Name: 蓝原生聚丙烯酰胺凝胶电泳（BN - PAGE）分析，从细胞裂解液多蛋白复合物 (视频) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-02-24T18:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 3 s
Description: 学习使用蓝原生聚丙烯酰胺凝胶电泳（BN-PAGE）技术分析细胞裂解液中的多蛋白复合物。该方法结合二维SDS-PAGE分离，可在天然条件下保留蛋白质相互作用，适用于研究膜受体复合物的组成与功能。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

感谢Michael Reth、Hermann Schägger和Margarita Camacho-Carvajal提供的科学支持。本工作由德国联邦教育与研究部（BMBF）资助的FORSYS项目、德国研究基金会（DFG）资助的BIOSS项目资助，并部分得到德国联邦政府与州政府卓越计划（GSC-4，斯佩曼研究生院）的支持。

<ol><li>Arnold, I., Pfeiffer, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Yeast+mitochondrial+F1F0-ATP+synthase+exists+as+a+dimer%3A+identification+of+three+dimer-specific+subunits%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+J%22%5BJournal%5D)">Yeast mitochondrial F1F0-ATP synthase exists as a dimer: identification of three dimer-specific subunits.</a> EMBO J. 17 (24), 7170-7178 (1998).</li>
<li>Camacho-Carvajal, M. M., Wollscheid, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Two-dimensional+Blue+native%2FSDS+gel+electrophoresis+of+multi-protein+complexes+from+whole+cellular+lysates%3A+a+proteomics+approach%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Cell.+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Two-dimensional Blue native/SDS gel electrophoresis of multi-protein complexes from whole cellular lysates: a proteomics approach.</a> Mol. Cell. Proteomics. 3 (2), 176-182 (2004).</li>
<li>Heiss, K., Junkes, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subproteomic+analysis+of+metal-interacting+proteins+in+human+B+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Subproteomic analysis of metal-interacting proteins in human B cells.</a> Proteomics. 5 (14), 3614-3622 (2005).</li>
<li>Sali, A., Glaeser, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+words+to+literature+in+structural+proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">From words to literature in structural proteomics.</a> Nature. 422, 216-225 (2003).</li>
<li>Schägger, H., Cramer, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+molecular+masses+and+oligomeric+states+of+protein+complexes+by+blue+native+electrophoresis+and+isolation+of+membrane+protein+complexes+by+two-dimensional+native+electrophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Analysis of molecular masses and oligomeric states of protein complexes by blue native electrophoresis and isolation of membrane protein complexes by two-dimensional native electrophoresis.</a> Anal. Biochem. 217 (2), 220-230 (1994).</li>
<li>Schägger, H., von Jagow, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blue+native+electrophoresis+for+isolation+of+membrane+protein+complexes+in+enzymatically+active+form%5BTitle%5D)+AND+%22Anal.+Biochem%22%5BJournal%5D)">Blue native electrophoresis for isolation of membrane protein complexes in enzymatically active form.</a> Anal. Biochem. 199 (2), 223-231 (1991).</li>
<li>Schamel, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biotinylation+of+protein+complexes+may+lead+to+aggregation+as+well+as+to+loss+of+subunits+as+revealed+by+Blue+Native+PAGE%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">Biotinylation of protein complexes may lead to aggregation as well as to loss of subunits as revealed by Blue Native PAGE.</a> J Immunol Methods. 252 (1-2), 171-174 (2001).</li>
<li>Schamel, W. W., Arechaga, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coexistence+of+multivalent+and+monovalent+TCRs+explains+high+sensitivity+and+wide+range+of+response%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">Coexistence of multivalent and monovalent TCRs explains high sensitivity and wide range of response.</a> J. Exp. Med. 202, 493-503 (2005).</li>
<li>Schamel, W. W., Reth, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monomeric+and+oligomeric+complexes+of+the+B+cell+antigen+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Immunity%22%5BJournal%5D)">Monomeric and oligomeric complexes of the B cell antigen receptor.</a> Immunity. 13 (1), 5-14 (2000).</li>
<li>Swamy, M., Minguet, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+native+antibody-based+mobility-shift+technique+%28NAMOS-assay%29+to+determine+the+stoichiometry+of+multiprotein+complexes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol+Methods%22%5BJournal%5D)">A native antibody-based mobility-shift technique (NAMOS-assay) to determine the stoichiometry of multiprotein complexes.</a> J Immunol Methods. 324 (1-2), 74-83 (2007).</li>
<li>Swamy, M., Siegers, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Blue+native+polyacrylamide+gel+electrophoresis+%28BN-PAGE%29+for+the+identification+and+analysis+of+multiprotein+complexes%5BTitle%5D)+AND+%22Sci+STKE%22%5BJournal%5D)">Blue native polyacrylamide gel electrophoresis (BN-PAGE) for the identification and analysis of multiprotein complexes.</a> Sci STKE. 2006 (345), 4-4 (2006).</li>
<li>Wittig, I., Schagger, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Features+and+applications+of+blue-native+and+clear-native+electrophoresis%5BTitle%5D)+AND+%22Proteomics%22%5BJournal%5D)">Features and applications of blue-native and clear-native electrophoresis.</a> Proteomics. 8, 3974-3990 (2008).</li>
</ol>

未声明利益冲突。

本研究中，我们介绍了通过非变性电泳（BN-PAGE）对线粒体蛋白复合物（MPCs）进行分析的方法。采用二维（2D）策略，首先在天然条件下分离MPCs，然后通过第二维SDS-PAGE将其进一步分解为各个独立组分。
样品由细胞裂解物制备。为了溶解许多膜蛋白复合物（MPC），需要使用适当的去垢剂，以保持蛋白复合物的结构。此处我们使用0.1%的Triton X-100。然而，每种MPC所需的最适去垢剂及其合适浓度需通过实验经验确定。例如，已有报道指出，低浓度的Triton X-100可保留F1F0-ATP酶复合物的二聚体形式（Arnold, Pfeiffer 等. 1998）。然而，较高浓度的Triton X-100则会导致二聚体解离，并相应增加单体形式的F1F0-ATP酶复合物。这与我们之前的一项研究结果一致：当使用低浓度Brij 96提取时，多价T细胞受体复合物（TCR）得以保留；而使用较高浓度或另一种称为皂苷（digitonin）的去垢剂则会导致单体TCR的提取（Schamel, Arechaga 等. 2005）。常用的可测试去垢剂包括皂苷（0.5%至1%）、Triton X-100（0.1%至0.5%）、Brij 96（0.1%至0.5%）或十二烷基麦芽糖苷（0.1%至0.5%）。这些试剂均为非离子型去垢剂，通常对维持MPC的稳定性最为有利。需注意应避免与SDS及其他强效去垢剂接触（Camacho-Carvajal, Wollscheid 等. 2004）。
为了在BN凝胶中实现MPC的分离，必须对裂解液进行透析（Camacho-Carvajal, Wollscheid 等. 2004）；（Heiss, Junkes 等. 2005）。似乎调节盐浓度或去除低分子量杂质对于获得高分辨率至关重要。值得注意的是，经过免疫纯化并随后从抗体上洗脱下来的膜组分和MPC也同样适用于BN-PAGE分析（Swamy, Siegers 等. 2006）。在这两种情况下，如果膜裂解或洗脱是在BN裂解缓冲液中进行的，则样品无需透析即可用于BN-PAGE分离。
进行BN-PAGE蛋白质分离时，需要使用考马斯亮蓝染料，该染料可非特异性地结合蛋白质并使其带上负电荷。因此，在中性pH条件下，考马斯亮蓝可使蛋白质在电泳中向阴极移动（Schägger 和 von Jagow 1991）；（Schägger, Cramer et al. 1994）。此外，考马斯亮蓝还能防止蛋白质在电泳过程中于浓缩胶中发生聚集。进行BN-PAGE时，必须使用考马斯亮蓝G250，而非考马斯亮蓝R250或胶体考马斯亮蓝染料。
在运行BN胶之前，必须确保胶的浓度百分比与目标MPC的预期大小相匹配。市面上可购买到不同梯度的预制BN胶及其配套缓冲液（Invitrogen，NativePAGE Novex Bis-Tris胶系统）。但也可以使用梯度混合器配合蠕动泵自行制备BN胶。为保证梯度完整，灌胶过程中液体应保持持续流动，并避免产生气泡。我们建议将样品的不同稀释度上样至胶中，因为过量上样可能导致电泳过程中蛋白质沉淀。此外，BN胶应在4°C下运行，以防止蛋白质降解并保持MPC的完整性。
BN-PAGE 之后，可通过考马斯亮蓝染色、银染或免疫印迹法对 MPC 进行可视化。通过考马斯亮蓝或银染显示的蛋白质条带适用于进一步的质谱分析（Camacho-Carvajal, Wollscheid 等. 2004）。若采用免疫印迹法，则需通过实验经验确定目标 MPC 的最佳转膜条件。需要注意的是，在 BN 胶转膜过程中，考马斯亮蓝也会被转移。因此，成功转膜后凝胶将变为无色，而膜上则呈现蓝色。此外，必须指出，并非所有在 SDS-PAGE 后检测中有效的初级抗体都适用于 BN-PAGE 后的免疫印迹。由于蛋白天然构象可能掩盖抗原表位，抗体可能无法识别目标 MPC。为解决此问题，可在转膜前通过将凝胶短暂置于 1× SDS 上样缓冲液中煮沸，使 BN 凝胶中的蛋白质变性。
在本示例中，我们并未直接对BN胶进行蛋白质条带的检测。相反，我们将经BN-PAGE分离的裂解液进一步通过第二维SDS-PAGE进行分离。在第二维SDS胶中，单体蛋白质由于第一维为梯度胶而第二维为线性胶，会沿一条双曲线对角线迁移（Camacho-Carvajal, Wollscheid 等. 2004）。这一特征有助于线粒体蛋白复合物（MPCs）的识别，因为它们的位置位于该双曲线对角线下方。同一特定MPC的亚基在第二维SDS-PAGE中表现为一条垂直线。而属于多个不同MPCs的组分则可根据MPC的大小在水平方向上被识别。然而需要注意的是，出现在同一条垂直线上的多个蛋白点也可能属于在BN-PAGE中迁移位置相同的独立复合物。要最终证实它们是否存在于同一MPC中，可通过基于抗体的胶迁移实验（gel shift assay）加以验证。在该实验中，细胞裂解液在进行BN-PAGE前先与针对某一已识别蛋白点所对应蛋白的抗体孵育。这将导致所有含有该蛋白的MPC在第一维中向更高分子质量方向发生迁移。其他同样属于这些MPC的蛋白质也会随之发生复合物特异性的迁移，因此可在第二维SDS胶中被明确识别。
不仅可以利用BN-PAGE分析MPCs的组成，还可确定其化学计量比（Schamel 和 Reth 2000）；（Schamel 2001），（Swamy, Minguet 等. 2007）。为此，可进行NAMOS检测（基于抗体的天然迁移率偏移检测）。与基于抗体的凝胶迁移偏移实验类似，将细胞裂解液与单克隆亚基特异性抗体孵育，从而在BN凝胶中诱导产生电泳免疫偏移，通过偏移程度可推断MPCs的化学计量关系。
总之，BN-PAGE 适用于 MPC 的鉴定及其大小、组成和相对丰度的确定。当作为 NAMOS 测定进行时，该方法还可用于确定特定 MPC 的化学计量比。由于其广泛的适用性，该技术是表征 MPC 的一种非常有用的工具（Dekker, Müller et al. 1996）；（Wittig 和 Schagger 2008）；（Wagner, Rehling et al. 2009）；（Wittig 和 Schägger 2009）。

用于分析细胞裂解液中多蛋白复合物的蓝色天然聚丙烯酰胺凝胶电泳（bn-page）

Blue Native Polyacrylamide Gel Electrophoresis (BN-PAGE) for Analysis of Multiprotein Complexes from Cellular Lysates

多蛋白复合物（MPCs）在细胞信号转导中发挥关键作用，因为大多数蛋白质都能与其他蛋白质形成具有功能或调控作用的复合物（Sali, Glaeser et al. 2003）。因此，要整合性地理解蛋白质的功能与调控机制，必须对MPCs进行详细表征，以研究蛋白质相互作用网络。为了实现MPCs的鉴定与分析，必须在天然条件下对其进行分离。在本视频中，我们介绍了利用蓝色天然聚丙烯酰胺凝胶电泳（BN-PAGE）对MPCs进行分析的方法。BN-PAGE技术能够在保持MPCs天然构象的前提下，提供比凝胶过滤或蔗糖密度超速离心更高的分辨率，因此适用于确定MPCs的大小、组成及相对丰度（Schägger 和 von Jagow 1991）；（Schägger, Cramer et al. 1994）。该方法依据蛋白质在聚丙烯酰胺基质中的流体动力学大小和形状进行分离。在此，我们以全细胞裂解液中的MPCs分析为例，强调裂解液的透析是使BN-PAGE适用于此类生物样本的关键步骤。通过第一维BN-PAGE与第二维SDS-PAGE相结合的方法，我们展示了经BN-PAGE分离的MPCs可进一步通过SDS-PAGE分解为其各个组分。凝胶分离后的MPC组分通过标准免疫印迹技术进行检测。作为BN-PAGE分析MPCs的示例，我们选用了已被充分表征的真核生物19S、20S和26S蛋白酶体。

在本视频中，我们介绍了通过蓝色天然聚丙烯酰胺凝胶电泳（BN-PAGE）对多蛋白复合物（MPCs）进行表征的方法。在第一维中，将透析后的细胞裂解液通过BN-PAGE分离，以鉴定各个MPCs。在第二维SDS-PAGE中，对感兴趣的MPCs进一步分离，以便通过免疫印迹分析其组成成分。

用于分析细胞裂解液中多蛋白复合物的蓝色天然聚丙烯酰胺凝胶电泳（BN-PAGE）

多蛋白复合物（MPCs）在细胞信号转导中发挥关键作用，因为大多数蛋白质均可与其他蛋白质形成功能性或调控性复合物……

以下实验的总体目标是利用蓝色天然聚丙烯酰胺凝胶电泳（blue native polyacrylamide gel electrophoresis）从细胞裂解液中鉴定MultiPro复合物。与SDS-PAGE不同，该方法可在天然条件下分离蛋白质，从而保留蛋白质-蛋白质相互作用。首先通过透析去除细胞裂解液中的过量盐分，使样品适用于后续的蓝色天然PAGE分离。将裂解液上样至第一维蓝色天然PAGE凝胶，在天然条件下根据蛋白质复合物的大小和形状进行分离。接下来进行第二维分离。通过变性SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，将复合物拆分为各自的组分。蛋白质可通过银染或考马斯亮蓝染色，或通过蛋白质印迹法进行检测。在接下来的演示中，此处分离的蛋白质将通过银染法进行检测，但实际将使用蛋白质印迹法（Western blotting）。大家好，我是来自德国弗莱堡马克斯·普朗克免疫生物学研究所分子免疫学系 Wolfgang Sharmel 实验室的 Brita Bloom。大家好，我是 Dina Fiala。我也来自Sham实验室。今天我们将向您展示一种从细胞裂解液中分析MultiPro复合物的实验方法。我们实验室使用该方法来研究多亚基膜受体的组成。然而，在本视频中，我们以 tic 蛋白酶体为例。现在开始。在开始此实验步骤之前，按照书面方案所述配制所有缓冲液，并将其置于 4°C 下保存。收集1000万个HEC 2 9 3细胞，于4°C下以350 × g离心5分钟，形成细胞沉淀。随后用1毫升冰预冷的PBS洗涤细胞沉淀，并通过离心重新收集洗涤后的细胞。重复此洗涤步骤两次，然后将洗涤后的细胞沉淀重悬于250 µL冰中。将样品置于冰上，用冰冷的蓝色原代裂解缓冲液重悬，并在冰上孵育15分钟。孵育结束后，在4°C下以13,000 × g离心15分钟，去除不溶性物质。同时，用加热的粗口巴氏吸管在1.5毫升微量离心管管盖上熔出一个小孔。然后将离心管置于冰上，冷却至四摄氏度。离心完成后，将裂解液转移至用于透析除盐的离心管中。将一个截留分子量为10千道尔顿的透析膜置于敞口离心管顶部。盖上盖子，并剪掉任何外露的多余透析膜。然后用石蜡膜仔细密封盖子的侧面，密封后将管子倒置并放入一个50毫升的锥形管中。以尽可能低的速度离心样品10秒。在细胞培养离心机中，准备一个100毫升烧杯，加入冷的蓝色天然电泳缓冲液（blue native dialysis buffer），并使用磁力搅拌器搅拌，每100微升样品至少使用10毫升蓝色天然电泳缓冲液。然后用镊子从锥形管中取出倒置的离心管，注意避免将其正放。用胶带将试管倒置固定在烧杯内，并去除瓶盖下方小孔处的气泡。使用弯头巴斯德吸管，开启磁力搅拌器，将样品在冷藏室中透析六小时或过夜。定期检查样品，确保搅拌过程未在透析膜处产生气泡。孵育结束后，将透析后的细胞裂解液转移至新的预冷微量离心管中，并置于冰上，直至上样到凝胶梯度中。凝胶灌制在室温下使用梯度混合器完成。将梯度混合器放置在搅拌台上，并连接一段柔性 tubing。使用阀门关闭梯度混合器的通道，并用夹子夹紧管路。将磁力搅拌子放入与管路相连的圆筒中。接着，将柔性管路穿入蠕动泵，并在其末端连接注射器针头。然后将针头置于凝胶装置顶部的两块玻璃板之间。配制4%和15%的分离胶溶液，使其总体积等于分离胶所需体积。在加入前立即添加PS和TM me。将凝胶溶液倒入梯度混合器相应的圆筒中。然后打开电源并开启阀门。按压左侧圆筒，排出连接两个凝胶储液槽通道内的气泡。以每分钟5毫升的速度启动泵。移除夹子，使凝胶在玻璃板之间缓慢流动。当凝胶暂停时，缓慢抬高针头，确保针头始终位于液面之上。让所有液体进入凝胶装置。然后轻轻覆盖异丙醇，并用蒸馏水冲洗装置。在室温下静置至少30分钟，使凝胶充分聚合。接下来，配制3.2%的浓缩胶，在使用前立即加入PS和TM me。将浓缩胶倒入分离胶上方，在玻璃板之间插入梳子，避免产生气泡。浓缩胶聚合后，立即将凝胶冷却至4°C，然后再上样。缓慢地以一定角度从凝胶平面拔出梳子。这样可使空气快速进入加样孔，从而改善加样孔的质量，以便通过蓝色天然PAGE分离透析后的细胞裂解液。将20微升铁蛋白分子量标记物和40微升透析后的裂解液加入干燥的加样孔中。在4摄氏度条件下，空的泳道中加入与样品等体积的透析缓冲液，然后在每个加样孔的样品上覆盖冰冷的阴极缓冲液。将内室加入冷的阴极缓冲液，外室加入冷的阳极缓冲液。在4°C条件下操作，施加100伏电压，直至样品进入分离胶。然后将电压升至180伏，继续电泳直至染料前沿到达凝胶底部。电泳过程需要三到四小时。进行第二维SDS凝胶电泳时，制备一块标准的10% SDS凝胶，带有一个宽泳道。一条泳道用于分子量标记物，另一条泳道加入已与SDS上样缓冲液混合并在95摄氏度下煮沸5分钟的透析裂解液对照样品。从电泳装置中取出置于玻璃板中的蓝色天然PAGE胶，轻轻撬开其中一块玻璃板。移除浓缩胶，并切下含有目标蛋白的蓝色天然PAGE胶条。将蓝色天然PAGE胶条放入SDS上样缓冲液中，在摇床中室温孵育10分钟。随后将胶条在微波炉中短暂煮沸，再继续孵育15分钟。在摇床中的 SDS 样品缓冲液里，取出 SDS 凝胶的梳子，并向加样孔中加入一些 SDS 缓冲液，然后将蓝色天然 PAGE 凝胶切片装入 SDS 凝胶的大加样孔中。注意避免产生气泡。由于凝胶切片必须准确放置在浓缩胶上，因此可使用镊子辅助操作。用SDS样品缓冲液覆盖胶片，然后上样蛋白标记物和裂解液对照。按照标准方案进行电泳和蛋白转印。在结果解读时，需要明确的是，蛋白质在第二维蓝色天然SDS-PAGE中的位置可以表明该蛋白质是否属于多蛋白复合物。由于第一维使用了梯度凝胶，单体蛋白会沿双曲线迁移；而在第二维的线性凝胶中，多蛋白复合物的亚基将位于对角线下方，形成一条垂直线。如果某种蛋白参与了不同的复合物，则会在水平方向上检测到多个条带。总之，二维蓝非变性PAGE与SDS-PAGE联用技术可用于确定多蛋白复合物的组成、大小及其相对丰度。在本实验中，通过蛋白质印迹法检测到了多种蛋白酶体或其亚基。β2 和 MCP 21 亚基可显示为垂直排列的独立条带，表明它们属于同一复合物。PA 28 与 β2 和 CP 21 位于同一条垂直线上，因此也属于该复合物的一部分。观察水平线时，可以看出 beta 2 和 MCP 21 参与了三种不同的复合物。PA 28 仅存在于其中一种复合物中。因此，这些 MultiPro 复合物可被鉴定为 20S 蛋白酶体和 20S 蛋白酶体。结合 P 28 和单独的 20 S 蛋白酶体，我们刚刚向您展示了如何使用蓝色天然 PAGE 从细胞裂解液中分离和表征天然的 MultiPro 复合物。进行此操作时，重要的是要记住仔细透析样品，避免与 SDS 接触，并始终在 4 摄氏度下操作。我们建议比较不同的去垢剂用于细胞裂解，以同时实现运动蛋白复合物的完整性与最佳溶解效果。以上就是全部内容。感谢观看，祝您的实验顺利。再见。

blue-native-polyacrylamide-gel-electrophoresis-bn-page-for-analysis

Research

科研

JoVE Journal

Biology

生物学

蓝原生聚丙烯酰胺凝胶电泳（BN - PAGE）分析，从细胞裂解液多蛋白复合物

本文介绍了一种使用 Invitrogen 公司提供的商品化 NuPAGE 电泳 Mini-Gel 系统进行标准蛋白质印迹（Western...

使用 Invitrogen NuPAGE Novex Bis-Tris MiniGel 进行蛋白质印迹实验

本视频展示了一种基于变性聚丙烯酰胺的蛋白质分离技术。该技术可根据蛋白质的分子量对其进行初步鉴定。...

基于分子量分离与可视化蛋白质的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳技术：用于蛋白质分析

在本视频中，我们演示了一种称为蓝色天然PAGE的电泳技术，用于分析线粒体呼吸蛋白复合物在其天然折叠且功能活性状态下的情况。阴离子考马斯亮蓝染料使蛋白复合物带负电荷，从而能够基于其大小和结构进行分离。...

蓝非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳：一种用于分析完整线粒体呼吸链复合物的非变性分离技术

本视频介绍了用于从组织匀浆中分离天然蛋白质复合物的多聚体PAGE技术。该技术是蓝色天然PAGE与SDS-PAGE技术的结合。分离得到的复合物可用于表征并研究其在细胞功能中的作用。...

用于分离天然蛋白质复合物的多聚体PAGE：一种结合蓝非变性PAGE与SDS-PAGE的混合分离技术，用于从组织裂解液中分离完整的多聚体蛋白质

在本视频中，我们演示了一种二维凝胶电泳方法，该方法可从人无功能性垂体腺瘤（NFPA）的肿瘤组织中获得的复杂蛋白质混合物中分离出单个蛋白质。蛋白质首先在第一维中根据其电荷进行分离，然后在第二维中根据其分子量进一步分离。...

二维聚丙烯酰胺凝胶电泳：一种基于电荷和分子量分离复杂蛋白质混合物中蛋白质的分析技术

本方案描述了如何制备并实施透明天然凝胶洗脱液相分离电泳（CN-GELFrEE），这是一种适用于从异质样品中分离非共价生物分子复合物和蛋白质的天然分离技术，且可与多种下游蛋白质分析技术兼容。...

CN-GELFrEE - 清亮天然凝胶洗脱液相组分捕获电泳

本文介绍了一种利用胺反应性蛋白质交联剂结合新型二维聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）系统，从未经修饰的组织裂解液中稳定并分离天然蛋白质复合物的方法。...

多聚体-PAGE：一种用于捕获和解析生物样品中蛋白质复合物的方法

本文介绍了蛋白质复合物的亲和纯化及其通过蓝色天然PAGE分离的实验方案，随后采用无标记定量质谱技术进行蛋白质相关性分析。该方法有助于将相互作用组解析为不同的蛋白质复合物。...

通过蓝色天然PAGE和蛋白质相关性分析解析亲和纯化蛋白质复合物

本文介绍了一种利用三维聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）技术分析油菜（B.

韧皮部汁液采样 Brassica napus 用于蛋白质和核糖核蛋白复合物的三维聚丙烯酰胺凝胶电泳

一种利用蓝色天然聚丙烯酰胺凝胶电泳（BN-PAGE）和二维SDS-PAGE解析植物类囊体蛋白复合物结构与组成的实验方案被详细描述。该方案已针对 拟南芥,...

通过蓝色天然凝胶电泳分析类囊体膜蛋白复合物

本方案展示了通过蓝色天然聚丙烯酰胺凝胶电泳分析线粒体呼吸链复合物的方法。此处描述的是应用于培养的人源细胞的实验方法。...

利用蓝色天然聚丙烯酰胺凝胶电泳与免疫印迹法分析培养的人类细胞中线粒体呼吸链复合物

学习使用蓝原生聚丙烯酰胺凝胶电泳（BN-PAGE）技术分析细胞裂解液中的多蛋白复合物。该方法结合二维SDS-PAGE分离，可在天然条件下保留蛋白质相互作用，适用于研究膜受体复合物的组成与功能。

用于分析细胞裂解液中多蛋白复合物的蓝色天然聚丙烯酰胺凝胶电泳（BN-PAGE）

探索更多视频