Electroeluting的DNA碎片

Hi.Today，我们将向您展示如何进行电处理以纯化 DNA 片段，例如消化和 PCR 产物。对于克隆和测序等其他目的，电热检测可能是首选方法之一。基于 DNA 的负电荷，在电场内放置一个高细胞屏障，丢弃片段并防止其进一步迁移。

该方法允许从不同来源纯化各种大小的 DNA 片段，效率相对较高，最高可达 80%其低成本。这是电溶液与其他纯化方法（如色谱柱、填料试剂盒等）相比的另一个优势。DNA 样品首先通过繁琐的溴化物染色的 Aris 凝胶电泳进行可视化，以便可视化和鉴定要纯化的所需片段，应进行电泳。

在碎片下被很好地分离，可以精确确定尺寸过小。电泳后。使用全新的剃须刀片从凝胶中整齐地切除所需的片段，并注意使凝胶切片尽可能靠近目标条带。

执行此程序时，应适当保护免受紫外线照射并戴上手套。在用适当的燃烧缓冲液填充电泳器并注意将其洒在中间平台的表面上后，将凝胶切片放置在尽可能靠近 V 通道的轮子内。vch 通道内不应有气泡。

这可以通过用缓冲液冲洗通道以去除任何滞留的空气来避免。然后将 100 微升高盐屏障小心地添加到从近端到井的 V 通道中。腔室是封闭的，电极连接到电源，以 100 至 120 伏特开始电导。

时间流逝将取决于高达 20 kbs 的大片段的片段大小。50 分钟到 1 小时应该就足够了，小片段应每 10 分钟用紫外线监测一次，以避免进一步通过盐溶液进入末端成虫缓冲链。在这种情况下，我们用 ND one 酶消化了 560 ng 质粒，并进入每个片段释放 900 个碱基，相当于 84 ng 样品。

因此，将凝胶切片放入孔中后，电泳将在 100 伏电压下进行 25 分钟。电溶液完成后，DNA 片段被困在 V 通道内的南垫中，从通道中回收 400 微升溶液，从容器的远端，并使用连接到微坑的细尖端放入 1.5 微升微管中，通过加入两体积的冷无水乙醇进行醇沉淀，并通过涡旋混合。此外，可以添加 2 至 3 微升糖原以提高产量 DNA 回收经典管 在零下 20 摄氏度下放置 1 小时，或者在此温度下储存 在 4 摄氏度下以最高速度离心 25 分钟。

该有氧上清液加入 1 毫升冷的 70% 乙醇洗涤，以 4 摄氏度的最高速度离心 5 至 10 分钟，弃去上清液，在室温下干燥，将管子倒置，将油脂加入 10 至 15 微升无核水中，然后继续测定样品的浓度。在这种情况下，将纯化的样品重悬于 10 μL 水中，并在 260 nm 波长的分光光度计中定量，显示浓度为 6.3 ng/μL，效率为 75%。您可能认为最好只投入 10 分钟的宝贵时间购买套件。

然而，尽管在此过程中花费了大量时间，但您将能够控制许多变量，从而使您能够纯化更广泛的自然大小和来源的样品。正如您在本案例中所看到的，观察到的 75% 效率等于或优于大多数 DNA 纯化试剂盒。感谢您今天参加我们的活动。

我们希望您发现此协议对您的研究项目有用。