小鼠坐骨神经挤压损伤后的轴突再生

从一只小鼠中分离坐骨神经开始。

神经内的神经元被转染以表达荧光细胞质蛋白。

通过挤压神经以诱导损伤，并用缝线标记损伤位置。

受损的轴突片段在损伤部位发生退变，募集的巨噬细胞清除碎片。

施万细胞增殖形成引导通路，并分泌促进轴突再生的神经营养因子。轴突沿这些通路延伸，实现神经的再生。

固定神经以保存细胞结构，然后去除所有附着的非神经组织。

用缓冲液洗涤以去除残留的固定剂。

将神经置于显微镜载玻片上，加入封片剂，盖上盖玻片。

压平神经，使轴突位于同一焦平面上，以便成像。

使用落射荧光显微镜，从挤压部位追踪轴突至其远端末端

测量再生长度。

在解剖显微镜下，使用显微剪刀和显微镊子小心地将背根神经节连同神经根和坐骨神经分离出来。

随后，将坐骨神经直接转移至4%多聚甲醛中，在4摄氏度下固定过夜。为在解剖显微镜下观察并测量荧光标记的感觉轴突，需使用显微剪刀和显微镊子小心剥离固定后的坐骨神经上附着的组织和膜结构。然后，用PBS洗涤神经三次。

接下来，将坐骨神经放置在载玻片上并保持其平直。在神经周围加入80微升抗荧光淬灭剂溶液，然后盖上盖玻片。用适当压力压平整个封片组织。

随后，将展平的组织置于倒置的落射荧光显微镜下，显微镜需配备用于马赛克图像采集和图像处理的附件。测量再生轴突长度时，需从坐骨神经的挤压部位开始，追踪所有可识别的荧光标记轴突，直至其远端末端。