Name: 实验转移和CTL过继转移免疫小鼠模型 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-11-26T15:03:00.000+00:00
Duration: 8 min 6 s
Description: 学习肿瘤特异性CTL过继转移免疫疗法在小鼠肺转移模型中的体内应用效果。通过尾静脉注射肿瘤细胞建立转移灶，并利用印度墨水可视化定量分析肿瘤结节数量与大小，为癌症免疫治疗研究提供可靠的实验方法。

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由美国国立卫生研究院（CA133085 至 K.L.）和美国癌症协会（RSG-09-209-01-TBG 至 K.L.）资助。

1. 实验性转移小鼠模型
<ol>
<li>在接种肿瘤细胞的前一天，将最多 1 × 107 个 CMS4-Met 细胞接种于一个 T75 培养瓶中，加入 10 mL 含 10% 血清的 RPMI 培养基，以获得快速生长的肿瘤细胞。在 37°C 下孵育过夜。</li>
<li>在接种当天，吸除培养基，用 PBS 洗涤细胞一次，然后在 37°C 下使用 0.05% 胰蛋白酶-EDTA 消化 5 分钟以收获肿瘤细胞。加入 10 mL 含 10% 血清的 RPMI 培养基终止反应。将细胞转移至锥形管中。</li>
<li>在室温下，使用 Sorvall Legend RT 离心机以 1300 rpm 离心 3 分钟，收集细胞。弃去上清液。用 10 mL 新鲜的 1× HBSS 重悬细胞进行洗涤，再次离心，并以相同方式重悬细胞。</li>
<li>使用血细胞计数板对肿瘤细胞进行计数。用 HBSS 稀释细胞，使每次注射所需的细胞重悬于总体积为 100 μL 的溶液中。</li>
<li>将 6–8 周龄的 BALB/c 小鼠置于盛有温水的烧杯中加温，以扩张尾静脉。将小鼠固定在实验台上的尾静脉固定装置中。使用微量注射器向侧尾静脉注射 100 μL 肿瘤细胞悬液。采用无菌操作技术以避免感染。注射后，对注射部位施加轻微压力，直至出血停止。</li>
<li>将小鼠放回笼中，使其肿瘤生长至所需阶段。</li>
</ol>
2. 细胞毒性T淋巴细胞（CTL）过继性转移免疫治疗
<ol>
<li>在转移当天，通过上下吹打重悬已纯化的细胞毒性T淋巴细胞（CTLs），其制备方法如文中所述。将一个培养板中的所有细胞转移至一个15 mL锥形管中，注意液体体积不要超过管容量的2/3。</li>
<li>将一支无菌巴斯德吸管插入锥形管中，将淋巴细胞分离液（LSM）缓慢加入至细胞下方，直至总体积接近14 mL。</li>
<li>注意避免扰动液层。在室温下以2000 rpm离心20分钟。离心结束后不得使用刹车减速转子。</li>
<li>将CTLs转移至一个新的15 mL锥形管中。加入HBSS至约10 mL体积进行洗涤。</li>
<li>对细胞进行计数。在室温下以1300 rpm离心5分钟。用HBSS重悬至注射所需的细胞密度，每剂注射总体积保持在100 μL。</li>
<li>采用本视频前面展示的相同尾静脉注射技术，将CTLs注射入荷瘤小鼠体内。</li>
<li>将小鼠放回笼中，使其体内的CTLs与肿瘤发生相互作用。通常在CTL处理后14–21天处死小鼠并进行分析。</li>
</ol>
3. 肺转移灶的可视化
<ol>
<li>为观察肺转移灶，将已处死的小鼠仰卧置于泡沫板上，固定四肢以充分暴露气管区域，随后用70%乙醇喷洒小鼠腹侧表面。</li>
<li>从腹部中线开始，使用剪刀沿中线切开，穿过肋骨区域，向上延伸至唾液腺处，暴露气管。用镊子清除气管周围的组织。</li>
<li>将200 μL移液器吸头从气管下方穿过。一手持吸头，轻轻将气管提起并远离身体。</li>
<li>将操作平台旋转180°，使用50 mL注射器通过气管向肺部注入印度墨水，直至肺部完全膨胀并产生明显阻力为止。</li>
<li>用剪刀剪断气管，将一对镊子从肺下方滑入，将肺整体取出。将肺在盛有1 L水的烧杯中短暂冲洗。</li>
<li>在化学通风橱内，将肺转移至含有5 mL Fekete's溶液的玻璃闪烁瓶中。数分钟后，肿瘤组织将以白色结节的形式出现在黑色的肺组织上。此时可对肿瘤结节进行计数，并可无限期保存于Fekete's溶液中。</li>
</ol>
4. 可视化肺组织中的代表性转移灶
<ol>
<li>此处显示的是注射了乳腺癌细胞系4T1的小鼠肺组织，可见白色斑点，提示存在肿瘤。而注射了转染IRF8显性负性突变体K79E的4T1细胞的小鼠，则显示出肿瘤细胞转移能力增强。</li>
<li>这些图像展示了细胞毒性T淋巴细胞（CTL）过继转移免疫治疗效果的组织学分析结果。注射生理盐水的荷瘤小鼠在6天后出现多个肿瘤，由黄色箭头指示（A）；而注射肿瘤特异性T细胞的小鼠则显示肿瘤数量减少（B）。</li>
<li>在同一实验中，印度墨水处理提供了一种更简便的方法来评估CTL过继转移的疗效。在此方法中，荷瘤肺组织上的白色肿瘤结节可清晰区别于成功接受CTL过继转移后的肺组织，通过计数结节数目可实现比组织学分析更定量的评估。</li>
</ol>
5. 代表性结果
 <img src="/files/ftp_upload/2077/2077fig1.jpg" alt="肿瘤转移小鼠模型示意图；肿瘤细胞移植、CTL 转移、肺转移分析。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图 1"> 
图 1. 实验性肿瘤转移及 CTL 过继转移免疫治疗小鼠模型的实验方案。红点代表肿瘤细胞，绿点代表 CTL。
 <img src="/files/ftp_upload/2077/2077fig2.jpg" alt="小鼠肺部肿瘤生长比较；实验结果；癌症研究；4T1细胞系。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图2"> 
图2. IRF8功能的破坏增强了肿瘤细胞的转移潜能。小鼠乳腺癌细胞系4T1被稳定转染空载体（4T1.Vector）或表达IRF8显性负性突变体K79E的载体（4T1.IRF8K79E）（15, 16）。将肿瘤细胞通过尾静脉注射（i.v.）注入小鼠体内。用印度墨水灌注荷瘤小鼠的肺组织以显示肿瘤结节。在黑色肺组织背景下，肿瘤结节以白色斑点形式清晰可见。
 <img src="/files/ftp_upload/2077/2077fig3.jpg" alt="组织学比较，肺组织，显微图像，细胞结构分析，H&amp;E染色。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图3"> 
图3. CTL过继转移免疫治疗效果的组织学分析。将小鼠肉瘤细胞系CMS4-Met通过尾静脉注射至小鼠体内。三天后，向荷瘤小鼠注射生理盐水（A）或肿瘤特异性T细胞（B）。在CTL治疗六天后，采用常规H&amp;E组织学染色法分析肺组织。箭头所示为肿瘤结节。
 <img src="/files/ftp_upload/2077/2077fig4.jpg" alt="对照组与CTL肿瘤生长比较、实验结果、肿瘤大小变化分析。" data-altupdatedat="1788235205000" data-alt="图4"> 
图4. 通过印度墨水灌注法可视化肿瘤结节。将小鼠肉瘤细胞系CMS4-Met经尾静脉注射至小鼠体内。三天后，向荷瘤小鼠注射生理盐水（对照组）或肿瘤特异性T细胞（+CTL）。在CTL处理后的第十四天分析肺组织。白色斑点为肿瘤结节，便于对CTL治疗效果进行定量评估。

<ol><li>Ryan, M. H., Bristol, J. A., McDuffie, E., Abrams, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regression+of+extensive+pulmonary+metastases+in+mice+by+adoptive+transfer+of+antigen-specific+CD8%28%2B%29+CTL+reactive+against+tumor+cells+expressing+a+naturally+occurring+rejection+epitope%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Regression of extensive pulmonary metastases in mice by adoptive transfer of antigen-specific CD8(+) CTL reactive against tumor cells expressing a naturally occurring rejection epitope.</a> J Immunol. 167 (8), 4286-4292 (2001).</li>
<li>Caldwell, S. A., Ryan, M. H., McDuffie, E., Abrams, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Fas%2FFas+ligand+pathway+is+important+for+optimal+tumor+regression+in+a+mouse+model+of+CTL+adoptive+immunotherapy+of+experimental+CMS4+lung+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">The Fas/Fas ligand pathway is important for optimal tumor regression in a mouse model of CTL adoptive immunotherapy of experimental CMS4 lung metastases.</a> J Immunol. 171 (5), 2402-2412 (2003).</li>
<li>Liu, K., Caldwell, S. A., Greeneltch, K. M., Yang, D., Abrams, S. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CTL+Adoptive+Immunotherapy+Concurrently+Mediates+Tumor+Regression+and+Tumor+Escape%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">CTL Adoptive Immunotherapy Concurrently Mediates Tumor Regression and Tumor Escape.</a> J Immunol. 176 (6), 3374-3382 (2006).</li>
<li>Yang, D., Stewart, T. J., Smith, K. K., Georgi, D., Abrams, S. I., Liu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Downregulation+of+IFN-gammaR+in+association+with+loss+of+Fas+function+is+linked+to+tumor+progression%5BTitle%5D)+AND+%22International+journal+of+cancer%22%5BJournal%5D)">Downregulation of IFN-gammaR in association with loss of Fas function is linked to tumor progression.</a> International journal of cancer. 122 (2), 350-362 (2008).</li>
<li>Pages, F., Berger, A., Camus, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effector+memory+T+cells%2C+early+metastasis%2C+and+survival+in+colorectal+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Effector memory T cells, early metastasis, and survival in colorectal cancer.</a> N Engl J Med. 353 (25), 2654-2666 (2005).</li>
<li>Galon, J., Costes, A., Sanchez-Cabo, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type%2C+density%2C+and+location+of+immune+cells+within+human+colorectal+tumors+predict+clinical+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Type, density, and location of immune cells within human colorectal tumors predict clinical outcome.</a> Science. 313 (5795), 1960-194 (2006).</li>
<li>Strater, J., Hinz, U., Hasel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impaired+CD95+expression+predisposes+for+recurrence+in+curatively+resected+colon+carcinoma%3A+clinical+evidence+for+immunoselection+and+CD95L+mediated+control+of+minimal+residual+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Gut%22%5BJournal%5D)">Impaired CD95 expression predisposes for recurrence in curatively resected colon carcinoma: clinical evidence for immunoselection and CD95L mediated control of minimal residual disease.</a> Gut. 54 (5), 661-665 (2005).</li>
<li>Camus, M., Tosolini, M., Mlecnik, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coordination+of+intratumoral+immune+reaction+and+human+colorectal+cancer+recurrence%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+research%22%5BJournal%5D)">Coordination of intratumoral immune reaction and human colorectal cancer recurrence.</a> Cancer research. 69 (6), 2685-2693 (2009).</li>
<li>Dudley, M. E., Wunderlich, J. R., Yang, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adoptive+cell+transfer+therapy+following+non-myeloablative+but+lymphodepleting+chemotherapy+for+the+treatment+of+patients+with+refractory+metastatic+melanoma%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Oncol%22%5BJournal%5D)">Adoptive cell transfer therapy following non-myeloablative but lymphodepleting chemotherapy for the treatment of patients with refractory metastatic melanoma.</a> J Clin Oncol. 23 (10), 2346-2357 (2005).</li>
<li>Srivastava, M. K., Sinha, P., Clements, V. K., Rodriguez, P., Ostrand-Rosenberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myeloid-derived+suppressor+cells+inhibit+T-cell+activation+by+depleting+cystine+and+cysteine.+Cancer+research%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">Myeloid-derived suppressor cells inhibit T-cell activation by depleting cystine and cysteine. Cancer research.</a> 70 (1), 68-77 (2010).</li>
<li>Nagaraj, S., Gabrilovich, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+escape+mechanism+governed+by+myeloid-derived+suppressor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+research%22%5BJournal%5D)">Tumor escape mechanism governed by myeloid-derived suppressor cells.</a> Cancer research. 68 (8), 2561-2563 (2008).</li>
<li>Nguyen, D. X., Bos, P. D., Massague, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metastasis%3A+from+dissemination+to+organ-specific+colonization%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+reviews%22%5BJournal%5D)">Metastasis: from dissemination to organ-specific colonization.</a> Nature reviews. 9 (4), 274-284 (2009).</li>
<li>Heijstek, M. W., Kranenburg, O., Rinkes, B. orel, H, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+models+of+colorectal+cancer+and+liver+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Digestive+surgery%22%5BJournal%5D)">Mouse models of colorectal cancer and liver metastases.</a> Digestive surgery. 22 (1-2), 1-2 (2005).</li>
<li>Yang, D., Ud Din, N., Browning, D. D., Abrams, S. I., Liu, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+lymphotoxin+beta+receptor+with+tumor-specific+T+lymphocytes+for+tumor+regression%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Cancer+Res%22%5BJournal%5D)">Targeting lymphotoxin beta receptor with tumor-specific T lymphocytes for tumor regression.</a> Clin Cancer Res. 13 (17), 5202-5210 (2007).</li>
<li>Yang, D., Thangaraju, M., Browning, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IFN+Regulatory+Factor+8+Mediates+Apoptosis+in+Nonhemopoietic+Tumor+Cells+via+Regulation+of+Fas+Expression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">IFN Regulatory Factor 8 Mediates Apoptosis in Nonhemopoietic Tumor Cells via Regulation of Fas Expression.</a> J Immunol. 179 (7), 4775-4782 (2007).</li>
<li>Yang, D., Thangaraju, M., Greeneltch, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Repression+of+IFN+regulatory+factor+8+by+DNA+methylation+is+a+molecular+determinant+of+apoptotic+resistance+and+metastatic+phenotype+in+metastatic+tumor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+research%22%5BJournal%5D)">Repression of IFN regulatory factor 8 by DNA methylation is a molecular determinant of apoptotic resistance and metastatic phenotype in metastatic tumor cells.</a> Cancer research. 67 (7), 3301-3309 (2007).</li>
<li>Wexler, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+identification+of+experimental+pulmonary+metastases%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+National+Cancer+Institute%22%5BJournal%5D)">Accurate identification of experimental pulmonary metastases.</a> Journal of the National Cancer Institute. 36 (4), 641-645 (1966).</li>
</ol>

小鼠购自美国国家癌症研究所（弗雷德里克，马里兰州），并饲养于佐治亚医学院动物实验中心。实验操作及动物护理/福利均符合联邦法规，并经佐治亚医学院IACUC委员会批准的实验方案许可。

<table><tbody><tr><td colspan="4">&lt;p class=&quot;jove_title">溶液：&lt;/p&gt;</td></tr><tr><td colspan="4">&lt;p class=&quot;jove_step">印度墨水溶液（17）：&lt;/p&gt;</td></tr><tr><td colspan="4">&lt;ol&gt; &lt;li&gt; 将150 ml蒸馏水倒入250 ml的烧瓶中。&lt;/li&gt; &lt;li&gt; 向蒸馏水中加入4滴氢氧化铵。&lt;/li&gt; &lt;li&gt; 向氨水混合液中加入30 ml印度墨水储备液（即 Sanford Black Magic 防水绘图墨水 4465 型号 44011）。&lt;/li&gt; &lt;li&gt; 用蒸馏水定容至200 ml。溶液即可用于注射。&lt;/li&gt; &lt;/ol&gt;</td></tr><tr><td colspan="4">&lt;p class=&quot;jove_step">Fekete 溶液（17）：&lt;/p&gt;</td></tr><tr><td colspan="4">&lt;p class=&quot;jove_content">Fekete 溶液用于漂白注入印度墨水的荷瘤肺组织，以区分白色肿瘤结节与正常组织的黑色背景。&lt;/p&gt;</td></tr><tr><td colspan="4">&lt;ol&gt; &lt;li&gt; 将350 ml 95%乙醇加入1 L玻璃瓶中。&lt;/li&gt; &lt;li&gt; 加入150 ml蒸馏水&lt;/li&gt; &lt;li&gt; 加入50 ml甲醛&lt;/li&gt; &lt;li&gt; 加入25 ml冰醋酸&lt;/li&gt; &lt;/ol&gt;</td></tr></tbody></table>

实验性转移与ctl过继性转移免疫治疗小鼠模型

Experimental Metastasis and CTL Adoptive Transfer Immunotherapy Mouse Model

实验性转移小鼠模型是一种简单且具有生理相关性的转移模型。将肿瘤细胞通过尾静脉静脉内（i.v.）注射至小鼠体内，使其在肺部定植，从而模拟肿瘤细胞自发转移的最后阶段：在循环系统中存活、外渗以及在远端器官中定植。从治疗学角度来看，实验性转移模型是最简单且理想的模型，因为治疗的靶点通常是转移的终末阶段：即在远端器官中已建立的转移性肿瘤。在此模型中，将肿瘤细胞通过尾静脉静脉注射至小鼠体内，使其在肺部定植并生长。随后，将肿瘤特异性的CTL细胞通过静脉注射至携带转移灶的小鼠体内。肺转移灶的数量和大小可通过注射的肿瘤细胞数量以及肿瘤生长时间加以控制，因此可模拟从微小转移至广泛转移的各种转移阶段。肺转移灶通过墨汁灌注进行分析，从而便于肉眼观察和定量评估。

用于分析肿瘤细胞与T细胞相互作用的实验性肺转移及CTL免疫治疗小鼠模型 体内.

实验性转移与CTL过继性转移免疫治疗小鼠模型

实验性转移小鼠模型是一种简单且具有生理相关性的转移模型。将肿瘤细胞通过尾静脉注射（i.v.）注入……

本实验的总体目标是评估肿瘤特异性T细胞过继转移免疫疗法在体内的疗效。首先通过尾静脉注射将肿瘤细胞移植到小鼠体内，以建立肺转移模型；实验的第二步是用肿瘤特异性的细胞毒性T淋巴细胞（CTLs）治疗荷瘤小鼠。最后一步是使用印度墨水来观察并量化肿瘤结节。最终，可通过测量肿瘤大小和统计肿瘤结节数量，获得不同处理组的CIE结果。大家好，我叫Mary Zimmerman，是佐治亚医学院Kevin Lu博士实验室的成员。您好，我叫Shelene Hu。我是一名二年级的学生，同时也在Lou博士的实验室工作。与生存曲线等传统方法相比，该技术的主要优势在于它兼具定性和定量分析的特点。该技术的应用前景可拓展至癌症治疗领域，因为它模拟了人类癌症患者中T细胞过继性免疫治疗的过程。因此，让我们开始。在肿瘤细胞注射前一天，将最多1×10⁷个CMS4-met细胞接种至一个T75培养瓶中，加入10毫升含10%血清的RPMI培养基。为获得快速生长的肿瘤细胞，于37°C孵育过夜，次日进行注射。吸去培养基，用 PBS 洗涤细胞一次，然后在 37 摄氏度下用 0.05% 胰蛋白酶 EDTA 消化 5 分钟以收集肿瘤细胞。加入含有 10% 血清的 10 毫升 RPMI 培养基终止反应。将细胞转移至锥形管中。在室温下，将细胞于RT离心机中以1300 RPM离心3分钟。移除上清液后，将细胞重悬于10毫升新鲜的1× HBSS中进行洗涤。随后再次离心，并以相同方式重悬。使用血细胞计数板对肿瘤细胞进行计数。用HBSS稀释细胞，使每针注射所需细胞重悬于其中。在总体积为100微升的情况下，将六至八周龄的B SEA小鼠置于烧杯中，浸入温水中进行加温。为扩张尾静脉，将小鼠置于实验台上的尾静脉固定器中。使用微量注射器向侧尾静脉注射100 µL肿瘤细胞。采用无菌技术操作，以避免注射后发生感染。在注射部位施加轻微压力，直至出血停止。将小鼠放回笼中，让肿瘤生长至所需阶段。在转移当天，通过移液器反复吹打，重悬已纯化的细胞毒性T淋巴细胞（CTLs）。如文中所述，将一个培养板中的所有细胞转移至一个15毫升的锥形管中，注意液体体积不要超过管容量的三分之二。将一根无菌巴斯德吸管插入锥形管中，在细胞下方缓慢加入淋巴细胞分离液（Lymphocyte Separation Medium 或 LSM），直至总体积接近14毫升。注意不要扰动各层。在室温下以2000 RPM离心20分钟。离心结束后不得使用刹车来减缓转子，将CTLs转移至新的15毫升锥形管中。加入 HBSS 至约 10 毫升体积，用于洗涤。计数细胞后，在室温下以 1300 RPM 离心五分钟，然后重悬于 HBSS 中，调整至注射所需的细胞密度。每次注射的总体积保持在100微升。采用本视频前面展示过的相同尾静脉注射技术。将CTLs注射入荷瘤小鼠后，将小鼠放回笼中，使CTLs与肿瘤发生相互作用。通常在 CTL 治疗后 14 至 21 天处死小鼠以进行分析。为观察肺转移灶，将已处死的小鼠仰卧置于泡沫板上，固定四肢以确保充分暴露气管。用70%乙醇从腹部中段开始喷洒腹侧表面。使用剪刀沿中线剪开肋骨，并向上剪至唾液腺。暴露气管。使用镊子去除气管周围的组织。将200微升移液器吸头从气管下方穿过，并用一只手握住吸头。轻轻将气管从身体上提起并移开。将平台旋转180度。使用50毫升注射器通过气管向肺部注入印度墨水。用墨水完全充盈肺部，直至感到明显阻力。使用剪刀剪断气管。将一对镊子滑入肺下方，将肺从小鼠体内取出。在化学通风橱中，用一升烧杯中的水短暂冲洗肺组织。将肺组织转移至含有五毫升 FTI 溶液的玻璃装置中。肿瘤组织将以白色结节的形式出现在黑色的肺组织上。数分钟后，即可在 FTI 溶液中对肿瘤进行计数，并可在此溶液中无限期保存。转染了乳腺癌细胞的小鼠肺部。四T一细胞系显示出白色斑点，表明存在肿瘤。转染了对K79E具有显性阴性免疫的IRF8的小鼠显示出肿瘤细胞转移潜能增强。这些图像显示了细胞毒性T淋巴细胞（CTL）过继转移免疫治疗效果的组织学分析。注射生理盐水的荷瘤小鼠在六天后出现多个肿瘤，如箭头所示；而注射肿瘤特异性T细胞的小鼠在同一实验中则显示出肿瘤减少。印度墨水处理法为评估CTL过继转移的疗效提供了一种更简便的方法。在此方法中，荷瘤肺组织上清晰可见的白色肿瘤结节可与成功接受CTL过继转移后的肺组织明确区分，通过计数结节数量可实现组织学方法难以达到的定量程度。在进行该操作时，需注意预先对小鼠进行温育，以利于更顺利、准确地实施尾静脉注射。观看本视频后，您应能够充分理解如何通过这一简单的操作来定量评估肿瘤大小和数量，从而判断治疗效果。感谢观看，祝您的实验顺利成功。

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科研

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学与感染

实验转移和CTL过继转移免疫小鼠模型

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原位移植患者来源的癌细胞可模拟晚期结直肠癌

本文所提出的实验设计为研究淋巴结（LN）转移过程中抗原特异性CD8+ T细胞提供了一个有效的生殖模型，该模型排除了旁观者CD8+...

肿瘤发生过程中抗原特异性CD8+ T细胞动态变化评估的引流淋巴结转移模型

我们描述了一种利用流式细胞术从小鼠肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）中分离细胞并进行过继性细胞转移的方法。该方案旨在验证TILs在同基因型胰腺癌小鼠模型中对肿瘤的特异性细胞毒性，为胰腺癌的过继性细胞治疗开发提供依据。...

基于流式细胞术分离及在胰腺癌小鼠模型中对肿瘤浸润淋巴细胞进行治疗效果评估

学习肿瘤特异性CTL过继转移免疫疗法在小鼠肺转移模型中的体内应用效果。通过尾静脉注射肿瘤细胞建立转移灶，并利用印度墨水可视化定量分析肿瘤结节数量与大小，为癌症免疫治疗研究提供可靠的实验方法。

实验性转移与CTL过继性转移免疫治疗小鼠模型

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