挤压伤后小鼠坐骨神经的轴突再生

从小鼠身上分离的坐骨神经开始。

染神经内的神经元以表达荧光细胞质蛋白。

神经被压碎以诱发损伤，并用缝合线标记。

该部位受伤的轴突段退化，募集的巨噬细胞清除碎片。

雪旺细胞增殖形成引导轨迹并分泌促进轴突再生的神经营养因子。轴突沿着这些轨道延伸，使神经再生。

固定神经以保留细胞结构，然后去除任何附着的非神经元组织。

用缓冲液洗涤以消除残留的固定剂。

将神经放在显微镜载玻片上，涂上封片，然后放置盖玻片。

神经变平，将轴突定位在同一焦平面内进行成像。

使用落射荧光显微镜，追踪轴突从挤压部位到其远端，以

测量再生长度。

解剖显微镜下用微剪刀和微镊子小心地将DRG与神经根和坐骨神经分开。

然后，在4摄氏度下直接在4%PFA中转移坐骨神经过夜。为了在解剖显微镜下对荧光标记的感觉轴突进行成像和测量，请用微剪刀和微镊子小心地剥离固定坐骨神经上的附着组织和膜。然后，用PBS清洗神经三次。

接下来，将坐骨神经放在载玻片上并保持笔直。在神经周围加入 80 微升防褪色溶液，然后在其上盖上盖玻片。用压力压平整个安装的组织。

然后，将压平的组织置于倒置落射荧光显微镜下，该显微镜配有用于马赛克采集和图像处理的附件。在测量再生轴突的长度时，追踪坐骨神经中从挤压部位到远端轴突末端的所有可识别的荧光标记轴突。