用于蛋白质加工的化学发光 Western Blot 检测

要进行蛋白质印迹，向磁珠中加入 20 μL 4X 上样缓冲液，并在 95 摄氏度下加热 10 分钟。同时，将裂解液对照在 95 摄氏度下加热 5 分钟。将裂解物、免疫沉淀剂和蛋白质标准品上样到 12.5% SDS 凝胶上，并在 80 伏特的恒定电压下运行。

凝胶电泳完成后，将蛋白质从 SDS 凝胶转移到硝酸纤维素膜上。转印完成后，将印迹膜放入盒子中，在封闭溶液中轻轻搅拌孵育一小时。然后，用 PBST 洗涤膜 3 次，每次 5 分钟。

要检测蛋白质，将指定稀释度的第一一抗添加到膜上，并在 4 摄氏度下轻轻搅拌孵育过夜。第二天，用 3 次 5 分钟的 PBST 洗涤膜，然后将膜与 20 毫升二抗在室温下轻轻摇动孵育 1 小时。

再次用 PBST 洗涤膜 3 次。丢弃最后一次 PBST 洗涤液后，向膜中加入大约 1 毫升辣根过氧化物底物，并检测化学发光信号。