白血病亚群收获:一种从 2D 共培养中空间分离白血病细胞亚群的方法

- 当白血病细胞与间充质基质细胞共培养时，它们与基质细胞相互作用并形成三个亚群。自由漂浮的悬浮细胞、粘附在间充质单层表面的相位明暗细胞和间充质单层下方的相位暗淡细胞。为了分离每个亚群，取具有间充质基质细胞单层的组织培养板。

将肿瘤特异性培养基中存在的白血病细胞接种到单层细胞上，并在平板上孵育所需的持续时间。接下来，通过将自由漂浮的细胞移液到单独的试管中来收集悬浮的肿瘤细胞。现在，将新鲜培养基添加到板中并用力移液以将相亮肿瘤细胞从间充质单层表面移出。

通过在单独的试管中移液来收集这些细胞。将胰蛋白酶添加到板中以去除贴壁间充质细胞。添加胎牛血清或 FBS，以停止胰蛋白酶的作用并分解细胞聚集体。现在，将 phase-dim 细胞收集在试管中。分别离心包含不同细胞亚群的所有三个试管，并将沉淀重悬于新鲜培养基中以供进一步分析。在以下方案中，我们将从 2D 共培养中分离悬浮、相位明亮和相位暗淡的白血病细胞。

- 要收获悬浮的肿瘤亚群，请从白血病细胞共培养板中吸出培养基，并使用相同的培养基轻轻冲洗板一次。然后，将漂浮悬浮白血病细胞亚群转移到 15 mL 锥形管中。要收获相亮肿瘤亚群，将 10 毫升新鲜培养基加回共培养板上

并足够用力冲洗大约五次，以去除贴壁的白血病细胞，而不会移动贴壁细胞单层。然后，将相亮亚群转移到其自己的 15 mL 锥形管中。要收获期暗淡的肿瘤亚群，请用 1 毫升 PBS 冲洗去除剩余的培养基，并在 37 摄氏度下用 3 毫升胰蛋白酶分离细胞。

5 分钟后，轻轻敲击板的侧面以去除贴壁细胞，然后加入 1 毫升 FBS 以停止酶促反应。然后，冲洗血清 3 到 5 次，以分离任何大细胞聚集体，并将未纯化的 phase-dim 亚群转移到新的 15 mL 锥形管中。收集完所有亚群后，离心细胞并将每个沉淀重悬于 1 毫升预热培养基中。