarak, akciğerlerin altına başka bir kümes ucu yerleştirin ve akciğer loblarını fareden çekin. Akciğerleri bir su kabında kısa bir süre durulayın ve dokuyu bir duman başlığına aktarın. Daha sonra, akciğerleri 3 mililitre Fekete çözeltisi içeren bir cam scintillation şişesine yerleştirin ve çözeltinin buharlaşmasını önlemek için şişeyi kapleyin. Birkaç dakika sonra, akciğerleri bir Petri kabına aktarın ve tek, beyaz, metastatik tümör nodüllerinin sayısını sayın.
