评估非复制性持续状态下的细胞层通透性 结核分枝杆菌

从含有非复制性持续存在阶段（NRP阶段）的结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis）的试管开始，该阶段具有增厚的外层。

向一个试管中加入玻璃珠，并振荡以机械破坏分枝杆菌的外层，增强其通透性。 

接着，将珠磨处理的分枝杆菌悬液转移至新的离心管中。

向未经处理和经珠击破碎的细胞悬液中加入荧光标记的利福平（一种抗结核抗生素）。

振荡孵育，使荧光标记的利福平进入分枝杆菌。

随着时间的推移，越来越多的利福平进入分枝杆菌。

离心样品以分离细胞，并移除含有未结合利福平的上清液。 

用新鲜培养基重悬分枝杆菌。

使用流式细胞术分析样品。当细胞通过激光束时，会发出与细胞内荧光标记的利福平成正比的荧光信号。

在不同时间点，未经处理的 NRP 细胞的荧光强度低于珠击处理的细胞。

这表明增厚的外层限制了利福平的进入，从而在宿主-病原体相互作用过程中支持细菌的持续存在。