使用微板读器进行细菌生长的精确高通量分析

0 views • 3:01 min • November 28th, 2025

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从保存在甘油库存中的细菌开始,这些菌株先培养到早期指数阶段,以确保生理状态的均匀性和可重复的生长。

添加培养基和漩涡,使细菌均匀地重新悬浮。

使用新培养基连续稀释悬浮液,以获得不同起始细胞密度。

将样品装入多孔板的内孔,边缘孔内填充空白介质,以最大限度减少蒸发相关的变异性。

将平板放入微型板读器中,保持持续摇晃和适宜细菌生长的温度。

随着细菌增殖,培养物的光学密度或OD增加。

在固定间隔测量外径。

减去从空槽中获得的初始外径值,以校正背景吸收。

然后,根据固定时间间隔连续测得的OD值计算生长速率,从而实现高通量和精确的细菌生长动态量化。

为实时记录生长,向灭菌试剂储液槽中加入约25毫升M63。然后,向微管中加入900微升M63,准备进行连续稀释。接着,向解冻后的甘油高汤中加入900微升M63,并旋转。

将100微升的10倍稀释液转移到另一根含有900微升M63和漩涡的微管。重复此步骤,直到达到所需的稀释数量。现在,用八通道移液器注入200微升M63,注满一个灭菌的96孔平底微板边缘的孔。

根据参考表,将每个稀释样品200微升装入微板孔。为了避免因加热和播种效率导致分配层,切勿使用微板边缘的孔来放置样品,而是将同样品装入多个孔中,分别位于微板的不同位置。将96孔微量板放到板读器上。

在任务管理器中打开“立即阅读”,选择程序。点击“Okay”开始测量。最后,将录音保存为新的实验文件用于数据分析。

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Last updated: 11 July 2026